Способы установления молока коров, больных маститом. Определение количества соматических клеток и примеси анормального молока в сборном.

Мастит - воспаление молочной железы, которое возникает в ответ на воздействие неблагоприятных механических, физических, химических и биологических факторов. Воспаление молочной железы у коров имеет широкое распространение. Наибольшую хозяйственно-экономическую проблему представляет скрыто протекающий субклинический мастит, который встречается в 4-5 раз чаще, чем клинически выраженный. Такая форма мастита наносит большой экономический ущерб животноводству за счет снижения молочной продуктивности, ухудшения качества молока, расстройств воспроизводительной функции, преждевременной выбраковки животных и затрат на лечение. Больные маститом коровы служат источником соматических клеток и микрофлоры в молоке, а также ингибирующих веществ в виде остаточных количеств химиотерапевтических препаратов, применяемых для лечения, что ведет к нарушению технологии приготовления сыров, молочнокислой продукции, низкое качество которых негативно сказывается на состоянии здоровья человека. Диагностика субклинического (скрытого) мастита в лактационный период. Скрыто протекающий мастит диагностируют путем исследования молока с одним из быстрых диагностических тестов (БМТ) - пробы с димастином, мастидином, мастотестом Воронежским и др. Молоко от коров, больных маститом, имеет повышенное количество лейкоцитов и измененные физико-химические свойства. Действие быстрых маститных тестов основано на выявлении увеличенного количества лейкоцитов и изменения рН молока. Исследуют цистернальное (до доения) и паренхимное (после доения) молоко. Исследования проводят на молочно-контрольных пластинках (МКП-1). Молочно-контрольная пластинка МКП-1 для диагностики мастита представляет собой пластинку с четырьмя (по числу четвертей вымени) полушаровыми лунками, которые имеют контрастное черно-белое окрашивание и кольцевые углубления, соответствующие объему 1,0 и 2,5 см³ молока. Черно-белое дно луночек облегчает выявление в молоке белых хлопьев на черном или примеси крови — на белом фоне. Между одной парой луночек сделано отверстие для обозначения луночек и соответствующих им четвертей вымени. При взятии проб молока из вымени молочно-контрольную пластинку держат отверстием по направлению к голове коровы, что позволяет затем легко определить, из какой четверти взято молоко в ту или иную луночку.При использовании МКП-1 молоко с реактивом смешивают при помощи деревянной или стеклянной палочки.При обследовании коров на мастит первичную диагностику можно проводить путем исследования молока из удоя каждой коровы при помощи 10%-ных растворов мастидина, мастотеста Воронежского или сульфанола. Исследования проводят во время контрольных доек.В случае невозможности постановки реакции сразу после отбора пробы молоко можно консервировать 10%-ным раствором бихромата калия (из расчета 1 см³ консерванта на 100 см³ молока). Нельзя фиксировать формалином, так как он нарушает нормальное течение реакции, и сгусток не образуется. Проба с мастидином. Для исследования применяют стандартный продажный 10%-ный раствор мастидина, 1 см³ которого на молочно-контрольной пластинке смешивают с 1 см³ молока. Реакцию учитывают в течение 15-20 с, по образованию желеобразного сгустка и изменению цвета смеси.Учет реакции по вязкости желе:а) отрицательная реакция - однородная жидкость или следы образования желе (+);б) сомнительная реакция — слабое желе (++), которое еще нельзя выбросить палочкой из луночки пластинки;в) положительная реакция - хорошо сформированный сгусток (от умеренного до плотного), который наполовину (+++) или целиком (++++) выбрасывается из луночки пластинки при перемешивании.Цвет смеси молока с мастидином:- светло-сиреневый, дымчатый - нормальная реакция (рН) молока;- почти белый - повышенная кислотность;- темно-сиреневый, фиолетовый - повышенная щелочность. Проба молока с мастотестом Воронежским. Он представляет собой сухой порошок темно-зеленого цвета, который хорошо растворяется в воде. Рабочий 10%-ный раствор готовят следующим образом: 10 г препарата вносят в мерную емкость и доливают до метки 100 см³ дистиллированной или питьевой свежепрокипяченной водой, подогретой до 50-60°С. Постановка пробы и учет реакции по вязкости желе аналогичны с мастидином.Цвет смеси молока с мастотестом:- желто-салатный или светло-зеленый - нормальная слабокислая реакция молока, рН 6,5-6,8;- зеленый - сдвиг в щелочную сторону, рН 6,8-6,9;- темно-зеленый, синий - повышение щелочности, рН 7,0 и выше. Проба с сульфанолом. 20%-ный раствор сульфанола (основной) представляет собой жидкость желтого цвета, полученную путем растворения сульфанола в воде. Для этого в мерную посуду вносят 20 г порошкообразного сульфанола и доливают дистиллированной или прокипяченной водой до 100 см³.В хозяйствах непосредственно перед исследованием коров на мастит при контрольном доении основной 20%-ный раствор сульфанола разбавляют в два раза обычной питьевой водой - получают 10%-ный рабочий раствор сульфанола. Процесс постановки пробы и учета результатов аналогичны с мастидином и мастотестом.Основным диагностическим признаком предполагаемого заболевания коровы маститом является образование желе на +++ или ++++ креста, а изменение цвета смеси служит ориентировочным признаком. Выявление больных маститом животных по пробам секрета из четвертей вымени. С целью определения пораженных маститом четвертей вымени пробымолока отбирают из каждой четверти от всех животных или давших положительную и сомнительную реакции с БМТ с молоком из удоя.Для этого 1 см³ молока выдаивают в соответствующую лунку молочно-контрольной пластинки и смешивают с 1 см³ одного из быстрых маститных тестов - 2%-ного раствора мастидина, 2%-ного раствора мастотеста Воронежского, 5%-ного раствора димастина или 2,5%-ного раствора сульфанола.