Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ:  Археология Биология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия ЭкологияТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву 
Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Тема 1 Техника безопасности при работе с вирусамиСтр 1 из 15Следующая ⇒
Введение Вирусы – это мельчайшие возбудители инфекционных болезней человека, животных, растений, которые не имеют клеточного строения, содержат собственный генетический материал, репродуцируются только в живых клетках «хозяина» и могут существовать вне клетки в форме вирионов. Вирионы вирусов внедряют свой генетический материал в другие клетки или в другой организм и становятся внутриклеточными генетическими паразитами. Заболевания, вирусная природа которых в настоящее время установлена, в течение многих столетий наносили значительный ущерб сельскому хозяйству и вред здоровью человека. Многие из них были описаны уже давно, однако, попытки установить их причину и обнаружить возбудителя долгое время оставались безуспешными. Открытие вирусов принадлежит русскому учёному ботанику – Дмитрию Иосифовичу Ивановскому (1864 – 1920 гг.). Он доказал существование нового типа возбудителя - вируса мозаичной болезни табака на основе единственной его физико-химической характеристики. Этот возбудитель обладал способностью «проходить» через бактериальные фильтры, т.е. был намного меньше бактериальной клетки. Позднее Лефлером и Фрошем был открыт вирус ящура (1897 г.), Ридом и Кэрролом - вирус желтой лихорадки (1898 г.). Новые агенты получили название вирус (virus), что означало «заразный яд». Среди объектов живой природы наряду с про – и эукариотами они составили «третье царство», условно названное Vira. По мере изучения их природы формировались представления о вирусах, как мельчайших биологических агентах, способных к размножению и обладающих наследственностью. Создание электронного микроскопа позволило увидеть вирусы и получить их изображение. Дальнейшее развитие естественных наук на молекулярном уровне значительно стимулировало развитие вирусологии. Молекулярные методы исследования показали, что как и в клетках про– и эукариот, генетическая информация у вирусов заключена в нуклеиновых кислотах. Однако, если у первых генетическую информацию несут только молекулы ДНК, то у вирусов – оба типа нуклеиновых кислот – и ДНК, и РНК. На основании этого различают ДНК – геномные и РНК – геномные вирусы. Дальнейшее изучение молекулярной биологии вирусов показало определённое противоречие раннему представлению о вирусах, как микроорганизмах. Так, у вирусов отсутствует обмен веществ, собственные белоксинтезирующие (рибосомы) и энергетические (митохондрии) системы. В отличие от бактерий и простейших вирусы являются генетическими паразитами и «конкурируют» с геномом самой клетки. Нуклеиновые кислоты вирусов довольно разнообразны. По форме они бывают линейными или кольцевыми (циркулярными), по количеству цепей – одноцепочечными или двуцепочечными, а также непрерывными или фрагментированными (сегментированными). Они заключены в капсид из белковых молекул и называются простыми (безоболочечными) вирусами. Однако, у некоторых вирусов есть дополнительная внешняя суперкапсидная оболочка – пеплос, состоящая из вирусных белков, а также углеводов и липидов самой клетки и они называются сложными (оболочечными) вирусами.
Вирусы репродуцируются только в клетках и по своему уникальному способу, который отличается от размножения всех других клеток и организмов (бинарное деление, почкование и др.). Он получил название – дизъюнктивный, т.е. разобщённый в пространстве, когда одни структуры вириона синтезируются в ядре, другие – в цитоплазме клеток; и во времени, когда вначале синтезируются вирусные белки, затем нуклеиновых кислот, и только после этого происходит сборка вирионов и их выход из клеток. Тема 4 Культивирование вирусов. Тема 11 Серологические реакции в вирусологии. Тема 12 Реакция иммуноферментного анализа (ИФА) Цель занятия: изучить реакцию иммуноферментного анализа; ознакомится с визуальным учётом результатов иммуноферментного анализа Реакция иммуноферментного анализа – ИФА или другое её название ELISA (от англ. enzyme-linked immunosorbent assay) занимает одно из ведущих мест в современной диагностике и профилактике вирусных болезней человека и животных. ИФА позволяет с высокой степенью достоверности проводить качественное выявление вирусных антигенов в ранней диагностике вирусных болезней и количественную оценку вирусных антигенов при изготовлении вакцин, диагностических препаратов и т.п. ИФА используют и для определения уровня антител в ретроспективной серодиагностике вирусных болезней, при проведении мониторинга эпизоотической обстановки, при изучении механизмов формирования иммунитета и роли различных факторов иммунной системы в патогенезе вирусных болезней.
