Ефанова Л.И., Давыдова В.В, Смирнова Е.В.

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии,
Воронеж, Россия, e-mail: [e-mail]

Качественный и количественный состав влагалищного биоценоза является важным показателем репродуктивного здоровья беременных. Нормальная микрофлора обусловливает так называемую колонизационную резистентность генитального тракта, что предотвращает заселение влагалища патогенными микроорганизмами или чрезмерное размножение условно-патогенных микроорганизмов, входящих в состав нормального микроценоза (Анкирская А.С., 1999).

Нормальный состав вагинального нормобиоценоза женщин представлен различными видами микроорганизмов, среди которых основное место занимают молочнокислые бактерии (Lactobacillus 10⁸-10⁹ и Bifidobacterium 10⁵-10⁷ КОЭ/мл) – до 97% от общего количества микроорганизмов. Доля всех остальных, многочисленных представителей влагалищного биоценоза в норме не превышает 3-4% (Янковский Д.С., Дымент Г.С., 2009). Кроме лактобацилл, у здоровых женщин наиболее часто во влагалище обнаруживают непатогенные коринебактерии и коагулазонегативные стафилококки. Среди облигатно-анаэробных бактерий превалируют Bacteroides и Prevotella (Анкирская А.С., 1999).

Кузин А.И. с соавт. (2002), при исследовании влагалищной и цервикальной слизи животных на разных стадиях стельности и послеродового периода, выявляли следующие виды микроорганизмов: B. subtilis, присутствовавший в большинстве проб (85,7%) и по предположению авторов являющийся симбионтным представителем микрофлоры, а также B. megaterium (5,7%), Staph. saprophyticus, гриб Aspergillus fumigatus.

Хонин Г.Л. с соавт. (2010) высказывают предположение, что оптимальным для коров является количество бифидо- и лактобактерий 10¹ и 10³ КОЭ/мл, полученное в большинстве исследуемых проб. Однако у животных в состоянии беременности и половой охоты авторы отмечали физиологическое увеличение этих показателей до 10⁵-10⁷ КОЭ/мл. В 80,3% случаев были так же выделены условно-патогенные микроорганизмы принадлежащие к факультативным анаэробам (энтерококки, стафилококки кишечная палочка, клебсиелла и др.), которые в 21,9% случаев встречались в составе полимикробных ассоциаций, состоящих из 2 и более видов.

Zambrano-Nava S. et al. (2011) приводят результаты исследований влагалищных смывов, полученных через 90 дней после отела от здоровых коров породы Criollo Limonero, заключая, что нормальная вагинальная флора этих животных представлена преимущественно грамположительными микроорганизмами и включает A. pyogenes, S. aureus, коагулозонегативные стафилококки, E. rhusiopathiae, Bacteroides spp., и Peptostreptococcus spp..

В настоящее время наблюдается рост частоты инфекций влагалища у беременных, связанных с участием микроорганизмов, составляющих нормальную вагинальную микрофлору (Федорова Ж.П., Минуллина Н.К., 2011).

Так, в результате бактериологических исследований смывов влагалища здоровых собак и собак с клинически выраженным вагинитом (Hirsh D.C., Wiger N., 1977), в обеих группах выделили практически одинаковый состав микрофлоры, в основном представленный Corynebacterium sp., E. coli, Moraxella sp., Arcanobacterium sp., Streptococcus sp., и Staphylococcus sp.. Основное различие между группами составляло более высокое количество микроорганизмов в пробах, полученных от больных животных.

Husted J.R. (2003) проводил сравнительные исследования влагалищных смывов от 110 здоровых и больных вагинитом коров. Во всех пробах были выделены аэробные микроорганизмы, в основном представленные Acinetobacter lwoffii, Arcanobacterium pyogenes, Escherichia coli, Corynebacterium sp., Streptococcus sp., and Staphylococcus sp. Различия между видовым составом в группах больных и здоровых животных были незначительны, тогда как количественный состав имел свои особенности. В частности, Arcanobacterium pyogenes были выделены в 49% проб от животных с вагинитом против 24% проб от здоровых коров, что демонстрирует их клиническое значение в репродуктивных болезнях, а Streptococcus spp. – в 29% против 11% соответственно. Анаэробные микроорганизмы, представленные Peptostreptococcus sp., Prevotella sp., Fusobacterium sp., и Clostridium perfringens, были изолированы у 44% больных и 20% здоровых животных. Из грибов были выделены Aspergillus sp., Penicillium sp. и Mucor. Автор сообщает, что Aspergillus sp. и Mucor sp. могут быть причиной единичных абортов у коров, но в большинстве случаев их значимость сомнительна. Его исследования не выявили прямой корреляции между изоляцией грибов при вагинитах и в норме. В обоих случаях в пробах содержание грибов не было высоким и находилось примерно в одинаковом числе. Исключением был только Penicillium sp., выделенный в 44% проб при вагините и только в 27% проб от нормальных коров. Такие специфические возбудители инфекционных заболеваний репродуктивного тракта как Mycoplasma, Ureaplasma и Trichomonas foetus обнаружены не были.