Постановка пробы и учет реакции аналогичны при работе с 10% растворами. Для приготовления 2% раствора мастидина или 2% раствора мастотеста Воронежского к 100 см³ соответствующего основного 10% р-ра добавляют 400 см³ дистиллированной или прокипяченной теплой воды. Для приготовления 5% раствора димастина в 100 см³ дистиллированной или теплой прокипяченной воды растворяют 5 г димастина (порошок желтого или оранжево-желтого цвета). Для приготовления 2,5%-ного раствора сульфанола к 100 см³ основного 20%-ного раствора добавляют непосредственно перед применением 700 см³ воды. В каждое углубление пластинки из соответствующих четвертей вымени надаивают по 1 см³ молока, добавляют по 1 см³ раствора димастина и перемешивают в течение 20-30 сек. При нарушении секреции молока изменяется цвет и образуется желеобразный сгусток. Реакция учитывается в крестах по вязкости желе, так же как и при работе с 10%-ным мастидином. Изменение цвета является ориентирующим и дополняющим показателем.Цвет смеси молока с димастином:- оранжевый, оранжево-красный, красно-оранжевый - нормальная слабокислая реакция молока;- желтый - повышенная кислотность молока;- красный — сдвиг в сторону повышения щелочности;- алый, пунцовый, малиновый — повышенная щелочность.Исследование указанными реактивами молока (секрета) коров можно проводить с первого дня после отела до запуска. Однако следует иметь в виду, что в первые 2-3 дня после отела, перед запуском и во время запуска количество клеток, в том числе и лейкоцитов, в секрете увеличивается, изменяются его физико-химические свойства, в частности, отмечается сдвиг рН в кислую сторону после отела и в щелочную сторону - во время запуска. Поэтому секрет молочной железы может давать с БМТ сомнительную и положительную реакцию. Эта реакция, как правило, выражена слабее, чем при воспалительном процессе в вымени, и реагируют при этом все четверти одинаково. При оценке результатов в эти периоды (а также при охоте у коров) следует принимать во внимание резко положительные реакции в отдельных четвертях вымени. Проба Уайтсайда (лейкоцитарная проба). При отсутствии мастидина, димастина, мастотеста Воронежского или сульфанола в порядке исключения допускается постановка пробы с 4%-ным раствором едкого натра. В луночки МКП-1 отбирают 2,5 см³ молока из каждой четверти вымени и добавляют из автомата-клювика 1 см³ 4%-ного раствора едкого натра и смесь быстро перемешивают палочкой. Оценку результатов проводят по образованию желе. Цветовой показатель отсутствует. Особенность данной пробы состоит в том, что образование желе после добавления реактива происходит немедленно, поэтому учет результатов необходимо проводить как можно быстрее. После 8-10 с образовавшееся желе быстро разжижается, что затрудняет учет показателей реакции. Оценка реакции в крестах аналогична, как и в случае использования мастидина. Проба отстаивания. Для подтверждения диагноза на скрытый мастит ставят пробу отстаивания, для чего из четвертей вымени коров, молоко которых дало положительные реакции с быстрыми маститными тестами, после доения отбирают пробы молока (10-15 см³) и ставят на 16-18 ч в холодильник или в другое холодное место при температуре 4-10°С. На второй день учитывают результаты, просматривая пробирки с молоком. Лучше это проводить при дневном освещении. При этом обращают внимание на цвет молока, наличие осадка, толщину и характер слоя сливок.Молоко здоровых коров имеет белый или слегка синеватый цвет, осадка не образует. В молоке коров, больных маститом, на дне пробирки образуется осадок, в некоторых случаях оно становится водянистым, уменьшается слой сливок, которые могут быть тягучими, слизистыми, хлопьевидными.Основное диагностическое значение при учете результатов пробы отстаивания имеет осадок. При положительной пробе отстаивания корову считают больной скрыто протекающим маститом, и пораженную четверть подвергают лечению.В послеродовой период при отсутствии видимых изменений из каждойчетверти вымени выдаивают в пробирку 8-10 см³ молозива и просматривают его через 1-1,5 ч после отбора. В случае отклонения от нормы молозиво приобретает серовато-желтый цвет, жидкую консистенцию, столбик его расслаивается. Каталазная проба. Количество каталазы в молоке измеряют количеством кислорода, который выделяется при разложении перекиси водорода, добавленной в молоко:2Н₂О₂ 2Н₂О + О₂Чем больше в молоке каталазы, тем быстрее разлагается перекись водорода. Количество кубических сантиметров (см³) кислорода, выделившегося в течение 2 ч, называют каталазным числом.В нормальном молоке каталаза содержится в незначительном количестве, каталазное число не превышает 3. При мастите количество фермента в молоке увеличивается, и каталазное число возрастает до 4-6. В стародойном молоке оно составляет примерно 6-8, а в молозиве достигает 10-15. Приборы и реактивы. Каталазник, пипетки на 5, 10 см³, водяная баня, 3% раствор перекиси водорода, вода дистиллированная. Проведение анализа. В каталазник отмеривают 10 см³ молока и помещают в водяную баню с температурой 25±1°С на 2-3 мин. Затем вносят 3 см³ дистиллированной воды и 2 см³ перекиси водорода. Каталазник быстро закрывают пробкой и перемешивают его содержимое, затем заменяют пробку другой со стеклянной градуированной трубкой, имеющей внутренний диаметр около 2 мм, так, чтобы конец трубки в каталазнике был погружен в реакционную смесь. Уровень смеси в трубке подводят к нулевому делению. Каталазник помещают в водяную баню с температурой 25±1° С. Под давлением выделяющегося кислорода уровень молока в трубке поднимается. Количество см³ вытесненного в трубку молока равно числу см³ выделенного кислорода (каталазное число). Предварительный результат смотрят через 30 мин, окончательный – через 2 ч.