В основе ИФА лежит принцип взаимодействия между антигенами (АГ) вируса и специфическими антителами (АТ), связанными с ферментом (АТ–ф – конъюгат), с образованием комплекса антиген – антитело (АГ–АТ–ф). Индикатором в реакции является ферментно–чувствительное вещество (субстрат), которое при окислении вызывает окрашивание реакционной смеси (рис. 26).
В качестве метки специфических антител при синтезе конъюгата для ИФА часто использую фермент – пероксидазу, полученную из стебля хрена. И тогда на этапе индикации комплекса АГ–АТ-ф вносят смесь из перекиси водорода и хромогена (субстрат). Под действием пероксидазы перекись водорода расщепляется с высвобождением свободного кислорода, который в свою очередь окисляет хромоген с образованием цветного продукта реакции. Результат реакции можно учитывать визуально. Однако, такой учёт реакции является субъективным и не всегда даёт возможность получить достоверный результат. Наиболее объективный результат получают путём определения оптической плотности раствора в спектрофотометре, которая изменяется в соответствие с повышением концентрации продуктов цветной реакции. Для индикации и идентификации вирусных антигенов чаще других используют вариант ИФА, получивший название – метод двойных антител или «сэндвич» вариант ИФА (рис. 27), в котором в качестве твёрдого носителя используют многолуночные полистироловые планшеты. Методика «сэндвич» варианта ИФА
Для обнаружения антител в сыворотке крови животных и определения титра антител используют непрямой вариант ИФА (рис. 28). Методика непрямого варианта ИФА
Достоинствами метода ИФА является его высокая чувствительность и специфичность, возможность использования в ранней диагностике болезни и в изучении динамики инфекционного процесса. Кроме того, простая методика выполнения реакции, вплоть до полной её автоматизации, позволяет одновременно проводить достаточно большое число исследований. Однако, этот метод не исключает возможность получения и некоторого процента «ложных результатов» исследований, а также требует высоких затрат на высокотехнологичное оборудование и коммерческие тест-системы в особенности зарубежных производителей. Материальное обеспечение: коммерческая тест-система для постановки ИФА; механические дозаторы одно- и восьмиканальные с одноразовыми наконечниками; расходные материалы. Примерный план занятия (2 часа) 1 Проведение тестирования студентов 2 Объяснение преподавателя по теме занятия 3 Демонстрация методики постановки ИФА 4 Самостоятельная работа студентов 5 Подведение итогов занятия 6 Задание к следующему занятию Контрольные вопросы 1 В чём принцип реакции иммуноферментного анализа? 2 Какие задачи можно решать с помощью ИФА? 3 В чём состоит методика сэндвич – ИФА? 4 Какой вариант ИФА используют для титрования сыворотки крови? 5 Как проводят учёт результатов ИФА? 6 Какие есть достоинства и недостатки в методе ИФА? Тема 15 Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА)
Цель занятия: изучить реакцию непрямой гемагглютинации; ознакомиться с методами производства эритроцитарных диагностикумов; овладеть методикой определения титра антител в реакции непрямой гемагглютинации. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) заключается в том, что эритроциты, на которых предварительно и необратимо адсорбированы или специфические антигены вируса, или специфические противовирусные антитела, приобретают способность агглютинироваться в присутствии или гомологичных антител, или гомологичных антигенов вируса. Реакцию учитывают визуально по агглютинации эритроцитов, которые используются в реакции как носители адсорбированных на них специфических белков (АГ или АТ). Положительный результат РНГА – это «зонтик», отрицательный – «пуговка». Следует отличать РНГА от РГА. В РГА эритроциты агглютинируются в результате взаимодействия их рецепторов с гемагглютинирующими белками вируса (гемагглютитнины) (рис. 30), в РНГА – через комплекс АГ–АТ (рис. 31).
