Количественное определение холестерина в сыворотке крови

по модифицированному методу Златкис-Зака*

 

Принцип метода: содержащийся в плазме или сыворотке крови свободный и эфирносвязанный холестерин окисляется хлорным железом в присутствии концентрированной серной и ортофосфорной кислот с образованием ненасыщенных продуктов, окрашенных в красно-фиолетовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина (присутствие следов воды мешает развитию окраски!).

Реактивы и оборудование: 1) Реактив для цветной реакции:

● основной раствор красителя (2,5 г хлорного железа растворить в 100 мл ортофосфорной кислоты), ● рабочий раствор красителя (8,0 мл основного раствора развести до 100 мл концентрированной серной

кислотой); 2) этанол; 3) калибровочный раствор холестерина в этаноле,

содержащий 1,6 мг/мл (3 ммоль/л); 4) штатив с химическими пробирками (сухими!); 5) микропипетка для взятия сыворотки на 0,1 мл; 6) пипетка на 2мл; мерная центрифужная пробирка для отмеривания реактива для цветной реакции; 8) фотоэлектроколориметр.

Ход работы: в пробирку прибавляют микропипеткой 0,1 мл сыворотки крови, добавляют 1,4 мл этанола. Осторожно по стенке пробирки добавляют 2,0 мл реактива для цветной реакции, пробу хорошо встряхивают (но осторожно, направляя при этом отверстие пробирки от себя и окружающих), оставляют на 30 минут при комнатной температуре. Развивается красно-фиолетовая окраска. Полученный окрашенный раствор колориметрируют на ФЭКе, против реактивов без добавления сыворотки крови. Светофильтр зеленый (λмакс.= 540 нм). Расчет концентрации холестерина проводится с помощью калибровочной кривой.

Результаты: Д₁= С₁=

Д₂= С₂=

 

содержание холестерина рассчитывают по формуле

 

Х = С × 100/0,1 = мг% × 0,0258 = ммоль/л, где

 

0,1 - количество мл сыворотки, взятое на исследование

С - количество холестерина в крови в мг, найденное по калибровочному графику после определения оптической плотности пробы (Д).

Норма содержания холестерина в сыворотке крови 3,6-6,4 ммоль/л.

 

Тестовый контроль по теме «Обмен холестерина. Липопротеины»

Тест 1

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Лимитирующей стадией биосинтеза холестерина является реакция, в ходе которой образуется:

а) ацетоуксусная кислота (ацетоацетат)

б) β-оксимасляная кислота (β-оксибутират)

в) β-оксибутирил-КоА

г) β-окси-β-метил-глутарил-КоА

д) мевалоновая кислота (мевалонат)

Тест 2

Выберите правильнЫЙ ответ:

Функцией апо А₁ является:

а) активация липопротеинлипазы

б) активация лецитинхолестеролацилтрансферазы (ЛХАТ)

в) транспорт эфиров холестерола

г) транспорт триацилглицеролов

д) активация ацилКоАхолестеролацилтрансферазы (АХАТ)

Тест 3

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Транспорт экзогенного холестерина и триацилглицеролов из кишечника в ткани осуществляют:

а) хиломикроны

б) ЛПОНП и ЛПНП

в) ЛПВП

г) хиломикроны, ЛПОНП, ЛПНП

д) ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП

Тест 4

Выберите правильнЫЙ ответ:

Функцией апо С₂ является:

а) активация липопротеинлипазы

б) активация лецитинхолестеролацилтрансферазы (ЛХАТ)

в) транспорт эфиров холестерола

г) транспорт триацилглицеролов

д) активация ацилКоАхолестеролацилтрансферазы (АХАТ)

Тест 5

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Транспорт эндогенного холестерина и триацилглицеролов из печени в ткани осуществляют:

а) хиломикроны

б) ЛПОНП и ЛПНП

в) ЛПВП

г) хиломикроны, ЛПОНП, ЛПНП

д) ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП

Тест 6

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Транспорт холестерина из внепеченочных тканей в печень осуществляют:

а) хиломикроны

б) ЛПОНП и ЛПНП

в) ЛПВП

г) хиломикроны, ЛПОНП, ЛПНП

д) ЛПНП, ЛПОНП, ЛПВП.

