Конопельцев И.Г., Муравина Е.С.

ФГБОУ ВПО Вятская государственная сельскохозяйственная академия,
Киров, Россия, e-mail: [e-mail]

Из числа заболеваний репродуктивных органов послеродового периода наиболее широкое распространение имеет острый гнойно-катаральный эндометрит. В настоящее время в ветеринарном акушерстве накоплен богатый материал по этиопатогенезу заболевания, а также по вопросам его профилактики и терапии (Конопельцев И.Г., 2004; Асоев П., Баженова Н.В., 2009; Шабунин С.В. и др., 2011). Однако вместе с тем уровень заболеваемости коров, особенно высокопродуктивных, не снижается. Современное состояние ветеринарной медицины характеризуется всё более настойчивым внедрением в практику экологически безопасных, дешевых и высокоэффективных способов и средств лечения больных животных. К ним можно отнести и озонидотерапию. В настоящее время в условиях производства при акушерской патологии и гинекологических заболеваниях у коров апробированы различные озонированные вещества, но поиск оптимизации форм их применения продолжается.

Целью работы являлась разработка нового способа терапии больных послеродовым острым эндометритом коров с использованием озонированной эмульсии на основе рыбьего жира и настоя семени льна.

Задачи исследования: - изучить возможность получения озонированной эмульсии; - установить фармако-токсикологические характеристики новой озонированной эмульсии и определить её антимикробные свойства;

- определить терапевтическую эффективность озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров.

Материал и методы исследований. Разработка методики озонидотерапии выполнена с использованием отечественного генератора медицинского озона «Озон-М-50» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства ОАО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» г. Киров, рыбьего жира, изготовленного согласно ТУ 8112-04977536-1-93.

Микробиологические исследования проводили в условиях лаборатории кафедры микробиологии Кировской государственной медицинской академии.

В качестве тест-культур использовали музейные штаммы Staphylococcus aureus 35 и Escherihia coli М-17. Оценку антимикробной активности озонированной эмульсии в отношении тест-культур проводили методом серийных разведений чистой микробной культуры, куда вносили исследуемые вещества, перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим высевом на соответствующую плотную питательную среду и инкубировали при 37^оС в течение 72 часов.

Фармако-токсикологическую оценку озонированной эмульсии осуществляли согласно нормативным документам: «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения. РД 42-28-8-89», «Методы контроля медицинских иммунобиологических препаратов вводимых людям. Методические указания. Мук 4.1/4.2.588-96», «Государственные испытания и регистрация новых медицинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96».

Научно-производственный опыт по оценке терапевтической эффективности озонированной эмульсии провели на животноводческом комплексе ЗАО «Агрофирмы «Дороничи» Кировской области на коровах черно-пестрой голштинизированной породы с молочной продуктивностью 5,1- 7 тысяч кг (Методические указания по диагностике, лечению, профилактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров, Воронеж,1986). После установления диагноза на послеродовой острый гнойно-катаральный эндометрит животным подопытной группы внутриматочно назначали озонированную эмульсию в количестве 100-50 мл с интервалом 48 часов до клинического выздоровления. Животным контрольной группы в полость матки по той же схеме вводили препарат Эндометромаг.

Результаты исследования. В результате фундаментальных изысканий было установлено, что предъявляемым требованиям по отсутствию пенообразования и повышенному содержанию озонидов отвечает эмульсия, состоящая из равных частей рыбьего жира и настоя семени льна с добавлением эмульгатора-стабилизатора.

На следующем этапе провели изучение антимикробной активности озонированной эмульсии, которую готовили путем барботирования озоно - кислородной смесью с концентрацией озона 20 мг/л и скоростью подачи кислорода 0,3 л/мин в течение пяти часов.

Путем прямого подсчета колоний, выросших на плотной питательной среде, проводилась оценка антимикробной активности. Данные опытов отображены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении E. coli

Показатель	Время	10^9	10^8	10^7	10^6	10^5	10^4	10^3	10^2
Физ. раствор	24 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК	БКМИК			-
48 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК	БКМИК			-
72 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК	БКМИК
Не озонирован. эмульсия	24 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
48 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
72 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
Озонированная эмульсия	24 ч	РОСТ ОТСУТСТВУЕТ
48 ч
72 ч

 

Таблица 2

Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении St. aureus

Показатель	Время	10^9	10^8	10^7	10^6	10^5	10^4	10^3	10^2
Физ. раствор	24 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК
48 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК
72 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК
Не озонирован. эмульсия	24 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
48 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
72 ч	СПЛР	СПЛР	СПЛР	БКМИК				-
Озонирован. эмульсия	24 ч	РОСТ ОТСУТСТВУЕТ
48 ч
72 ч

Из анализа цифрового материала таблиц 1 и 2 можно сделать заключение о том, что озонированная эмульсия при данном режиме барботажа озоно-кислородной смесью обладает выраженными антимикробными свойствами в отношении музейных штаммов E. coli и St. aureus.