Рис. 30 Схема реакции гемагглютинации (РГА)
Рис. 31 Схема реакции непрямой гемагглютинации Эритроциты, сенсибилизированные вирусными антигенами, называются эритроцитарным антигенным диагностикумом. Он используется в РНГА для обнаружения антител в сыворотке крови и определения титра антител. Эритроциты, сенсибилизированные специфическими антителами, называются эритроцитарным антительным диагностикумом. Он используется в РНГА для индикации и идентификации вирусов. Этапы приготовления эритроцитарных диагностикумов 1 Получают эритроциты от барана или птицы (куры, индейки, утки) по общепринятой методике. 2 Стабилизируют эритроциты 50,0 %-ным раствором формалина. Для этого 50 %-ную взвесь отмытых изотоническим раствором хлорида натрия и осаждённых центрифугированием при 1000 об/мин. в течение 15 мин. эритроцитов соединяют с равным объёмом (1:1) 50,0 %-ного раствора формалина. Инкубируют при 37°С в течение двух часов с периодическим перемешиванием через каждые 30 мин. Затем трижды отмывают 0,15 М раствором NaCl (рН 7,2). 3 Танизируют эритроциты путём смешивания равных объёмов (1:1) 3,0 %-ной взвеси эритроцитов на физиологическом растворе (рН 7,2) и раствора танина в разведении 1:20 000. Инкубируют 10-15 мин. при 37°С и центрифугируют при 1000 об/мин. в течение 15 мин. Удаляют надосадочную жидкость, осадок танизированных эритроцитов трёхкратно промывают фосфатным буферным раствором (рН 7,2). 4 Готовят для сенсибилизации 10 %-ную взвесь эритроцитов на 0,15 М фосфатном буфере (рН 6,4) и смешивают с равным объёмом (1:1) специфических вирусных антигенов. Инкубируют 60 минут при температуре 37° С, перемешивая через каждые 15 мин. Затем центрифугируют при 1000 об/мин. в течение 15 мин. и трижды промывают фосфатным буферным раствором (рН 7,2).
5 Разводят осадок сенсибилизированных эритроцитов до 1,0 %-ного раствора в фосфатном буферном растворе (рН 7,2) с добавлением одного процента сыворотки кролика (для стабилизации эритроцитов). 6 Хранят готовые эритроцитарные диагностикумы при температуре +2-+8° С и используют в РНГА в соответствии с инструкцией по применению. Методика определения титра антител в РНГА с использованием эритроцитарного антигенного диагностикума РНГА ставят микрометодом в специальных иммунологических 96-луночных планшетах. 1 Готовят последовательные двукратные разведения исследуемой пробы сыворотки крови. Для этого в лунки вносят по 50,0 мкл физиологического раствора (рН 7,2). В лунку № 1 вносят 50,0 мкл исследуемой сыворотки, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 2, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 3 и так далее до пятой лунки. Из лунки № 5 после перемешивания удаляют 50,0 мкл разведённой сыворотки (1:32). 2 Одновременно в лунках №№ 6, 7, 8, 9 ставят следующие контроли: в лунку № 6 (контроль исследуемой сыворотки крови на наличие гемагглютининов) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл неразведённой сыворотки крови; в лунку № 7 (контроль эритроцитарного диагностикума на самоагглютинацию) вносят 50,0 мкл физиологического раствора; в лунку № 8 (контроль активности эритроцитарного диагностикума) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл сыворотки специфической (SS); в лунку № 9 (контроль специфичности эритроцитарного диагностикума) вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл сыворотки отрицательной (SN). 3 Вносят во все лунки (кроме лунки № 6) 50,0 мкл эритроцитарного антигенного диагностикума (ЭAS), в лунку № 6 - 50,0 мкл не сенсибилизированных эритроцитов. 4 Инкубируют 1 час при комнатной температуре. 5 Учитывают результаты РНГА по гемагглютинации 6 Определяют титр антител в исследуемой сыворотке крови За титр антител в РНГА принимают то наибольшее разведение сыворотки крови, которое ещё вызывает агглютинацию сенсибилизированных эритроцитов не менее, чем на два креста (++). Протокол определения титра антител в РНГА представлен в таблице 13. Таблица 13 Протокол определения титра антител в РНГА
