Работа № 7. Морфологические и тинкториальные свойства Mycobacterium tuberculosis

Цель: микроскопировать готовые препараты - мазки. Зарисовать. Сделать вывод.

Mycobacterium tuberculosis (окраска по Цилю-Нильсену)

__________________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

__________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

БАКТЕРИОЛОГИЯ

Работа № 8. Культуральные свойства возбудителей туберкулеза

См. теоретическую справку

Цель: описатькультуральные свойства возбудителей туберкулеза на плотной питательной среде. Сделать вывод.

 

Среда Левенштейна - Йенсена (элективная среда)

____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

СЕРОДИАГНОСТИКА

Работа № 9. Серодиагностика туберкулеза

См. теоретическую справку

Цель: учесть готовый результат ИФА, поставленного с сывороткой больного с подозрением на туберкулез. Записать вывод.

Направление:____________________________________________________________________

Ингредиенты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

Механизм:

 

Постановка:

титры 1/50 1/100 1/200 1/400 1/800 1/1600 КН КП

1 неделя

 

2 неделя

 

 

Результат:_______________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Описать препараты:

Цель: Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

1.АД-анатоксин

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

 

1.Вакцина БЦЖ

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

1.Туберкулин

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

Агглютинирующие дифтерийные сыворотки

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

 

Выполните задания для самоконтроля:

 

ДИФТЕРИЯ

 

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и ферментативные свойства _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________________

Механизм передачи___________________________________________________________________

Пути передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных _____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Клинические симптомы_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)__________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

 

ТУБЕРКУЛЕЗ

 

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и ферментативные свойства _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________________

Механизм передачи___________________________________________________________________

Пути передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных _____________________________________________________________________

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Клинические симптомы_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)__________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

 

Подпись преподавателя _________________________________________________________

ЗАДАЧИ

 

1. В туберкулезном диспансере при лабораторном обследо­вании семьи, состоящей из девочки 7 лет и трех взрослых лю­дей (матери, отца и дяди ребенка), установлено следующее:

- У девочки положительная реакция Манту. Микроскопия мокроты, ее посев и биологическая проба имеют отрицательные результаты.

- У матери обнаружены туберкулезные палочки только в посеве мокроты.

- У отца туберкулезная палочка обнаружена при микроско­пии мокроты.

- У брата матери - положительная реакция Манту, резуль­таты всех остальных исследований отрицательные.

Обследуемые	Реакция Манту	Микроскопия мокроты	Посев мокроты	Биологическая проба
Ребенок	+	-	-	-
Отец	-	+	Не проводился	-
Мать	-	-	+	Не проводилась
Брат матери	+	-	-	-

 

Вопросы: 1. У кого из них лабораторно подтверждается ди­агноз туберкулеза? 2. Кто из них должен быть оставлен под на­блюдением врача диспансера?

 

2. Ребенок 2 лет с положитель­ной реакцией Манту заболел корью. Через 2 недели после вы­здоровления у него появились субфебрильная температура, об­щее недомогание. Повторная реакция Манту оказалась отрица­тельной. Что заподозрил врач? Почему повторно была постав­лена реакция Манту? Как объяснить исчезновение аллергичес­кой реакции к туберкулину?

 

3. В инфекционную больницу поступила девочка 2-х лет с высокой температурой, жалобами на боли в горле. На слизистой зева с трудом снимающиеся серовато-белые налеты. Лечащий врач поставил диагноз дифтерия зева, ввел немедленно 5000 МE противодифтерийной сыворотки и отправил в лабораторию материал для исследования.

Оцените результат бактериологического исследования.

Вопросы 1. Какой материал взят на исследования? 2. Какие исследования назначить?

3. Подтвердился ли клинический диагноз дифтерии? Почему? 4. Правильна ли была тактика лечащего врача? Почему?

 

Пример решения задачи

Всем детям начальной школы была своевре­менно проведена ревакцинация дифтерийным анатоксином. Спу­стя 2 месяца одна ученица заболела дифтерией. Для оценки уров­ня антитоксического иммунитета в коллективе была поставлена РПГА. Оценить результаты РПГА при обследовании школьни­ков. Оформить протокол исследования. Сделать вывод.

Для учета результатов исследования выделяется планшет с реакцией РПГА.

Вопросы 1. У кого из обследованных школьников напряженный антитоксический иммунитет к дифтерии? Почему? 2. Кому из обследованных не­обходимо ввести специфический препарат? Какой? Почему? 3. Как объяснить причину заболевания дифтерией одной уче­ницы?

 

Обследуемые школьники	Метод диагнос­тики	Иссле­дуемый материал	Диагностичес­кий препарат для РПГА	Разведения сыворотки	Единица измерения активно­сти анатоксина
1/100	1/200	1/400	К
А. Б. Е.	Сероло­гичес­кий	Сыво­ротка крови	Дифтерий­ный эритроци-тарный диагностикум	+ + -	+ - -	+ - -	- - -	ИЕ-имму- ногенная единица
				«+» - склеенные эритроциты в виде «зонтика» «-» - отсутствие гемагглютинации -«пуговка»

 

Решение. Студент учитывает данные ему результаты, за­полняет протокол и делает выводы:

1. Напряженный антитоксический иммунитет к дифтерии выявлен только у школьника А., так как по результатам РНГА в сыворотке крови обследуемого обнаружен высокий титр ан­титоксических антител (1/400).

