Методические указания Серологические методы

а) Реакция Вассермана. Реакцию ставят по принципу реакции связывания комплемента. Отличием является то, что при постановке реакции Вассермана может быть использован неспецифический антиген - липидная вытяжка бычье­го сердца. Возможность использования такого антигена объясняется тем, что в сыворотке крови больного повышается содержание глобулинов и изменяется степень их дисперсности. Глобулины, вступая в соединение с липидньми экс­трактами, образуют комплекс, который разрушает комплемент, и поэтому гемо­лиз не происходит (в гемолитической системе). Отсутствие гемолиза - положи­тельная реакция - серологически подтверждает диагноз "сифилис". При поста­новке серологических реакций можно использовать специфические антигены из тканевых трепонем и культуральные.

Самостоятельная работа

Цель: Учесть результат готовой реакции Вассермана, поставленной с целью выявления антител в сыворотке крови больного с подозрением на сифилис. Сделать вывод.

Направление:____________________________________________________________________

Ингредиенты:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Механизм:

 

 

Постановка:

 

 

Аг Аг Аг «К»

 

Результат:_______________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

в) Реакция иммобилизации спирохет. К исследуемому материалу прибавляют специфическую сыворотку (кровь больного сифилисом). Через несколько минут трепонемы теряют способность двигаться.

Цель: Записать необходимые компоненты и принцип постановки реакции иммо­билизации трепонем (РИТ) с целью выявления специфических антител в сыво­ротке больного сифилисом.

Ингредиенты	Пробирки
	"К"	"К"	"О"
Сыворотка здоро­вого	+	-	-
Сыворотка больно­го	-	+	+
Физ. р-р	+	-	-
Комплемент инактивированный	-	+	-
Комплемент	-	-	+
Живые тканевые трепонемы	+	+	+

Все пробирки выдерживают в анаэростате при 35⁰С 20 часов, готовят пре­парат "раздавленная капля" и микроскопируют в темном поле зрения. Процент иммобилизованных трепонем определяют по формуле:

х=Тк - То х 100, где Тк

Тк - число подвижных трепонем в контроле (с инактивированным комплементом)

То - число подвижных трепонем в опыте

Учесть результат опыта при: Тк=30, То=12

Результат: положительный, если процент иммобилизации выше 50, отри­цательный - ниже 20, слабо положительный, сомнительный - 30-50, 20-30.

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Работа № 5. Экспресс-диагностика сифилиса

Методические указания

При массовом обследовании населения используют экспресс-метод обсле­дования на сифилис. Этот метод дает значимый процент ошибки, поэтому все положительные результаты подтверждаются другими серологическими реак­циями (р. Вассермана, осадочные реакции).

Цель: Поставить и учесть результат экспресс-метода серологического обследования на сифилис.

Сыворотки обследуемых
Ингредиенты
1. Инактивирован-ная сыворот­ка	Зк	Зк	Зк	Зк	Зк
2. Эмульсия кардиолипинового антигена	1к	1к	1к	1к	1к
Ингредиенты перемешать (или встряхнуть, если реакция в планшете)
3. Физиологиче­ский раствор	1к	1к	1к	1к	1к
После выпадения хлопьев, учесть результат

Примечание: для демонстрации дается эталон учета результатов.

Положительная реакция (крупные хлопья)	Слабоположительная (хлопья средней величи­ны и мелкие)	Отрицательная (нет хлопьев)
++++ +++	++ +	-

 

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Описать препараты:

Цель: Классифицировать предложенные антимикробные препараты в соответствии с их назначением (профилактические, диагностические, лечебные).