Компоненты Реакции |
Разведения сыворотки Sх |
КОНТРОЛИ | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1:2 | 1:4 | 1:8 | 1:16 | 1:32 | SX |
ЭА S | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 1 Физ.р-р (мкл) | 50,0 | 50,0 | 50,0 | 50,0 | 50,0 |
50,0 |
50,0 |
50,0 | 50,0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 2 Исследуемая сыворотка Sх | 50,0 |
Перенос по 50,0 |
50,0 | – | – | – | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 3 Сыворотка специфическая SS | – | – | – | – | – | – | – |
50,0 | – | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 4 Сыворотка отрицательная SN | – | – | – | – | – | – | – | – | 50,0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 5 ЭА S | 50,0 | 50,0 | 50,0 | 50,0 | 50,0 | – |
50,0 |
50,0 | 50,0 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 6 Эр. не сенси- билизированные | – | – | – | – | – |
50,0 | – | – | – | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| 6 Учёт результата | +++ | ++ | ++ | – | – | – | – | +++ | – | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
АГ АТ-ф АГ-АТ-ф субстрат цветное
окрашивание
Рис. 27 Схема «сэндвич» варианта ИФА
Рис. 28 Схема непрямого варианта ИФА
Согласно результатам агглютинации сенсибилизированных эритроцитов, титр антител в сыворотке S х равен 1: 8 - большее из двух разведений сыворотки с агглютинацией на ++ (табл.13).
РНГА относится экспресс - методу, характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, даёт возможность проводить раннюю диагностику болезни, а также отличается простой методикой выполнения и не требует стерильных условий.
Однако следует отметить, что качество и стабильность эритроцитарных диагностикумов напрямую зависит от степени очистки антигенов, а также от индивидуально подобранных для каждого антигена вируса условий фиксации, танизации и сенсибилизации эритроцитов.
Материальное обеспечение: эритроцитарный антигенный диагностикум; исследуемая сыворотка крови; иммунологические планшеты; физиологический раствор; дистиллированная вода; механические дозаторы одноканальные с одноразовыми наконечниками; расходные материалы.
Примерный план занятия (2 часа)
1 Проведение тестирования студентов
2 Объяснение преподавателя по теме занятия.
3 Демонстрация: а) диагностического набора для РНГА; б) методики постановки РНГА.
4 Самостоятельная работа студентов: а) постановка РНГА; б) учёт результатов РНГА; в) определение титра антител в сыворотке крови..
5 Подведение итогов занятия
6 Задание к следующему занятию
Контрольные вопросы
1 В чём принцип реакции непрямой гемагглютинации?
2 В чём отличие непрямой гемагглютинации от прямой?
3 В чём заключается методика РНГА для определения титра антител в сыворотки крови?
4 В чём достоинства и недостатки РНГА?
Тема 16 Реакция торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА)
Цель занятия: изучить реакцию торможения гемагглютинации; овладеть методикой определения титра антител в реакции торможения гемагглютинации.
Реакция торможения (задержки) гемагглютинации (РТГА, РЗГА)основана на том, что антитела при взаимодействии с гомологичными антигенами гемагглютинирующих вирусов образуют комплекс антиген – антитело, в котором вирус утрачивает не только инфекционную, но и гемагглютинирующую активность. В качестве индикатора свободного не связавшегося вируса в реакции используют эритроциты, которые получены от животного того вида, в отношении которого вирус проявляет агглютинирующую активность. Признаком положительной реакции является отсутствие (торможение или задержка) геммаггютинации.
РТГА используют, во-первых, для идентификации вируса, во-вторых – для обнаружения антител и определения титра антител.