Таким образом, дисбиозы влагалища, возникающие на фоне снижения резистентности организма в результате нарушения норм кормления и содержания, гормональных изменений, бесконтрольного применения антибиотиков, в зависимости от степени их проявления, могут приводить к развитию в органах репродукции процессов воспалительного характера, абортам, низкому выходу телят, развитию у них диареи и бронхопневмонии (Попов Ю.Г., 2008; Хонин Г.Л. с соавт.; 2010, Доброхотова Ю.З., Затикян Н.Г., 2008).

Так, по данным исследований Савченко Т.Н. (2011), микроэкологическому статусу матери принадлежит ведущая роль в формировании микроэкосистемы новорожденного. У детей, рожденных женщинами с нарушением биоценоза кишечника и влагалища, в сравнении с младенцами, появившимися на свет от матерей с эубиозом этих биотопов, наблюдалась пролонгированная фаза нарастающей инфекции, которая характеризуется избыточным ростом энтеробактерий, стафилококков, клебсиел, дрожжеподобных грибов рода Кандида, длительно занимающих доминирующее положение в биоценозе пищеварительного тракта.

На сегодняшний день диагностика вагинальных дисбиозов, осложненная как частым бессимптомным их течением (Федорова Ж.П., Минуллина Н.К., 2011), так и недостаточностью информации о нормальном составе микрофлоры влагалища является существенной проблемой.

Целью настоящего исследования явилось изучение и выявление особенностей состава влагалищной микрофлоры у глубокостельных коров разных типов этологической активности.

Материал и методы исследования. В опыт были включены 32 сухостойные коровы черно-пестрой голштино-фризской породы со среднегодовой молочной продуктивностью за прошедшую лактацию 7-8 тыс. кг. Типологические особенности их поведения определяли по методике Великжанина В.И. (2000), на основании которой животные были разделены на четыре группы этологической активности: инфрапассивные, пассивные, активные и ультраактивные. Для оценки послеродовой деятельности и состояния новорожденных телят использовали общепринятые методы клинического исследования.

Пробы влагалищной слизи отбирали по методике Михайлова Н.Н. с соавт. (1967). Для выделения культур и типирования микроорганизмов использовали МПА, МПБ, молочно-солевой агар, энтерококковый агар, среду Эндо, кровяной агар, глюкозосывороточный бульон и агар, АГВ-агар, среду Блаурокка, МРС-4; для изоляции микроскопических грибов – среду Сабуро (производства НИЦФ, С-Петербург). Определение видового состава микрофлоры, ее чувствительности к антибактериальным препаратам проводили общепринятые в бактериологии и микологии методами.

Результаты исследования и обсуждение. Микробиота, обнаруженная в смывах влагалищной слизи сухостойных коров, представлена 12 видами, в том числе бифидобактериями (100%), Enterococcus faecium (56,2%), Staph. epidermidis (46,9%), E. coli (46,9%), Citrobacter diversus (40,6%), спорообразующими грамположительными микробами (34,4%), Str. agalactie (15,6%), Ent. faecalis (9,4%), микроскопическими грибами рода Penicillium (15,6%), дрожжеподобными (6,25%), рода Alternaria (6,25%), Asp. fumigatus (3,1%). При бактериологическом исследовании был отмечен очень скудный рост (отсутствие в первичных посевах роста на плотных питательных средах) аэробных мезофильных и факультативно анаэробных микроорганизмов, что косвенно указывает на отсутствие признаков воспаления слизистой влагалища на момент отбора проб.

Наибольшее количество видов микроорганизмов изолировано из смывов активных коров (12), наименьшее – ультраактивных (8), против 10 видов у пассивных и 11 – у инфрапассивных коров.

У активных и пассивных коров доминирующими являются грамположительные микроорганизмы, выделенные в 37,5% и 50% случаев соответственно. Только грамотрицательные микроорганизмы были выделены в 12,5% у пассивных, активных и ультраактивных коров. При этом микрофлора, изолированная от инфрапассивных коров, в 100% случаев представлена ассоциациями грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов (75% - из 3-х видов и 25% – из 4-х видов).

Микроскопические грибы рода Penicillium выделены в 12,5-25% случаев у коров с разным типом этологической активности, рода Alternaria – в 12,5% у ультраактивных и активных коров, а дрожжеподобные грибы – в 12,5% у пассивных и инфрапассивных животных.