Тест 7

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Образование ЛПНП происходит:

а) в печени

б) в печени и кишечнике

в) в кишечнике

г) в крови из ЛПОНП

д) в крови из хиломикронов и ЛПОНП

Тест 8

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Наиболее эффективно для оценки степени риска развития атеросклероза является определение содержания в крови:

а) общего уровня холестерина

б) холестерина в ЛПНП

в) холестерина в ЛПВП

г) холестерина в ЛПОНП и ЛПНП

д) соотношение холестерина ЛПОНЛ, ЛПНП к холестерину ЛПВП

Тест 9

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Атерогенными липопротеинами являются:

а) ЛПВП

б) ЛПНП, ЛПОНП

в) ЛПНП, ЛПВП

г) ЛПОНП, ЛПВП

д) хиломикроны

Тест 10

ВыбЕрИтЕ правильнЫЙ ответ:

Основные этапы синтеза холестерина в клетке имеют общие реакции с:

а) синтезом жирных кислот

б) распадом жирных кислот

в) синтезом фосфолипидов

г) синтезом кетоновых тел

д) синтезом триацилглицеридов

Тест 11

ВыбЕрИтЕ все правильныЕ ответЫ:

Катаболизм холестерина связан с синтезом:

а) тиреоидных гормонов

б) желчных кислот

в) гормонов коры надпочечников

г) гормонов мозгового слоя надпочечников

д) эргокальциферола

Тест 12

Выберите все правильныЕ ответЫ:

Коррекция дислипидемии при атеросклерозе проводится лекарственными веществами, которые:

а) ингибируют активность гидроксиметилглутарил-КоА-редуктазы

б) активируют метаболизм ЛПНП

в) угнетают образование ЛПВП

г) угнетают образование ЛПНП

д) обладают антиоксидантным и мембранопротекторным действием

Тест 13

Выберите все правильныЕ ответЫ:

Причинами повышения уровня холестерина в крови являются:

а) нарушение оттока желчи из желчного пузыря

б) нарушение синтеза желчных кислот

в) ингибирование гидроксиметилглутарил-КоА-редуктазы

г) снижение активности лецитинхолестеролацилтрансферазы

д) уменьшение количества или нарушение структуры рецепторов ЛПНП

Тест 14

УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ.

Апобелки липопротеинов: Функция апобелка:

1) апо А₁ а) кофактор внепеченочной липопротеинлипазы

2) апо С₂ б) лиганды рецепторов хиломикрона

3) апо Д в) кофактор лецитинхолестеролацилтрансферазы

4) апо В₄₈ г) транспорт эфиров холестерина

д) кофактор панкреатической липазы

Тест 15

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Лимитирующей реакцией синтеза холестерина является образование ___________, регуляторный фермент - ___________.

 

Тест 16.

УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ

(для каждого вопроса – один или несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз).

Изменение активности Регуляторные молекулы

ГМГ-КоА-редуктазы:

1) увеличение а) инсулин

2) снижение б) глюкагон

в) глюкокортикоиды

г) мевалонат

д) холестерин

Тест 17.

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Механизм регуляции ГМГ КоА – редуктазы холестерином:

а) аллостерическая активация

б) ковалентная модификация

в) индукция синтеза

г) репрессия синтеза

д) активация протектором

Тест 18.

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Коферментом ГМГ КоА-редуктазы (синтез холестерина) является:

а) ФАД2Н

б) НАДФН +Н⁺

в) НАДН +Н⁺

г) ТПФ

д) биотин

Тест 19.

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Механизм регуляции синтеза В₁₀₀, Е- рецепторов к ЛПНП холестерином:

а) аллостерическая активация регуляторного фермента

б) ковалентная модификация

в) индукция синтеза

г) репрессия синтеза

д) ингибирование регуляторного фермента по аллостерическому механизму

Тест 20.

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Промежуточный продукт синтеза холестерина используется организмом для синтеза:

а) пуринов

б) пиримидинов

в) коэнзима Q

г) орнитина

д) тиамина

Тест 21.

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Регуляторным ферментом превращения холестерина в желчные кислоты является ________________.

Тест 22.

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Синтез холестерина в печени увеличивается при диете богатой:

а) белками

б) углеводами

в) животными жирами

г) растительными маслами

д) витаминами

Тест 23.

УСТАНОВИТЕ СТРОГОЕ СООТВЕТСТВИЕ.

Фермент: Процесс:

1) 7a холестеролгидроксилаза а) синтез эфиров холестерина в клетке

2) АХАТ б) синтез эфиров холестерина в крови

на поверхности ЛПВП

3) 1aхолестеролгидроксилаза в) синтез желчных кислот в печени

4) ЛХАТ г) синтез стероидных гормонов

д) образование активной формы

витамина Д₃ в почках

Тест 24.

ВЫБЕРИТЕ ПРАВИЛЬНЫЙ ОТВЕТ.

Триглицериды хиломикронов и ЛПОНП гидролизуются:

а) панкреатической липазой

б) триацилглицеридлипазой

в) липопротеинлипазой

г) ЛХАТ

д) АХАТ

Тест 25.

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Содержание холестерина в крови с возрастом __________________.

Тест 26.

ДОПОЛНИТЕ ОТВЕТ.

Статины снижают активность ГМГ-КоА-редуктазы по механизму ______________ ____________ ингибирования.

Тест 27.

УСТАНОВИТЕ СООТВЕТСТВИЕ

(для каждого вопроса – несколько правильных ответов, каждый ответ может быть использован один раз)

Локализация апобелков:	Апобелки липопротеинов:
1) интегральные 2) периферические	а) апо А б) апо Е в) апо С г) апо Д д) апо В

Тест 28.