Так как, не известно, какое количество антигена гемагглютинирующего вируса или в каком титре антитела содержатся в исследуемом материале, то перед реакцией данный материал разводят с кратностью 2. Второй стандартный специфический компонент (референс) берут в реакцию или в постоянном рабочем разведении (сыворотка), или в постоянной рабочей дозе (вирус) соответственно. Для референс–вируса таким стандартом является его гемагглютинирующий титр, равный 4 ГАЕ.
Методика определения титра антител в РТГА (табл.14)
РТГА ставят микрометодом в специальных иммунологических 96-луночных планшетах.
1 Готовят последовательные двукратные разведения исследуемой пробы сыворотки крови. Для этого вносят в лунки с № 1 по № 5 по 50,0 мкл физиологического раствора (рН 7,2), далее в лунку № 1 вносят 50,0 мкл исследуемой сыворотки, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 2, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 3 и так далее до пятой лунки. Удаляют из лунки № 5 после перемешивания 50,0 мкл сыворотки в разведении 1:32.
2 Добавляют к каждому разведению сыворотки по 50,0 мкл 4 ГАЕ референс–вируса.
3 Ставят одновременно следующие контроли в лунках №№ 6, 7, 8, 9, 10, 11: в лунке № 6 (контроль исследуемой сыворотки крови на наличие гемагглютининов) – вносят 50,0 мкл физиологического раствора и 50,0 мкл неразведённой сыворотки крови; в лунке № 7 (контроль эритроцитов на самоагглютинацию) – вносят 100,0 мкл физиологического раствора; в лунках № 8,9,10,11 (контроль рабочей дозы вируса – 4 ГАЕ) – вносят 50,0 мкл физиологического раствора, затем в лунку № 8 вносят 50,0 мкл вируса в титре 4 ГАЕ, перемешивают и переносят 50,0 мкл в лунку № 9, перемешивают и 50,0 мкл переносят в лунку № 10, перемешивают и переносят в лунку № 11. Из лунки № 11 после перемешивания удаляют 50,0 мкл вируса.
4 Инкубируют 30-40 мин. при комнатной температуре.
5 Вносят во все лунки по 50,0 мкл 1,0% -ной суспензии эритроцитов.
6 Инкубируют 15 – 20 мин. при комнатной температуре
7 Учитывают результат по гемагглютинации
8 Определяют титр антител в исследуемой сыворотке крови
За титр антител в РТГА принимают наибольшее разведение сыворотки, которое ещё полностью тормозит гемагглютинацию.
Таблица 14
Протокол титрования сыворотки в РТГА
| №№ лунок | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | ||||||
Компоненты
Реакции
Разведения сыворотки SХ
КОНТРОЛИ
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
Эр
SХ
АГ (вируса) ГАЕ
50,0
50,0
50,0
50,0
100
Перенос по 50,0
-
50,0
50,0
50,0
Перенос по 50,0
Контакт 30-40 мин. при комнатной температуре
50,0
50,0
50,0
50,0
50,0
Серологические реакции
1 В основе серологических реакций лежит взаимодействие:
+:антигена и антитела
-:антигена и вирусных белков
-:антитела и иммуноглобулинов
-:антигенов и клеток
2 Вещества, которые обладают интенсивной аутофлуоресценцией и используются для придания такого свойства не флуоресцирующим веществам, называются:
+: флуорохромы
-: конъюгат
-: фермент
-: фиксатор
3 Конъюгатами называются:
+: антитела, связанные с флуорохромом
+: антитела, связанные с ферментом
-: комплекс антиген - антитело
-: субстраты
4 Укажите полное название метода МФА:
+: метод флуоресцирующих антител
-: метод флуоресцирующих антигенов
-: метод ферментирующих антител
-: метод ферментирующих антигенов
5 Для учёта результатов в реакции иммунной флуоресценции используют:
+: люминесцентный микроскоп
-: световой микроскоп
-: электронный микроскоп
-: инвертируемый микроскоп
6 Принцип прямого варианта РИФ состоит:
+: взаимодействие антигена и специфического конъюгата
-: взаимодействие антигена и антивидового конъюгата
-: взаимодействие антигена и флуорохрома
-: взаимодействие антигена и субстрата
6 Какой конъюгат используют для непрямого варианта РИФ:
+: антивидовой флуоресцирующий
-: антивидовой пероксидазный
-: специфический флуоресцирующий