Энтеробактерии (E. coli, Citrobacter diversus), липосахариды которых являются одним из патогенетических факторов в развитии дисбактериоза слизистых, изолированы в 81,2% случаев, в том числе в 62,5% – у активных, 75,0% – у ультраактивных, 50% – у пассивных и в 100% – у инфрапассивных животных. При этом у активных и пассивных коров изолирован один из указанных видов энтеробактерий, в то время как у ультраактивных и инфрапассивных в 35% и 50% случаев соответственно они выявлены одновременно. Кроме того, у инфрапассивных коров установлено самое высокое содержание энтеробактерий во влагалищных смывах – 10^5,6, которое в 7,5 раз превышает концентрацию ультраактивных, в 5,1 раза – активных и в 2,9 раза – пассивных животных.

Не исключено, что у инфрапассивных коров энтероциты слизистой влагалища выделяют менее активные в отношении условно-патогенных микроорганизмов секреторные продукты, которые создают селективные преимущества для лакто- и бифидобактерий – выраженных антагонистов E. coli и Citrobacter diversus. У исследованных животных содержание во влагалищных смывах бифидобактерий было на уровне 10^4,6, при этом несколько выше оно оказалось у активных и ультраактивных коров (10^4,75 и 10^4,8 соответственно), что превышало аналогичные показатели у пассивных и инфрапассивных коров на 6,7-9,1%.

Микрофлора половых путей исследованных коров оказалась чувствительной в разной степени (от 0,4-3,3 до 76,6%) к 13 из 16 испытанных антибактериальных средств разных групп. В условиях циркуляции среди стельных коров микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью самые низкие показатели антибактериальной эффективности были у инфрапассивных (25%) и ультраактивных (16,7%) коров, тогда как наибольшую чувствительность к антимикробным средствам проявляла микрофлора, выделенная от пассивных (87,5%) и активных (50%) животных. В одном случае (3,3%) выделенные от инфрапассивной коровы культуры оказались устойчивыми к 16 испытанным лекарственным средствам.

По результатам оценки послеродового периода у коров активной и пассивной групп отмечали развитие послеродового эндометрита в 16,7-25%, а заболеваемость телят составляла от 16,7-28,6%, против 50% и 37,5-50% соответственно у коров ультраактивной и инфрапассивной групп.

Заключение. Наибольшей микробной контаминации подвергается влагалище сухостойных коров инфрапассивного типа поведения. В 100% случаев у них микрофлора представлена ассоциациями грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, обладающих высокой устойчивостью к антимикробным средствам. По уровню снижения микробной контаминации и степени риска развития послеродовой патологии воспалительного характера у коров и дисбактериоза у новорожденных телят животных разных этологических групп можно распределить в следующем порядке: инфрапассивные, ультраактивные, пассивные, активные.

Результаты выполненных исследований позволяют по новому подойти к методологии применения общестимулирующих и антимикробных средств с целью профилактики перинатальной патологии у коров через нормализацию микробиоценоза влагалища с учетом этологической активности животных.

Литература. 1. Анкирская А.С. // Гинекология, 1999, т.1, № 3.- С.80-82. 2. Великжанин В.И. Методические рекомендации по использованию этологических признаков в селекции молочного скота.- С.-Петербург, 2000.- 19 с. 3. Доброхотова Ю.З., Затикян Н.Г. // Акуш., гинекол., репродук., 2008, № 1.- С.7-9. 4. Кузин А.И. с соавт. // Ветеринария, 2002, № 11.- С.28-29. 5. Михайлов Н.Н. с соавт.// Ветеринария, 1967, № 1.- С. 80. 6. Попов Ю.Г.// Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Мат. VIII Сиб. вет. конф.- Новосибирск, 2008.- С.147-149. 7. Савченко Т.Н.// Микроэкология новорожденных: автореф. дисс. … докт. мед. наук. - Волгоград, 2011. - 37 с. 8. Федорова Ж.П., Минуллина Н.К. // Казанский медицинский журнал, 2011, т. 92, № 1.- С.112-116. 9. Хонин Г.Л. с соавт. // Ветеринария Кубани, 2010, № 5.- С.11-14. 10. Янковский Д.С., Дымент Г. С.// Здоровье женщины, 2008, № 2.- С.161-170. 11. Hirsh D.C., Wiger N.// J. of Animal Practice, 1977, V. 18. - P.25-30. 12. Husted J.R. Bacterial and Fungal Organisms in the Vagina of Normal Cows and Cows with Vaginitis. - Texas A&M University, 2003. - 22 c. 13. Zambrano-Nava S. et al.// Trop Anim Health Prod., 2011, V. 43(2).- Р.291-294.