2. Обследуемым детям Б. и Е., у которых не выявлен напря­женный иммунитет, необходимо провести вакцинопрофилактику путем введения дифтерийного анатоксина, для того чтобы создать напряженный антитоксический иммунитет.

3. Объяснить причину заболевания одной из учениц в школе можно отсутствием у ней напряженного антитоксиче­ского иммунитета против дифтерии. Возможные причины: врожденный иммунодефицит, вторичный иммунодефицит, слабая экспрессия генов иммунного ответа, отсутствие вакци­нации.

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ СПРАВКА

Возбудитель дифтерии

Культуральные свойства

Наиболее характерные колонии на среде Клауберга II с добавлением теллурита калия или натрия (элективная среда для выращивания С. diphtheriae). Они вырастают в виде почти черных колоний, выделяющихся на красном фоне среды. Цвет колоний обусловлен способностью С. diphtheriae в процессе роста восстанавливать теллуристый калий до элементарного теллура.

Микробы дифтерии не являются однородными по своим культурально- биохимическим свойствам и подразделяются на биовары gravis, mitis и intermedius. На среде Клауберга II через 48 часов бактерии биовара gravis вырастают в виде круглых (d 1,5- 2 мм) колоний с неровными краями, часто имеют приподнятый центр и радиальная исчерченность. Колонии серовато- черного цвета, напоминают маргаритки. Вариант mitis дает круглые выпуклые колонии черного цвета (d 1- 1,5 мм) с ровными краями. Вариант intermedius занимает промежуточное положение. Дает черные выпуклые с блестящей поверхностью колонии.

Серодиагностика

Антитела к С. diphtheriae определяют в крови больных, начиная с первых дней болезни и повторно через 10-14 дней. Обязательным условием является определение специфических антител в динамике болезни в парных сыворотках. Диагностическое значение имеют результаты серологических исследований при нарастании титра антител не менее чем в 3-4 раза.

Для определения уровня дифтерийного антитоксина в сыворотке человека применяют несколько реакций:

РПГА

РПГА - двухкомпонентная реакция, предполагающая взаимодействие диагностикума эритроцитарного дифтерийного антигенного (представляет собой эритроциты с адсорбированным на них дифтерийным анатоксином) и антитоксических противодифтерийных антител, находящихся в сы­воротке крови обследуемых. При наличии в исследуемой сыворотке антитоксина образуется специфический комплекс: антитоксин + сенсибилизированные анатоксином э ритроциты. В результате формируется осадок в виде агглютината эритроцитов.

В нашей странеРПГА рекомендована в качестве основного метода для определения напряженности антитоксического иммунитета к С. diphtheriae, а также для оценки вакцинального иммунитета.

Оценка состоянияколлективного иммунитета требует более детальной характеристики, чем только установление процента серонегативных. Для этого следует давать развернутыепо каждому титру данные в РНГА т.е. с учетом степени напряженности. Отсутствие антител является безусловным показателем незащищенности; титры 1:10 и 1:20 можно считать индикатором пограничного иммунитета, не обеспечивающего безусловной защиты; однако заболевание при этом, как правило, протекает в легкой форме без летального исхода. Титры 1:80 и выше являются показателем защищенности группы.

Таким образом, процентное распределение показателей титров в каждом разведении дает качественную характеристику состояния иммунитета к дифтерии в обследованной группе. Например, выявление у 50% обследованных показателей пограничного иммунитета (титры 1:10, 1:20) свидетельствует о слабой защищенности группы, в которой с годами будет увеличиваться число лиц, не защищенных от дифтерии.

В настоящее время приняты следующие количественные критерии, характеризующие степень восприимчивости к дифтерии в зависимости от уровней антитоксических антител.

Содержание антитокси­ческих антител	Интерпретация результатов
< 0,01МЕ/мл	обследуемый восприимчивк дифтерии
0,01 МЕ/мл	минимальный уровень циркулирующих антител, обеспечивающий некоторуюстепень защиты
0,01-0,09 МЕ/мл	уровни циркулирующих антитоксических анти­тел, обеспечивающие некоторуюстепень защиты
0,1 МЕ/мл	защитный уровень циркулирующих антител
> 1,0 МЕ/мл	уровень антитоксина, обеспечивающий стойкуюдлительную невосприимчивость к дифтерии

 

ИФА

ИФА предназначен дляколичественного определения антибактериальных и антитоксических иммуноглобулинов А, М, G человека в сыворотке крови больных дифтерией, бактерионосителей издоровых людей. Принцип ИФА основан на образовании специфического комплекса антиген-антитело, выявляемого с помощью второго антитела, меченного пероксидазой хрена. При последующем добавлении субстратной смеси развивается ферментативная реакция, регистрируемая по появлениюокрашенного продукта. Интенсивность реакции учитывается с помощью иммуноферментного анализатора или визуально.

3. Определение титра антител к дифтерийному токсину в сыворотке крови человека в реакции нейтрализации (РН) на культуре клеток.

Метод основан на том, что метаболическая активность и рост клеток культуры ингибируется дифтерийным токсином, который, в свою очередь, может быть нейтрализован антитоксином, содержащимся в сыворотке крови. Последовательное разведение сыворотки крови человека добавляют в лунки микропланшета, в которые затем вносят дифтерийный токсин в рабочей дозе и культуру клеток. Обнаружение по окончании инкубации (t 37^оС 5-6 суток) живых клеток культуры в лунках, содержащих определенные разведения сывороток, будет указывать на соответствующий титр антител к дифтерийному токсину в тестируемых сыворотках + проба на токсигенность.