Определение перекисных соединений в составе жира

Принцип метода: в основе определения перекисных соединений в составе жира лежит их способность окислять в кислой среде йодид калия с образованием свободного йода, который обнаруживается по реакции с крахмалом. Реакция протекает по следующему уравнению:

 

+ 2KJ + 2CH₃COOH R=O + J₂ + CH₃COOK + H₂O

 

Реактивы:

1) смесь ледяной уксусной кислоты и хлороформа (в объемном

соотношении 2:1), 2) йодид калия, 2% раствор, 3) 0,5% раствор крахмала, 4) тиосульфат натрия, 0,1% раствор, 5) свежее масло, 6) прогорклое масло.

Ход работы:

В одну пробирку вносят 2 капли свежего масла, во вторую – 2 капли прогорклого масла. В обе пробирки добавляют по 20 капель смеси уксусной кислоты и хлороформа и по 15 капель раствора KJ и 2-3 капли крахмала. Обе пробирки встряхивают. Через 20 минут титруют 0,1% раствором тиосульфата натрия, считая количество капель, необходимое для связывания выделившегося йода. Количество свободного йода, эквивалентное содержанию перекисей в исследуемом масле, может быть ориентировочно определено по количеству капель раствора тиосульфата натрия.

Результаты: проба 1 - проба 2 -

Выводы:

 

D Существуют разные методы определения перекисного числа, которое можно выражать в процентах йода, в миллиэквивалентах активного кислорода, в миллилитрах тиосульфата той или иной нормальности, израсходованных на образование гидроперекисей, выделившихся из 1 г жира.

Лучше всего перекисные числа выражать в процентах йода:

№	Наименование жиров и масел	Перекисные числа жиров, не более
Свежие/норма	Подозритель-ные	Прогорклые
1. 2. 3. 4. 5. 6.	Бараний Свиной Говяжий Сливочное Топленое Подсолнечное: -нерафинированное -рафинированное	0,08 0,08 0,02 0,02 0,02   0,10 0,15	0,15 0,15 0,08 0,06 0,08   0,40 0,50	3,00 3,00 0,15 0,10 0,50   3,30 6,0

 

Акролеиновая проба

Принцип метода: Глицерин, входящий в состав молекулы нейтрального жира, способен при нагревании с водоотнимающими средствами образовывать ненасыщенный альдегид – акролеин, обладающий резким раздражающим запахом.

Химизм реакции:

-Н₂О

KHSO₄

нагревание

 

глицерин акролеин

Реактивы:

1) пищевой жир; 2) вазелиновое масло; 3) глицерин; 4) KHSO₄ (кристал.)

Ход работы:

Небольшой кусочек жира помещают в фарфоровую чашку, добавляют несколько кристаллов сернокислого калия (водоотнимающее средство) и нагревают. Выделяется акролеин, обладающий резким запахом (проба выполняется в вытяжном шкафу!!!).

Эту же реакцию проводят с вазелиновым маслом и глицерином

· Положительная проба доказывает наличие глицерина, однако исследуемое вещество не обязательно является триацилглицеридом. В этом случае можно говорить о технических маслах или маслах, используемых в парфюмерной промышленности, косметологии.

Определение концентрации триацилглицеридов (ТАГ) в сыворотке крови энзиматическим колориметрическим методом

Принцип метода:

ТАГ  ^липаза → глицерин + жирные кислоты

 

Глицерин + АТФ  ^{глицеролкиназа} → глицерол-3-фосфат + АДФ

 

Глицерол-3-фосфат + О₂  ^ГФО → диоксиацетонфосфат + 2Н₂О₂

 

Н₂О₂ + 4-аминоантипирин + 4-хлорфенол  ^{пероксидаза} → хинонимин + 4Н₂О

 

Концентрация хинонимина, определяемая фотометрически, пропорциональна концентрации триацилглицеридов в пробе.

Реактивы: 1) TRIS буфер, АТФ, липаза, глицеролкиназа, пероксидаза, Мg²⁺, глицерофосфатоксидаза, 4-хлорфенол, 4-аминоантипирин; 2) ТАГ – калибратор с концентрацией ТАГ 2,29 ммоль/л.

Ход работы: внести в пробирки:

 

	Опытная проба	Калибровочная проба	Контрольная проба
Сыворотка крови	0,02 мл	-	-
Н2О дистил.	-	-	0,02 мл
Калибратор	-	0,02 мл	-
Рабочий реагент	1,0 мл	1,0 мл	1,0 мл

Пробы перемешать, инкубировать 10 мин при 18-25⁰ С. Определить оптические плотности опытных (Д_оп) и калибровочной (Д_к) проб против контрольной пробы при длине волны 546 нм (490 – 550 нм). Окраска стабильна в течение 1 часа.

Результаты: Д₁ =

 

Д₂ = Д_к =

Содержание триацилглицеридов (ммоль/л) рассчитать по формуле:

С = Д₁/Д_к х 2,29

С₁ =

С₂ =

Норма: 0,15–1,71 ммоль/л. Группа риска: 1,71–2,28 ммоль/л. Патология > 2,28 ммоль/л.

Выводы:

Клинико-диагностическое значение определения ТГ

В сыворотке крови

Физиологическая гипертриглицеридемия может развиться: а) после приема пищи и может продолжаться 12-14 часов (ее степень зависит от характера и количества пищи); б) во 2-м и 3-м триместре беременности.

Патологическая гипертриглицеридемия по своим патогенетическим характеристикам может быть дифференцирована на первичную и вторичную. Первичная обусловлена генетическими нарушениями метаболизма липопротеинов или усиленной субстратной индукцией (переедание). Нарушения обмена ТАГ, возникающие как осложнение основного патологического процесса, относят ко вторичной гипертриглицеридемии. Повышение концентрации ТАГ отмечается при атеросклерозе, инфаркте миокарда, стенокардии, метаболическом синдроме, сахарном диабете, алкоголизме, гипотиреозе, гипертонической болезни, желчекаменной болезни, панкреатите и др.

Гипотриглицеридемия отмечается при недостаточном питании, синдроме мальабсорбции, нарушении функции щитовидной железы, острых кишечных инфекциях, приеме некоторых лекарственных препаратов (ниацин, фибраты и др.).