УСТАНОВИТЕ ПРАВИЛЬНУЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЬ.

Поступление холестерина из печени в периферические ткани:

а) образование ЛПНП

б) присоединение в крови Апо С к ЛПОНП

в) образование ЛПОНП

г) действие ЛП-липазы

д) захват липопротеинов специфическими рецепторами тканей

Тест 29.

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Функции ЛПВП в крови:

а) транспорт холестерина из внепеченочных тканей в печень

б) снабжение апобелками других ЛП в крови

в) антиоксидантные функции по отношению к модифицированным ЛПНП

г) забирают свободный холестерин и передают эфиры холестерина

ЛП в крови

д) транспорт холестерина из печени в периферические ткани

Тест 30.

ВЫБЕРИТЕ ВСЕ ПРАВИЛЬНЫЕ ОТВЕТЫ.

Факторами риска развития атеросклероза являются:

а) гиперхолестеринемия

б) курение

в) высокое давление

г) снижение массы тела

д) гиподинамия

 

Ответы по теме: «ОБМЕН ХОЛЕСТЕРИНА.Липопротеины»

1. д 2. б 3. а 4. а

5. б 6. в 7. г 8. д

9. б 10. г 11. б,в,д 12. а,б,г,д

13. а,б,г,д 14. 1в,2а,3г,4б

15. мевалонат, ГМГКоА-редуктаза

16. 1а 2бвгд

17. г

18. б

19. г

20. в

21. 7α-холестеролгидроксилаза

22. б,в

23. 1в, 2а, 3д, 4б

24. в

25. увеличивается

26. конкурентное обратимое

27. 1ад 2бвг

28. вбгад

29. а,б,в,г

30. а,б,в,д

 

1. Тема 20. Нарушения липидного обмена

Самостоятельная работа студентов в аудиторное время

Место проведения – кафедра биохимии

Продолжительность занятия – 180 мин.

 

2. Цель занятия: научить студентов самостоятельной работе со специальной и справочной литературой по предложенной теме посредством решения ситуационных задач, аргументировано выступать по конкретным вопросам, дискутировать в кругу своих коллег и отвечать на их вопросы; закрепить знания по теме «Химия и обмен липидов».

3. Конкретные задачи:

3.1. Студент должен знать:

3.1.1. Строение и свойства липидов.

3.1.2. Переваривание липидов в ЖКТ.

3.1.3. Тканевой обмен жирных кислот (окисление и синтез).

3.1.4. Обмен кетоновых тел.

3.1.5. Синтез триглицеридов и фосфолипидов.

3.1.6. Взаимопревращение азотистых спиртов.

3.1.7. Обмен холестерина. Обмен эфиров холестерина.

3.1.8. ЦТК, как единый путь обмена липидов, углеводов и белков.

3.2. Студент должен уметь:

3.2.1. Анализировать, обобщать и излагать материалы литературы.

3.2.2. Обосновывать терапевтические рекомендации на базе знаний о метаболизме веществ в организме.

 

4. Мотивация: умение правильно адаптировать материалы справочников и журнальных статей необходимо для работы будущего специалиста; знания липидного обмена, обмена кетоновых тел, холестерина в норме и при патологии обязательны для практической работы врача.

 

5. Задание для самоподготовки: студенты должны изучить рекомендуемую литературу, используя вопросы для самоподготовки.

5.1. Рекомендуемая литература.

Основная:

5.1.1. Лекционный материал и материалы практических работ по теме "Липиды".

5.1.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. "Биологическая химия". – М., Медицина. – 1998. - С.194-203, 283-287, 363-406.

5.1.3. Биохимия: Учебник / Под ред. Е.С.Северина. – М.: ГЭОТАР-Мед., 2003. – С.405-409, 417-431, 437-439, 491.

Дополнительная:

5.1.4. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Обмен липидов и липопротеинов и его нарушения. Руководство для врачей, СПб. – 1999. – Питер. - 505 с.

5.2. Подготовиться к тестовому контролю.

 

6. Вопросы для самоподготовки:

6.1. Синтез кетоновых тел, их использование организмом в норме.

6.2. Понятие кетоацидоза. Причины формирования кетоза, защитные

механизмы, предотвращающие гибельные для организма последствия.

6.3. Что такое b-окисление жирных кислот. Необходимые условия для

процесса.

6.4. Синтез фосфолипидов. Возможности синтеза в организме.

6.5. Взаимопревращение азотистых спиртов.

6.6. Сфинголипидозы, ганглиозидозы. Причины, приводящие к их

возникновению.

6.7. Переваривание липидов в ЖКТ.

6.8. Желчные кислоты. Строение и функции в организме.

6.9. Холестерин. Причины повышения уровня холестерина крови. Синтез, распад и транспорт холестерина.

6.10. Понятие о липопротеинах.

6.11. Причины развития атеросклероза

6.12. Перекисное окисление липидов и биоантиоксиданты.

6.13. Превращения арахидоновой кислоты в организме.