-: специфический пероксидазный
7 Какое свечение приобретает ДНК в методе флуорохромирования акридиновым оранжевым:
+: жёлто-зелёное
-: рубиново-красное
-: сине-фиолетовое
-: жёлто-коричневое
8 Укажите последовательность этапов прямого варианта РИФ:
1: приготовление мазка
2: фиксация мазка
3: нанесение конъюгата
4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
5: учёт результата реакции
8 Укажите последовательность этапов непрямого варианта РИФ:
1: приготовление мазка
2: нанесение специфической сыворотки крови
3: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
4: нанесение антивидового конъюгата
5: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
6: учёт результата реакции
9 Как называется сыворотка, полученная против белков сыворотки другого вида животного:
+:антивидовая
-: специфическая антигенная
-: антивирусная
-: антикомплементная
10 Укажите полное название метода ИФА:
+: иммуноферментный анализ
-: метод флуоресцирующих антител
-: иммунофлуоресцентный анализ
-: иммунофракционный анализ
11 Конъюгатом в ИФА является:
+: антитела, связанные с ферментом
-: антитела, связанные с флуорохромом
-: комплекс антиген-антитело
-: специфический антиген
12 Что в методе ИФА лежит в основе появления цветного продукта?
+: взаимодействие фермента и субстрата
-: взаимодействие антител и антигена
-: взаимодействие фермента с антителами
-: взаимодействие субстрата с антигеном
13 Результат, полученный в ИФА можно оценить:
+: по изменению окраски визуально
+: по оптической плотности в спектрофотометре
-: по свечениюв люминесцентном микроскопе
-: по цитопатическому действию в световом микроскопе
14 Укажите последовательность этапов сэндвич варианта ИФА:
1: внесение специфических антител в лунки планшета
2: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
3: внесение антигена вируса в лунки планшета
4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
5: внесение специфического конъюгата в лунки планшета
6: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
7: внесение субстрата
8: учёт результата
15 Сэндвич вариант ИФА используется для:
+: индикации и идентификации вируса
-: обнаружения антител и титрования антител
16 Укажите последовательность этапов непрямого варианта ИФА:
1: внесение специфического антигена в лунки планшета
2: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
3: внесение сыворотки в лунки планшета
4: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
5: внесение антивидового конъюгата в лунки планшета
6: контакт и отмыв от не связавшихся компонентов
7: внесение субстрата
8: учёт результата
17 Непрямой вариант ИФА используется для:
+: обнаружения и титрования антител
-: индикации и идентификации вируса
18 Метод, основанный на диффузия молекул антигенов и антител в агаровом называется _________________________________________________
+:реакция диффузионной преципитации
19 Положительным результатом РДП является:
+: наличие линий преципитации
-: наличие флуоресценции
-: наличие цветного продукта реакции
-: гибель тест-объектов
20 РДП используют для:
+: индикации и идентификации вируса
+: обнаружения антител и титрования антител
21 Реакция, в которой при образовании комплекса антиген-антитело вирус утрачивает свою инфекционную активность, называется:
+: реакция нейтрализации
-: реакция иммунной диффузии
-:иммуноферментный анализ
-:реакция диффузионной преципитации
-:реакция непрямой гемагглютинации
22 Индикатором свободного вируса в РН является:
+: живые системы
-: флуорохромы
-: ферменты
-: субстраты
23 Признак положительного ответа в РН - это:
+: отрицательный результат биопробы
-: положительный результат биопробы
-: свечение
-: окрашивание
24 Идентификацию вируса в РН проводят на основе определения:
+: индекса нейтрализации
-: гемагглютинирующей активности
-: торможения гемадсорбции
-: цитопатического действия