Установление количества соматических клеток в молоке. Один из важных показателей качества молока — уровень содержания в нём соматических клеток. Это клетки цилиндрического, плоского и кубического эпителия молочной железы, лейкоциты, эритроциты. В молоке даже от здоровой коровы всегда содержатся соматические клетки, отторгшиеся из секреторной части вымени. Однако при воспалительном процессе в молочной железе (мастите) лейкоциты, согласно клеточной теории воспаления, созданной Мечниковым, начинают процесс фагоцитоза. В результате усиленной миграции лейкоцитов в очаг воспаления их количество, а следовательно, и общее число соматических клеток в молоке, увеличивается. Повышенное содержание соматических клеток в молоке наблюдается в первые дни после отёла, перед запуском, во время течки и в период заболеваний животного. Поэтому надо принимать все необходимые меры, чтобы исключить из полученной продукции примесь такого молока. Снижение качества сборного молока в этом случае особенно заметно отражается при изготовлении кисломолочных продуктов и сыра.

Большое количество соматических клеток (КСК) вызывает значительные потери молока (табл. 10). Увеличение количества соматических клеток в молоке приводит к следующим изменениям: цвет продукта приобретает слабо-синий или слабо-желтый оттенок, консистенция становится водянистой, часто хлопьевидной, слизисто-творожистой, иногда пенящейся. Возникает неприятный запах, а вкус становится слабо-солено-горьким или прогорклым. Дело в том, что, уничтожая бактерии, лейкоциты образуют ферменты, не распадающиеся в результате пастеризации. Они разрушают молекулы жира и белка в молоке, что приводит к появлению у него прогорклого привкуса.

При высоком КСК в молоке происходят и другие изменения. Так, на 30-50% снижается содержание жира и лактозы, повышается содержание белка и хлора (табл. 11). Значительно уменьшаются плотность и кислотность продукта.