Положительные результаты лабораторных исследований по определению антимикробных свойств озонированной эмульсии, явились основанием для определения её фармако-токсикологических характеристик. Для определения острой токсичности озонированную эмульсию разводили стерильным физиологическим раствором с шагом 2. Каждое разведение гомогенизировали до получения однородной масляной эмульсии и вводили внутрибрюшинно белым мышам. Максимальная из введенных доз при этом составляла 0,5 мл, что превышает более 15 лечебных доз. Объём лечебной дозы рассчитывали исходя из планируемой лечебной дозы для крупного рогатого скота (75 мл) с учётом коэффициентов отношения массы и площади поверхности тела животных. После введения данного средства за животными наблюдали в течение 7 суток, регистрируя их гибель, а также другие проявления интоксикации (изменение поведенческих, температурных реакций, снижение массы тела). Белым мышам контрольной группы внутрибрюшинно вводился физиологический раствор в объёме по 0,5 мл. Через 24 часа и 7 суток от момента введения эмульсии и физраствора натрия хлорида часть животных из каждой группы усыпляли эфирным наркозом для оценки патологоанатомической и гистологической картины. С этой же целью подвергались вскрытию все павшие в ходе опыта животные. В течение срока наблюдения у отдельных животных составляющих опытную группу, которым вводилось изучаемое средство в максимальных дозах, регистрировались отказ от пищи, снижение двигательной активности, взъерошивание волосяного покрова. Результаты эксперимента обобщены в таблице 3.

Величина ЛД₅₀ при внутрибрюшинном введении составила 0,562 мл, что превышает расчетную терапевтическую дозу более чем в 20 раз.

Вскрытие животных опытной и контрольной групп, усыпленных в контрольные сроки, не выявило у них патологии внутренних органов.

Таблица 3

Проявления острого токсического действия озонированной эмульсии в
зависимости от дозы её введения

Кол-во введенного препарата, лечебных доз	Кол-во животных в группе	Кол-во животных с проявлениями токсического действия	Кол-во погибших животных
снижение массы	изменение температуры	изменение поведенческих реакций
1,5
0,75

Для определения хронической токсичности озонированную эмульсию вводили внутрибрюшинно двум группам белых мышей в количестве, соответственно, одной (0,02 мл) и двух (0,04 мл) лечебных доз, взятых в объеме 0,5 мл. Препарат вводился пятикратно с интервалом между инъекциями 1 сутки. Животным контрольной группы в те же сроки в объеме 0,5 мл внутрибрюшинно вводился физиологический раствор. Наблюдение за лабораторными животными осуществляли в течение всего срока введения препаратов, а также на протяжении 7 суток от момента последней инъекции, регистрируя при этом возможные проявления интоксикации. Через 24 часа и 7 суток от момента последнего введения данных растворов часть животных усыпляли хлороформом для оценки патоморфологической картины. В течение срока наблюдения гибели животных, а также других патологических проявлений не было зарегистрировано. При вскрытии животных признаков дистрофии, воспаления и гемодинамических нарушений не выявлено. Гистологическое исследование секционного материала также не выявило патологических изменений внутренних органов.

Для оценки местного действия озонированную эмульсию вводили группе белых мышей внутримышечно пятикратно, с интервалом в одни сутки. Объем эмульсии для однократного введения составлял 0,02 мл (одна лечебная доза). Контрольной группе животных в таком же объеме и в те же сроки вводился физиологический раствор. За время наблюдения признаков местного воспалительного и раздражающего действия препарата не выявлено.

Следовательно, результаты исследований по оценке острой, хронической токсичности и раздражающего действия озонированной эмульсии позволили нам продолжить исследования по изучению её аллергизирующего действия.

Определение гиперчувствительности немедленного типа проводили методом воспроизведения анафилаксии у морских свинок. Для этого животных предварительно сенсибилизировали путем трехкратного введения озонированной эмульсии с интервалом между инъекциями одни сутки. Первая сенсибилизирующая инъекция проводилась подкожно, две последующие – внутримышечно.

