Обнаружение возбудителей бруцеллеза.

Согласно «Наставления по диагностике бруцеллеза животных» (Утверждено Главным управлением ветеринарии
Минсельхоза 30 декабря 1982 г.), для диагностики бруцеллеза используют кольцевую пробу с молоком.

Сущность реакции заключается в том, что добавленный в молоко коровы, больной бруцеллезом, окрашенный антиген (смыв культуры бруцелл, окрашенных гематоксилином) соединяется (склеивается) с антителами. Возникший комплекс антиген-антитело адсорбируется на жировых шариках, которые при термостатировании поднимаются на поверхность, образуя кольцо синего цвета. При отсутствии антител антиген распределяется равномерно в молоке, и кольцо синего цвета не образуется.

Перед взятием проб молока у коров вымя обмывают теплой водой, соски обрабатывают 70°-ным спиртом. Для исследования из каждой доли вымени берут последние порции молока в количестве 10—15 мл в отдельные стерильные пробирки с резиновыми пробками.

Молоко должно быть доставлено в лабораторию и исследовано в день отбора пробы. Если это невозможно, молоко консервируют сухой борной кислотой (0,1 г на 10 мл) или генцианвиолетом (0,4 мл 1%-ного спиртово-водного раствора краски на 10 мл молока). Консервированное молоко пригодно для исследования в течение 10 дней.

Постановка и учет кольцевой реакции с молоком (КР).
Кольцевую реакцию применяют с целью проверки благополучия стад (ферм) по бруцеллезу крупного рогатого скота и для проверки молока при продаже его на рынках.

Приборы и реактивы: водяная баня или термостат с температурой 37-38°С; уленгутовские пробирки или пробирки Флоринского; мерные пипетки на 2,0 и 1,0 см³; шприцы с иглой 50-60 мм; исследуемое молоко; антиген цветной бруцеллезный для кольцевой реакции с молоком; сыворотка позитивная бруцеллезная.

Проведение анализа. Уленгутовские пробирки устанавливают в резиновые штативы и нумеруют в соответствии с описью проб молока. В пробирки разливают по 0,05 см³ антигена, затем шприцем с иглой длиной 50—60 мм, нажимая на поршень слабыми толчками, вливают в них по 1 см³ молока и тщательно смешивают его с антигеном. Пocлe каждой пробы молока шприц двукратно промывают теплой водой.

При постановке КР в пробирках Флоринского или серологических берут по 2 см³ молока и добавляют по 0,1 см³ антигена, затем пробирки тщательно встряхивают для перемешивания молока с антигеном.
При каждой постановке реакции одновременно с испытуемыми пробами молока ставят контроли: с молоком от заведомо здоровой коровы (буйволицы); со смесью молока здоровой коровы и позитивной бруцеллезной сыворотки (0,05 см³ сыворотки на 1 см³ молока). Штативы с испытуемыми и контрольными пробами молока помещают в водяную баню или термостат при 37—38°С на 1 ч.

Учет и оценка результатов кольцевой реакции. Результаты реакции учитывают визуально сразу после извлечения штативов из водяной бани (термостата) по следующей схеме (в крестах):

(+++) — четко выраженное синее кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок (остальная часть молока остается белой);

(++) — достаточно выраженное синее кольцо в слое сливок (остальная часть молока имеет синеватый цвет);

(+) — синее кольцо в слое сливок выражено слабо, и весь столбик молока имеет синий цвет;

(—) — столбик молока остается равномерно окрашенным в первоначальный синий цвет, который был получен сразу после добавления к нему антигена, а слой сливок — белого или слегка желтоватого цвета.

 

Все пробы молока, давшие кольцевую реакцию с оценкой 3 и 2 креста, считают положительными, а с оценкой 1 крест — сомнительными.
При получении положительного или сомнительного результата КР от всех животных берут кровь для исследования на бруцеллез в РБП или РА и РСК (РДСК), проводят эпизоотологическое обследование хозяйства, клинический осмотр и исследование животных на заболевание маститами.

 

Молоко повышенной кислотности (32-33°Т), молозиво, молоко от коров, больных маститом, не дают правильных показателей по кольцевой реакции.