Определение санитарно-показательных микроорганизмов в молоке.

1. Бактерии группы кишечной палочки (БГКП). Основными санитарно-показательными микроорганизмами являются бактерии группы кишечных палочек (БГКП), объединяющие 3 рода микроорганизмов — Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, входящих в семейство Enterobacteriaceae. Они обладают многими общими морфологическими, культуральными и ферментативными свойствами. В молоке БГКП хорошо размножаются, доводя его кислотность до 60-80°Т и образуя неровный ноздреватый сгусток. В присутствии молочнокислых бактерий под влиянием выделяемых ими антибиотических веществ и кислоты рост кишечных палочек тормозится. При режимах пастеризации, принятых в молочной промышленности, кишечные палочки погибают.

Метод определения коли-титра БГКП. Под коли-титром (бродильным титром) следует понимать наименьшее количество исследуемой пробы, выраженные в см³ (вода, молоко, жидкие пищевые продукты) или в г (плотные пищевые продукты), в котором обнаруживается присутствие бактерий группы кишечных палочек. Коли-титр характеризует санитарно-гигиенический режим получения молока и условия содержания коров.

Метод основан на способности БГКП (бесспоровые, грам-отрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, в основном являющиеся представителями родов эшерихий, цитробактер, энтеробактер, клебсиелла, серация) сбраживать в питательной среде лактозу с образованием кислоты и газа при 37°С в течение 24 часов.

Приборы и реактивы: термостат; стерильная посуда: чашки Петри, пробирки диаметром 21 мм, пипетки объемом 1 см³, пробки, штативы; физиологический раствор, питательные среды (среды Кесслера, Эндо, Козера или Симмонса).

 

 

Проведение анализа. Для определения коли-титра засевают испытуемое молоко в шесть пробирок со средой Кесслера: в три по 1 см³ и в три по 0,1 см³. После инкубации в термостате при температуре 43-45°С в течение 18-24 ч, посевы просматривают и устанавливают бродильный титр сырого молока. Появление газа в пробирках свидетельствует о возможном загрязнении продукта кишечной палочкой. Отсутствие газообразования свидетельствует об отсутствии кишечной палочки в молоке.

Из пробирок со средой Кесслера, в которых было обнаружено газообразование, необходимо сделать посев на среду Эндо. Но чашки делят на четыре сектора и из каждой пробирки производят посев на отдельный сектор. Посевы в чашках (крышками вниз) выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 ч, после чего изучают выросшие колонии. Наличие красных, с металлическим отблеском или без него, розовых, бледно-розовых колоний является указанием на то, что в исследуемом молоке присутствуют бактерии группы кишечной палочки.

При наличии колоний, типичных для кишечной палочки, выделяют чистые культуры и проводят бактериоскопическое исследование окрашенных препаратов. Для этого из подозрительных колоний делают посев в пробирки с мясо-пептонным бульоном, выдерживают посевы в термостате при температуре 37°С в течение 2,5-3 ч, затем готовят препараты, окрашивают по Граму, устанавливают морфологию микроорганизма и отношение его к окраске по Граму.

Из полученной чистой культуры делают посев на среду Козера и среду с глюкозой. Засеянные пробирки со средой Козера необходимо выдержать в термостате при 37°С, а с глюкозой – при 43°С в течение 18-24 ч. Посев производят пипеткой емкостью 1 см³ путем введения в пробирку со средой 3-х капель выделенной культуры. Появление кислоты и газа в среде с глюкозой и отсутствие роста на среде Козера будет указывать на наличие группы кишечной палочки. Изменение цвета среды Козера (из оливково-зеленого в васильковый) свидетельствует о наличии бактерий, принадлежащих к группе кишечной палочки, но таких, которые не учитываются при определении коли-титра.

 

Тема №6.