Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Абсолютное количественное определение с использованием стандартной кривойСодержание книги
Поиск на нашем сайте В абсолютном выражении количество (например, номер копии или единица измерения массы) неизвестный образец интерполируется из ряда стандартов известного количества. Для построения стандартной кривой требуется шаблон с известной концентрацией. Затем выполняется разведение этого шаблона, и эти разведения служат стандарты. Неизвестные тестовые образцы анализируются с помощью стандартов в тот же экспериментальный прогон. Стандартная кривая, построенная из разбавленного стандарта шаблон может быть использован для определения целевого количества в неизвестном образце путем интерполяции, аналогично использованию стандартов размера молекул для определения молекулярный размер неизвестной полосы ДНК на агарозном геле. © 2006 Bio-Rad Laboratories, Inc. Все права защищены. Руководство по применению ПЦР в реальном времени 35
Пример использования стандартной кривой для определения количества копий конкретного целевая нуклеиновая кислота показана на рисунке 4.1. В этом примере нас интересовало определение количества копий гена β-актина в двух образцах А и В. 10-кратный ряд разведений был создан из образца с известной концентрацией β-актина, в результате чего был получен набор стандартов, содержащий 10 2 –10 7 копий шаблона. Стандарты и образцы затем анализировали в одном и том же цикле. Была построена стандартная кривая с логарифмом начального числа копий стандарты, нанесенные вдоль оси x, и их соответствующие значения C T, нанесенные вдоль ось у (рисунок 4.1). Уравнение для линии линейной регрессии [y = mx + b, или C T = m (количество бревен) + b] показано в верхней части графика. Основываясь на уравнении для линейной регрессии, мы можем вывести следующее Уравнение для определения количества неизвестного образца: анализ данных КПЦР в реальном времени абсолютное количественное определение © 2006 Bio-Rad Laboratories, Inc. Все права защищены. Руководство по применению ПЦР в реальном времени 36 Рис. 4.1. Пример абсолютного количественного определения с использованием стандартной кривой. Определить номер копии β-актина в неизвестных образцах A и B, 10-кратные разведения известной концентрации матрицы (10 2 –10 7 копии β-актина) анализировали с двумя неизвестными образцами в одном опыте с использованием анализа SYBR Green I специфичные для β-актина. Линия регрессии от кривой разбавления была использована для определения количества копий неизвестные образцы. Все стандартные разведения и неизвестные образцы были проанализированы в трех экземплярах на Система обнаружения в реальном времени Chromo4. N N = 10 где n = C T н - б ( ) м C T - B ( ) м Количество бревен у = -3,50х + 37,20; r 2 = 0,999 Образец Б Образец А 2 3 4 5 6 7 С T 30 25 20 15 Количество = 10
анализ данных КПЦР в реальном времени относительная количественная оценка Номера копий отдельных повторных анализов для образцов А и В были определяется с использованием их значений C T в приведенном выше уравнении. Как правило, когда копия отбираются пробы, сообщается среднее и стандартное отклонение отдельных проб, как показано в последнем столбце таблицы 4.1. Важно отметить, что стандарт Кривая может использоваться только для интерполяции, а не экстраполяции, количества неизвестного образец. Это потому, что анализ не может быть линейным вне диапазона, охватываемого стандарты проверены. Распространенные приложения ПЦР в реальном времени, которые используют абсолютную количественную оценку, включают определение числа копий хромосом или генов и определение вирусной нагрузки. Этот метод количественного определения концептуально прост, и математика анализ легко выполнить. Метод, однако, требует надежного источника шаблон известной концентрации, и стандарты должны быть усилены параллельно с образцы каждый раз, когда проводится эксперимент. 4.2 Относительная количественная оценка
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-04-12; просмотров: 86; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.119.124.204 (0.008 с.) |