1.Вакцина лептоспирозная инактивированная жидкая

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

 

1.Лептоспирозная агглютинирующая сыворотка

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6._____________________________________________________________________________

Антиген кардиолипиновый для микропреципитации

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

1. Ультраозвученный трепонемный антиген

2.______________________________________________________________________________

3.______________________________________________________________________________

4.______________________________________________________________________________

5.______________________________________________________________________________

6.______________________________________________________________________________

 

Выполните задания для самоконтроля:

ЛЕПТОСПИРОЗ

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и ферментативные свойства _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________________

Механизм передачи___________________________________________________________________

Пути передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных _____________________________________________________________________

 

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Клинические симптомы_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)__________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

 

СИФИЛИС

 

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и ферментативные свойства _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________________

Механизм передачи___________________________________________________________________

Пути передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных _____________________________________________________________________

 

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Клинические симптомы_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)__________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

 

БОЛЕЗНЬ ЛАЙМА

 

Таксономия возбудителя:

Семейство__________________________________________________________________

Род________________________________________________________________________

Вид________________________________________________________________________

Морфологические и тинкториальные свойства ______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Культивирование и ферментативные свойства _____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигенная структура ____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Резистентность ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Эпидемиология

Источник инфекции___________________________________________________________________

Механизм передачи___________________________________________________________________

Пути передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Факторы передачи______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Патогенность для животных _____________________________________________________________________

 

Патогенез и клиника

Входные ворота________________________________________________________________

Места первичной локализации___________________________________________________________________

Инкубационный период_________________________________________________________

Клинические симптомы_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Основные фазы патогенеза___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вид инфекции (генерализованная, локальная)__________________________________________________________________

Длительность болезни____________________________________________________________________

Иммунитет_________________________________________________________________

Лабораторная диагностика _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Неспецифическая профилактика (мероприятия) ________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Специфическая профилактика (препараты) ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Лечение (препараты) ___________________________________________________________

Подпись преподавателя _________________________________________________________

ЗАДАЧИ

 

1. В клинику поступил больной с лихорадочным заболеванием на 8-й день болезни. Местность, где проживал больной, неблагополучна по лептоспирозу. У больного была дважды взята кровь - в момент поступления и через неделю - и направлена на исследование для определения специфических антител с диагностикумом L. interrogans в реакции связывания комплемента.

Предлагается для оценки результатов исследования штатив с двумя рядами пробирок, в которых в зависимости от разведения и дня исследования видно наличие или отсутствие гемолиза. 1-й ряд соответствует постановке РСК на 8-й день заболевания: наличие ге­молиза во всех разведениях (антитела не обнаружены). 2-й ряд - РСК проведена на 15-й лень: отсутствие гемолиза в разведениях сы­воротки 1/400. 1/800. 1/1600 (обнаружены антитела в титре 1/1600).

Вопросы: 1.Под­твержден ли диагноз лептоспироза? 2. Обосновать диагности­ческую значимость проведенного исследования.)

 

2. В женскую консультацию обратились две бе­ременные женщины (А. иС.) с жалобами на сыпь. Кровь жен­щин была отправлена для постановки реакции Вассермана и РСК. Оценить результаты исследования. Оформить протокол. Предлагается для оценки результатов исследования штатив с двумя рядами пробирок, в которых в соответствующих разведе­ниях видно отсутствие или наличие гемолиза. 1-й ряд - исследова­ние сыворотки крови беременной А.: реакция Вассермана во всех разведениях положительная (отсутствие гемолиза), а РСК во всех разведениях отрицательная (наличие гемолиза). 2-й ряд пробирок соответствует анализу беременной С: положительная реакции Вассермана и РСК во всех разведениях (отсутствие гемолиза).

Вывод 1. У кого из женщин подтверждается диагноз сифилиса и почему? 2. Можно ли определить стадию заболевания, по каким призна­кам? 3. Объяснить положительный результат реакции Вассер­мана у здоровой беременной женщины.

 

3. В местности, эндемичной по лептоспирозу, после купания в пруду трое детей заболели, был подтвержден диагноз лептоспироза. Какой из специфических препаратов следует предложить для лечения детей? Какой специфический препарат и кому следует назначить для улучшения эпидемической ситуации?

Занятие № 32