Количество эмульсии для однократного введения составляло 0,12 мл (расчетная лечебная доза для морской свинки). Через две недели после заключительной сенсибилизирующей инъекции животным внутрибрюшинно вводили разрешающую дозу эмульсии (0,25 мл), после чего за ними наблюдали в течение 30 минут. Тяжесть шока оценивали по следующей шкале:

А – взъерошивание шерсти, почесывание лапами морды;

Б – периодическое чихание, понижение температуры;

В – спастический кашлевой синдром, падение на бок;

Г – резкое нарушение дыхания, судороги, гибель в течение 5…7 минут;

Д – реакция отсутствует.

Индекс синдрома в группе вычисляли по формуле Вейгла:

Животным группы отрицательного контроля вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций по такой же схеме вводился физиологический раствор. В качестве положительного контроля использовались животные, подготовленные к шоку сенсибилизацией нормальной лошадиной сывороткой, введенной подкожно двукратно, в количестве 0,1 мл за две недели до разрешающей внутрисердечной инъекции этого препарата в количестве 0,2 мл.

Результаты эксперимента обобщены в таблице 4.

Таблица 4

Проявления анафилаксии у морских свинок

Показатель	Количество животных в группе	Количество животных с проявлениями анафилаксии	Индекс синдрома в группе
А	Б	В	Г	Д
Опытная
Положительный контроль							2,6
Отрицательный контроль

Представленные данные показывают, что озонированная эмульсия не оказывает анафилактогенного действия на морских свинок.

Гиперчувствительность замедленного типа характеризовали по изменению массы конечности животных.

Для этого белых мышей сенсибилизировали внутрибрюшинно двукратно, с интервалом одни сутки одной лечебной дозой озонированной эмульсии (0,02 мл). Спустя 5 суток после заключительной сенсибилизирующей инъекции в подушечку одной задней лапы вводили 0,05 мл озонированной эмульсии, другой – такой же объем физиологического раствора. Через сутки животных усыпляли хлороформом, задние лапы ампутировали по уровню пяточного сустава и проводили их взвешивание. По разнице массы лап оценивали уровень воспалительной реакции (отека). Индекс отека рассчитывали по формуле:

´100%, где

Во – масса опытной лапы;

Вк – масса контрольной лапы.

В качестве контроля в данном эксперименте были использованы животные, которым, вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций в те же сроки и тех же объемах вводился физиологический раствор. Результаты эксперимента представлены в таблице 5.

Таблица 5

Проявления гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей

Препарат для сенсибилизирующей инъекции	Средняя масса опытной лапы, мг	Средняя масса контрольной лапы, мг	Индекс отека в группе, %
Озонированная эмульсия	145,4	142,7	1,89
Физиологический раствор	148,6	145,8	1,92

Как видно из представленных данных, индекс отека в обеих группах практически одинаков, что свидетельствует о том, что озонированная эмульсия не вызывает реакций гиперчувствительности замедленного типа.

Результаты по оценке терапевтической эффективности озонированной эмульсии при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите у коров показаны в таблице 6.

Таблица 6

Терапевтическая эффективность применения озонированной эмульсии при
послеродовом остром эндометрите у коров

Показатель	Озонированная эмульсия	Эндометромаг
Количество больных коров
Выздоровело, коров / %	21/100	10/100
Количество внутриматочных введений	7,0±0,4	8,9±0,5
Оплодотворилось, коров / %	21/100	10/100
Оплодотворилось после 1-го осеменения, коров / %	11 / 52,3	3/30
Коэффициент оплодотворения	1,52±0,13	1,9±0,11
Количество дней от выздоровления до стельности	52±4,1	111±9,4

Применение озонированной эмульсии при терапии коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом по совокупности признаков в сравнении с препаратом эндометромаг оказалось более эффективным. Несмотря на то, что клиническое выздоровление всех животных констатировали в обеих группах – подопытной и контрольной, однако коэффициент оплодотворения коров из числа подопытной группы составил 1,52, а из числа контрольной группы – 1,9, что указывает на большее количество затраченных доз спермы. Различие в периоде от клинического выздоровления до стельности между животными подопытной и контрольной групп составило 59 дней, что позволяет более интенсивно использовать продуктивный и репродуктивный генетический потенциал коров, лечившихся с применением озонированной эмульсии.

Таким образом, применение озонированной эмульсии при терапии коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, позволяет сократить срок болезни и период бесплодия, что обеспечивает оптимизацию воспроизводительной способности и гарантирует качество животноводческой продукции.

Литература. 1. Асоев П., Баженова Н.В. //Ветеринария, 2009, № 6. 2. Конопельцев И.Г.: автореф. дисс … докт. вет. наук.- Воронеж, 2004. 3. Шабунин С.В. с соавт.//Ветеринария, 2011, № 2.