Установление ингибирующих веществ с индикатором резазурином.

Метод основан на восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микроорганизмов вида Streptoccocus thermophilus.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке содержание пенициллина более 0,01 МЕ/мл; формалина — около 0,005%; перекиси водорода — более 0,01%.

Приборы и реактивы: стерилизатор паровой медицинский, редуктазник или баня водяная, термостат, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 50ºС,термометры стеклянные жидкостные, весы лабораторные общего назначения 2-го класса точности, пробирки стеклянные, пипетки, колбы, штатив для пробирок, пробки резиновые, резазурин (индикатор), молоко обезжиренное стерильное, тест-культура коллекционная (штамм Streptoccocus thermophilus).

Проведение анализа. В чистые пробирки наливают по 10 см³ исследуемого молока и закрывают стерильными резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре 6—8°С.

Одновременно проводят контрольный анализ. Для этого в пробирку наливают 10 см³ молока, предварительно проверенного накануне на отсутствие ингибирующих веществ. Это молоко может храниться до анализа в холодильнике при 6-8°С не более суток.

Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до 85-90°С с выдержкой 10 мин, затем охлаждают до 43-45°С. После этого в пробирки стерильной пи­петкой вносят по 0,3 см³ рабочей тест-культуры. Содержимое пробирок тщательно перемешивают путем трехкратного перевертывания, после чего пробирки выдерживают в течение 2 ч при температуре 42-43°С в редуктазнике или водяной бане с терморегулятором.

В пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой вносят по 1 см³ 0,05%-ного раствора резазурина с температурой не ниже 18—20°С. Содержимое пробирок тщательно перемешивают.

Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане с терморегулятором при 42—43°С в течение 15 мин.

При отсутствии в исследуемом молоке ингибирующих веществ (и в контрольной пробе) содержимое пробирок будет иметь розовый или белый цвет.

При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое пробирок будет иметь сине-стальную, сине-фиолетовую или фиолетовую окраску.

2. Установление наличия хлорсодержащих ингибиторов (гипохлорита и хлорамина).

Приборы и реактивы: пробирки, пипетки градуированные 5 и 2 см³, баня водяная на 85°С, палочки стеклянные, 7%-ный раствор йодистого калия, 15%-ный раствор крахмала, разбавленная соляная кислота в соотношении 1:2, вода дистиллированная.

Проведение анализа.

В пробирку отмеривают 5 см³ молока и добавляют 1,5 см³ раствора йодистого крахмала. Содержимое пробирки тщательно перемешивают и оценивают цвет пробы. Желтый оттенок свидетельствует о наличии хлора.

Если цвет не изменился, то добавляют 4 см³ разбавленной соляной кислоты, тщательно перемешивают палочкой и вновь оценивают цвет пробы. Желтый цвет указывает на наличие хлора.

Затем пробирки помещают в водяную баню, нагретую до температуры 85°С и выдерживают 10 мин (в это время сгусток поднимается на поверхность), затем быстро охлаждают. Далее в сыворотку под сгустком добавляют 1 см³ раствора крахмала и оценивают полученный цвет. При наличии хлора в молоке сыворотка приобретает окраску от слабо-фиолетовой до фиолетово-коричневой.