Тема 10. Гормональная регуляция метаболизма

Лабораторная работа № 20.

Определение лютеинизирующего гормона в моче с помощью экспресс-теста

 

 

Принцип метода: Экспресс-тест L-CHECK-1 представляет собой быстрый одностадийный тест для качественного определения лютеинизирующего гормона (ЛГ) в моче для предсказания точного дня овуляции. Полоска содержит две зоны: тестовую и контрольную. В основе метода лежит комбинация моноклонального окрашивающего коньюгата (коллоидное золото) и поликлональных, адсорбированных на твердой фазе антител к ЛГ человека. При прохождении исследуемого образца через тестовую зону полоски конъюгат связывается с ЛГ с образованием комплекса антиген-антитело. Этот комплекс взаимодействует с антителами к ЛГ. В случае всплеска концентрации ЛГ полоска приобретает малиновое окрашивание. Если концентрация ЛГ низкая, то в тестовой зоне появляется слабо розовое окрашивание или вообще отсутствие окраски. Это позволяет четко дифференцировать базальную концентрацию гормона от всплеска концентрации его, предшествующего овуляции. Малиновая окраска в контрольной зоне полоски (взаимодействие несвязанного коньюгата с реагентом) указывает на правильное проведение теста.

 

Чувствительность метода: 10 мМЕ/мл.

В некоторых случаях содержание ЛГ в образце ниже этого уровня дает слабоположительный результат (слабое розовое окрашивание).

Норма: Базальный уровень ЛГ в моче составляет 5-20 мМЕ/мл. У большинства женщин перед овуляцией уровень ЛГ в моче возрастает до 40мМЕ/мл и более.

 

Оборудование и реагенты:

1) Емкость для взятия образцов мочи;

2) Секундомер;

3) Набор полосок в пластиковой трубке с влагопоглотителем;

4) Дневная моча (содержит наибольшее количество ЛГ).

 

Проведение анализа

1. Для эффективности проводимого теста необходимо установить среднюю продолжительность репродуктивного цикла (подсчет должен проводится как минимум в течение 2-х месяцев). Первый день менструации считается как первый день цикла:

 

Продолжитель-ность цикла, дни	День тестирования	Продолжитель-ность цикла, дни	День тестирования
21-22	6-й		15-й
23-24	7-й		16-й
	8-й		17-й
	9-й		18-й
	10-й		19-й
	11-й		20-й
	12-й		21-й
	13-й		22-й
	14-й		23-й

 

2. Погрузить полоску до красной метки в исследуемый образец мочи. Подержать ее там 5 секунд.

3. Произвести учет результата через 5-10 минут.

 

Учет результатов

Отрицательный результат	Появление окрашенной малиновой полосы в контрольной зоне полоски при отсутствии или наличии слабого окрашивания в тестовой зоне указывает на нормальный базальный уровень ЛГ. Овуляция в ближайшие 40 часов не произойдет.
Положительный результат	Появление малиновой окраски одновременно в контрольной и тестовой зонах полоски. Овуляция должна наступить в течение ближайших 40 часов.
Неопределенный результат	Отсутствие выраженной розовой окраски в контрольной зоне полоски. Тест нельзя интерпретировать. Рекомендуется повторить исследование.

 

Результат должен интерпретироваться как положительный при наличии отчетливого окрашивания в тестовой зоне полоски, вне зависимости от его интенсивности. Обычно интенсивность окраски тестовой зоны значительно ниже интенсивности окраски контрольной зоны полоски.

 

Клинико-диагностическое значение: ЛГ представляет собой гликопротеин, синтезируемый передней долей гипофиза. Продукция ЛГ регулируется гипоталамусом, клетки которого секретируют лютропин-рилизинг-гормон.

У женщин ЛГ совместно с фолликулостимулирующим гормоном управляют репродуктивным циклом. Всплеск синтеза и секреции ЛГ наблюдается за 12-18 часов до овуляции.

У мужчин ЛГ стимулирует интерстициальные клетки семенников, которые продуцируют тестостерон.

Некоторые заболевания (киста яичника, эндокринные нарушения) могут оказывать влияние на результаты теста. Поэтому результаты тестирования должны рассматриваться только в совокупности с другими клиническими данными.

Тестирование нельзя проводить во время беременности, после начала менопаузы и при введении хорионического гонадотропина.

ТЕМА 11. БИОХИМИЯ СЛЮНЫ

Лабораторная работа № 21.