Метод выделения токсических веществ, основанный на изолировании их этиловым спиртом подкисленным щавелевой кислотой

Метод изолирования токсических веществ подкисленным этиловым спиртом, является эффективным для выделения ядовитых соединений из гнилостного биологического материала.

2.1.1. Метод Стасса-Отто. Ход изолирования. 100 г тщательно измельченного биологического материала вносят в широкогорлую колбу вместимостью 500 мл, заливают этиловым (96°) спиртом до покрытия им твердых частиц исследуемого объекта. Смесь биологического материала и этилового спирта подкисляют 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты. Содержимое колбы периодически перемешивают стеклянной палочкой. Через некоторое время проверяют рН содержимого колбы и при необходимости прибавляют 10 %-й спиртовой раствор щавелевой кислоты до рН = 2...3. Колбу слегка закрывают пробкой, оставляют на сутки в теплом месте (25—30 °С) при периодическом перемешивании ее содержимого. После этого кислую спиртовую вытяжку сливают с биологического материала. Настаивание биологического материала с новыми порциями этилового спирта, подкисленного 10%-м раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3, производят еще 3 раза (в течение суток каждый раз). Кислые спиртовые вытяжки из биологического материала соединяют и переносят в фарфоровую чашку. Биологический материал переносят на фильтр и промывают этиловым спиртом. Этиловый спирт, которым промывают биологический материал, присоединяют к полученным вытяжкам. Объединенные спиртовые вытяжки упаривают до густоты сиропа на водяной бане, нагретой до 40 °С. К сиропообразной жидкости при перемешивании стеклянной палочкой по каплям прибавляют этиловый спирт (96°) до прекращения выпадания примесей в осадок. Образовавшийся осадок отфильтровывают, фильтр промывают этиловым спиртом. Фильтрат снова упаривают на водяной бане до густоты сиропа, как указано выше. Из сиропообразного остатка примеси осаждают этиловым спиртом. Упаривание спиртовых фильтратов и осаждение примесей этиловым спиртом из сиропообразной жидкости проводят многократно (до прекращения осаждения примесей от прибавления этилового спирта).

К очищенной таким образом сиропообразной жидкости прибавляют 25 мл воды. Если при этом образуется осадок, его отфильтровывают.

Кислую водно-спиртовую жидкость переносят в делительную воронку, прибавляют 15 мл хлороформа и легко взбалтывают в течение 5 мин, а затем отделяют хлороформную вытяжку. Кислую водно-спиртовую жидкость еще 2—3 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 15 мл). Хлороформные вытяжки из кислой водно-спиртовой жидкости соединяют, доводят до точного объёма в мерных колбах и исследуют на наличие ядовитых соединений, экстрагирующихся органическими растворителями из кислой среды. Оставшуюся в делительной воронке кислую жидкость подщелачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 9...10. Из этой подщелоченной жидкости алкалоиды и другие токсические вещества 4 раза экстрагируют новыми порциями хлороформа (по 15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют доводят до точного объёма в мерных колбах и исследуют на наличие алкалоидов и некоторых других токсических веществ основного характера.

2.1.2. Методика изолирования рекомендуемая при определении веществ группы фенотиазина. 100г ткани внутренних органов измельчают, заливают 96градусным этиловым спиртом до покрытия им твердых частиц объектов. Смесь подкисляют 10% спиртовым раствором щавелевой кислоты до реакции среды 2-3 и оставляют на 15 минут, при периодическом перемешивании. Затем проверяют кислотность смесей и оставляют на два часа при периодическом перемешивании. По истечении времени спиртовые вытяжки сливают, и биологический материал вновь заливают новой порцией подкисленного спирта и оставляют еще на два часа. Настаивание с новыми порциям подкисленного спирта, проводят еще два раза. Вытяжки фильтруют и фильтраты, из каждого объекта отдельно, выпаривают на водяной бане(40град.С) до густоты сиропа. Упаривание и обработку сиропа спиртом проводят до прекращения выпадения осадка, после прибавления к сиропу, по каплям, спирта. Освобожденные от примесей спиртовые втяжки выпаривают досуха. К сухим остаткам прибавляют по 100мл воды, нагретой до 60 градС. После охлаждения растворы профильтровывают и собирают в делительную воронку. Фильтры промывают 5% спиртовым раствором кислоты щавелевой и промывные воды присоединяют к основному фильтрату. Далее проводят очистку этиловым эфиром дважды по 50мл. Кислые вытяжки подщелачивают 50% раствором едкого натра до реакции среды 12-13 и экстрагируют 4 раза этиловым эфиром по 15.10.10мл. Далее эфирные вытяжки соединяют и взбалтывают с пятью порциями 0,5М раствора серной кислоты (10.10.10.5.5). Реэкстракты собирают в мерную колбу емкостью 50мл. Колбу нагревали до 50-60град.С на водяной бане в течение 3-х мин для удаления остатков эфира. Объем реэкстракта доводят до 50мл 0,5М раствором серной кислоты в мерной колбе. 40мл реэкстракта вносят в делительную воронку и подщелачивают 50% раствором едкого натра до реакции среды 13 по универсальной индикаторной бумажке. Содержимое воронки взбалтывают с тремя порциями диэтилового эфира по 15мл. Эфирные вытяжки фильтруют через слой безводного сульфата натрия и собирают в выпарительную чашку, наполняя каждый раз чашки только на одну треть их объёма. Полученный сухой остаток, растворяют в 10мл диэтилового эфира.