Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Определение концентрации общего холестерола в сыворотке крови ферментативным методомСодержание книги
Поиск на нашем сайте
Принцип метода: Эфиры холестерола под действием фермента холестеролэстеразы распадаются на холестерол и жирные кислоты. Холестерол окисляется холестеролоксидазой с образованием перекиси водорода. Пероксид водорода реагирует с хромогеном с образованием окрашенного вещества (хинонимин):
Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в нем.
Линейность метода: до 19,4 ммоль/л. Норма: Сыворотка крови – < 5,2 ммоль/л (37°С).
Оборудование и реагенты: 1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С; 2) Секундомер; 3) Автоматические пипетки на 10 мкл и 1000 мкл; 4) Сыворотка крови; 5) Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза ³ 50 Е/л, пероксидаза ³ 1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л); 6) Стандарт (Холестерол 5,2 ммоль/л); 7) Дистиллированная вода.
Проведение анализа
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (DА). Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчет Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:
где DАоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной, соответственно; Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).
Если концентрация холестерола превышает 19,4 ммоль/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или моча) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Уровни холестерола важны в диагностике и классификации гиперлипопротеинемий.
Концентрация холестерина в сыворотке указывает на работу печени, билиарного тракта, всасывание в кишечнике. Высокие концентрации холестерина говорят об угрозе ишемической болезни сердца, о нарушении тиреоидной функции и заболеваниях надпочечников.
Лабораторная работа № 10. Определение концентрации холестерина ЛПВП в сыворотке крови
Принцип метода: Холестерол липопротеинов высокой плотности (ЛПВП) определяют после осаждения из сыворотки липопротеинов низкой и очень низкой плотности (ЛПНП и ЛПОНП, соответственно). Супернатант содержит холестерол, связанный с ЛПВП в растворенной форме и определяется ферментативным методом для определения концентрации общего холестерола. Интенсивность окраски раствора при длине волны 550 нм прямо пропорциональна концентрации холестерола в ЛПВП.
Линейность метода: до 19,4 ммоль/л. Норма: Сыворотка крови – > 0,9 ммоль/л (37°С).
Оборудование и реагенты: 1) Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 550 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37°С; 2) Секундомер; 3) Автоматические пипетки на 10 мкл, 400 мкл, 2 мл и 1000 мкл; 4) Сыворотка крови; 5) Осаждающий реагент (хлорид магния, 100 ммоль/л в ортофосфорной кислоте, 30,3 ммоль/л) 6) Реагент (холестеролэстераза, холестеролоксидаза ³ 50 Е/л, пероксидаза ³ 1000 Е/л, 4-аминоантипирин 0,3 ммоль/л); 7) Стандарт (Холестерол 1,2 ммоль/л); 8) Дистиллированная вода.
Проведение анализа
В пластиковую пробирку внести 400 мкл сыворотки и добавить 2 мл осаждающего реагента. Тщательно перемешать в течение 15 секунд. После чего центрифугировать 3000 об/мин в течение 5 минут. Отобрать 1мл супернатанта в чистую пробирку и использовать для последующего определения холестерола в ЛПВП.
Перемешать содержимое каждой пробирки. Инкубировать 10 мин при температуре 37°С. Измерить оптическую плотность опытной и стандартной проб против холостой пробы при длине волны 550 нм (DА). Окраска стабильна в течение 30 минут.
Расчет Расчет по стандарту концентрации холестерола в сыворотке проводят по формуле:
где DАоп / ст – оптическая плотность опытной пробы и стандартной, соответственно; Сст – концентрация стандарта (ммоль/л).
Клинико-диагностическое значение: Содержание холестерола в ЛПВП в кови здоровых людей мало меняется с возрастом и не подвержено колебаниям. Величины содержания холестерола в ЛПВП < 0,9 ммоль/л свидетельствуют о нарушении липидного обмена и угрозе атеросклероза. Повышение содержания холестерола в ЛПВП, как и повышение содержания общего холестерина в результате увеличения этой фракции, является доброкачественным состоянием.
ТЕМА 7. БЕЛКОВЫЙ ОБМЕН Лабораторная работа № 11.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-12-28; просмотров: 1530; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 13.59.218.38 (0.009 с.) |