 

Таблица 10

Влияние количества соматических клеток на потери молока от выбраковки (средний показатель на одно животное)

Среднее КСК на 1 мл молока	Потери молока в %
100000	0
200000	2
300000	4
500000	6
600000	8
700000	10
800000	12
900000	14
1000000	16

Таблица 11

Зависимость состава молока от количества соматических клеток (КСК)

Компоненты молока, г/мл	КСК<100000	КСК<250000	КСК от 500000 до 1000000	КСК>1000000
Лактоза	4,90	4,74	4,60	4,21
Казеин	2,81	2,79	2,65	2,25
Жир	3,74	3,69	3,51	3,13
Сывороточные белки (альбумины, глобулины)	0,81	0,82	1,10	1,31
Натрий и хлор	0,148	0,158	0,212	0,252

 

Определение количества соматических клеток в молоке осуществляется согласно ГОСТ 23454-90 «Молоко. Методы определения количества соматических клеток». В настоящее время предложен ряд приборов-анализаторов, облегчающих проведение анализа. Методики, заложенные в принцип действия этих анализаторов, полностью соответствуют методу, изложенному в данном ГОСТе.

Приведем в качестве примера порядок определения количества соматических клеток на анализаторе «СОМАТОС-М».

Приборы и реактивы: вискозиметрический анализатор «СОМАТОС-М»; колбы мерные на 100 см³; пипетки градуированные на 5 и 10 см³; мастоприм, вода дистиллированная.

Перед анализом приготавливают раствор препарата «Мастоприм» следующим образом. 3,5 г препарата «Мастоприм» помещают в мерную колбу или цилиндр емкостью 100 см³ и доливают до метки подогретую до 30-35°С дистиллированную воду. Раствор перед применением взбалтывают до равномерного распределения осадка. Срок годности раствора – 24 ч.

Проведение анализа. Через минуту после включения анализатора в электросеть нажимают кнопку «РАБОТА». После поворота блока перемешивания пипеткой или шприцем емкостью 5 см³ в колбу анализатора вливают 5 см³ приготовленного раствора препарата «Мастоприм». Молоко процеживают через 4 слоя марли и перемешивают. Кислотность исследуемого молока должна быть от 16 до 21°Т, температура 20±2°С. Пипеткой или шприцем вливают в колбу анализатора 10 см³ подготовленной пробы молока. Во избежание образования пены пробу вливают по внутренней стенке пробы.

Повторно нажимают на кнопку «РАБОТА». Анализатор автоматически перемешивает пробу молока с препаратом «Мастоприм», измеряет время вытекания смеси, переводит его в концентрацию (тыс. клеток в 1см³) соматических клеток и отображает ее на индикаторе. В левой части индикатора при этом отображается время вытекания смеси.

Для объективного анализа исследование проводится двукратно. Окончательный результат анализа получают, нажав кнопки «РАБОТА» и «СРЕД». Прибор производит расчет среднего арифметического значения последних двух проб.

Пример.

«ПРОБА 1» показания индикатора «18,6 317»

«ПРОБА 2» показания индикатора  «18,4 311»

Нажатие кнопок «РАБОТА» и «СРЕД»

Показания индикатора «СРЕДНЕЕ ПО» «ПРОБ 1 и 2»

                                                                  «РАВНО 314»

Допустимое количество соматических клеток в молоке сыром в 1 см³, не более:

- высшего сорта – 2х10⁵

- первого и второго сорта – 1х10⁶

 

При отсутствии анализатора в практике определения соматических клеток можно применять ориентировочный метод с использованием 2,5%-ного раствора мастоприма (или 20%-ный раствор сульфанола).

В луночку пластинки МКП-1 вносят 1 см³ тщательно перемешанного молока и 1 см³ 2,5%-ного раствора мастоприма. Смесь перемешивают стеклянной палочкой или спичкой в течение 10 с и исследуют. Если сохраняется однородная смесь (допускаются отдельные нити), то в 1 см³ молока содержится до 500 тыс. соматических клеток, при наличии неплотного сгустка – от 500 тыс. до 1 млн. клеток. Плотный сгусток, который легко можно выбросить из лунки спичкой, свидетельствует о содержании более 1 млн. клеток.

Анормальным молоком считается продукт, полученный в первые 7 суток после отела и в последние 5 дней перед запуском, а также молоко от коров, больных маститом и другими болезнями, при которых резко возрастает содержание в нем соматических клеток.

Для определения примеси анормального молока в сборном используют также 2,5%-ный раствор мастоприма, 20%-ный раствор сульфанола или 20%-ный раствор мастипроба. Методика постановки пробы и оценки молока такая же, как описано выше. Наличие в сборном молоке соматических клеток более 500 тыс./мл свидетельствует о примеси анормального молока. Для выявления его количества в сборном смешивают в пробирке или на молочно-контрольной пластинке по 1 см³ молока и мастипроба. Если образовался плотный сгусток, то содержание анормального молока более 25%, умеренный сгусток – 20-25%, слизистый, тягучий сгусток – 15-20%, жидкая слизь – 5-10%, единичные тяжи – 1-5%, если получилась гомогенная смесь, то результат отрицательный.