Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Тема 13 Реакция диффузионной преципитации (РДП)
Цель занятия: изучить реакцию диффузионной преципитации; овладеть методикой постановки реакции. Реакция диффузионной преципитации (РДП) или реакция иммунной диффузии (РИД) основана на способности молекул антигенов и антител диффундировать между молекулами агарового геля. Если АГ и АТ специфичны друг другу, то они связываются (комплекс АГ–АТ) и образуют осадок – преципитат. Результат реакции учитывают только визуально по обнаружению в агаровом геле линии преципитации белого цвете. Для этого лучше использовать яркий источник света в затемненном помещении. РДП в ветеринарной практике используют в диагностики бешенства, лейкоза крупного рогатого скота, болезни Марека, инфекционной анемии лошадей и др. Реакция относится к экспресс – методом диагностики, очень простая и не требует стерильности в выполнении. Однако, обладает низкой чувствительностью, в связи с чем не всегда представляется возможным визуально обнаружить преципитат в агаровом покрытие. Именно поэтому специфические антигены и антитела, используемые в реакции, должны находиться в достаточной концентрации, чтобы можно было с высокой степенью вероятности выявлять линии преципитации. Методика постановки РДП 1 Готовят 1,0 %-ный раствор агара на дистиллированной воде и нагревают его на водяной бане в течение 60-90 минут до образования коллоидного раствора (золь); 2 Наливают раствор расплавленный агара ровным слоем на предметное стекло (или чашку Петри), расположенное на горизонтальной поверхности, сначала по периметру, а потом быстро заполняя середину стекла. Толщина агара должна не превышать 1,5–2,0 мм. Не допускать образования пузырей и волн в слое агара. Оставить при комнатной температуре до затвердевания агарового покрытия (агаровый гель). 2 Вырезают в агаре лунки с диаметром 5,0 мм (2,0 мм – для микрометода РДП) на расстоянии 3,0 мм друг от друга. Для этого можно использовать либо специальные штампы для РДП, представляющие собой трубочки одинакового диаметра с остро заточенными краями, расположенные на одной плоскости и на одинаковом расстоянии друг от друга (рис. 29), либо самостоятельно изготовленные бумажные трафареты, количеством лунок, расположенными строго в соответствии с оригинальным штампом. Такой трафарет помещают под стекло с застывшим агаровым гелем и с помощью любой трубки заданного диаметра вырезают лунки.
Количество и расположение лунок определяется диагностической задачей. 3 Вносят в лунки компоненты реакции (АГ, АТ). При этом лунка должна быть полностью заполнена. Одновременно с исследуемыми пробами в лунки вносят положительные контроли – антиген специфический и сыворотка специфическая, и отрицательные контроли, не содержащие вирусных антигенов (например, физиологический раствор) и специфических противовирусных антител (например, сыворотка крови от здорового донора). Предметные стёкла помещают во влажную камеру на инкубацию в течение 6 – 12 – 24 – 48 – 72 час. при температуре +37°С. Через 48-72 часа препараты можно высушить и окрасить раствором амидного чёрного, что позволяет сохранять результат реакции длительное время и создаёт возможность документирования результата путём фотографирования. 4 Проводят учёт результата РДП визуально по линии преципитации. а б в Рис. 29 Штампы для РДП: а) используется в диагностике бешенства; б) используется для постановки РДП макрометодом (Ø лунки =5,0 мм); в) используется для постановки РДП микрометодом (Ø лунки =2,0 мм).
РДП используют для индикации и идентификации вируса, для обнаружения и определения титра антител в сыворотке крови. Материальное обеспечение: обезжиренныепредметные стёкла, 1%-ный раствор агара Дифко, гильзы патрона калибра 5,6 мм, перья ученические с ручками, сыворотка крови положительная, сыворотка крови отрицательная, антиген положительный, антиген отрицательный, механические дозаторы одноканальные с одноразовыми наконечниками; расходные материалы. Примерный план занятия (2 часа) 1 Проведение тестирования студентов 2 Объяснение преподавателя по теме занятия 3 Демонстрация преподавателя 4 Самостоятельная работа студентов: а) формирование агарового покрытия на предметном стекле; б) изготовление трафарета из бумаги; в) вырезание лунок в слое агара; г) внесение компонентов реакции в лунки: д) учёт результатов РДП через 24 час. 5 Подведение итогов занятия 6 Задание к следующему занятию Контрольные вопросы 1 В чём принцип реакции диффузионной преципитации? 2 По какой методике ставят РДП? 3 В чём достоинства и недостатки РДП?
|
|||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-01-08; просмотров: 923; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.147.45.212 (0.008 с.) |