25 За титр антител в сыворотке крови в РН принимают:
+: разведение сыворотки, защищающее 50% - тест - объектов от 100ЭД50 вируса
-: разведение сыворотки, защищающее 50%- тест - объектов от 4ГАЕ вируса
-: разведение сыворотки, защищающее 50%- тест - объектов от гемадсорбирующей активности вируса
26 Что считается главным преимуществом реакции нейтрализации:
+: высокая специфичность
-: необходимость стерильных условий
-: быстрота постановки
-: простота реакции
27 Укажите полное название метода РНГА:
+: реакция непрямой гемагглютинации
-: реакция не полной гемагглютинации
-: реакция не пропорциональной гемагглютинации
28 Что является положительным результатом РНГА:
+: гемагглютинация
-: гемадсорбция
-: гемолиз
-: гемостаз
29 Что является обязательным компонентов в РНГА:
+: эритроциты с адсорбированными антителами
+: эритроциты с адсорбированными антигенами
-: эритроциты
-: эритроциты + стабилизатор
30 Укажите основные этапы в получение эритроцитарного диагностикума:
1: выделение эритроцитов
2: стабилизация ( консервация) эритроцитов
3: танизация эритроцитов
4: сенсибилизация эритроцитов специфическими антигенами или специфическими антителами
31 Укажите полное название метода РТГА:
+: реакция торможения гемагглютинации
-: реакция трудоёмкой гемагглютинации
-: реакция территориальной гемагглютинации
32 Как называется эффект действия, который вирус утрачивает вирус в РТГА? ________________________________________
+: гемагглютинирующий
33 Что является индикатором вируса, не связанного с антителами, в РТГА:
+: эритроциты
-: живая система
-: ферментозависимое вещество
-: агаровый гель
34 Выберите признак положительной РТГА:
+:пуговка
-:зонтик
-: линия преципитации
-:свечение
35 Как подготовить исследуемую сыворотку для ее титрования в РТГА:
+:освободить от неспецифических ингибиторов
-:исследовать в РГА
-: заморозить и отморозить
-:профильтровать
35 Чему равно стандартное значение гемагглютинирующего титра вируса, в котором его используют в РТГА:
+:4 ГАЕ
-: 3 ГАЕ
-: 2 ГАЕ
-: 1 ГАЕ
36 Что принимают в РНГА за титр антител в сыворотке:
+: наибольшее разведение сыворотки, дающее гемагглютинацию не менее, чем на два креста
-: наибольшее разведение сыворотки, тормозящее гемагглютинацию
-: наименьшее разведение сыворотки, тормозящее гемагглютинацию
-: наименьшее разведение сыворотки, дающее гемагглютинацию не менее, чем на два креста
Список литературы
1 Белоусова Р.В., Троценко Н.И., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии. – 3-е изд, перераб. и доп. – М.: КолосС, 2006. – 248 с.
2 Белоусова Р.В., Преображенская Э.А., Третьякова И.В. Ветеринарная вирусология / Под ред. проф.Р.В. Белоусовой. – КолосС, 2007. – 424 с.
3 Белоусова Р.В., Третьякова И.В., Калмыкова М.С., Ярыгина Е.И. Ветеринарная вирусология. Методические рекомендации – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2009. – 62 с.
4 Белоусова Р.В., Третьякова И.В., Калмыкова М.С., Ярыгина Е.И. Пособие по ветеринарной вирусологии. – М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ, 2013. – 62 с.
5 Белоусова Р.В.. Ярыгина Е.И., Третьякова И.В., Калмыкова М.С.., Рогожин В.Н. Вирусология и биотехнология: Учебник. – СПб.: Издательство «Лань», 2016. – 220 с.
6 Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / Под ред. проф. Дьяконова Л.П., проф. Ситькова В.И. – М.: Издательство Спутник+, 2009. – 656 с.
7 Калмыкова М.С., Калмыков М.В., Белоусова Р.В. Основы полимеразной цепной реакции с разными форматами: Учебное пособие. – СПб.: Издательство «Лань», 2009. - 80 с.
8 Медицинская вирусология. часть вторая. / Под ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова. – СПб, 2002. – 163 с.
|
| Поделиться: |
Последнее изменение этой страницы: 2021-01-08; просмотров: 173; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы!
infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.19.211.134 (0.313 с.)