Оценка концентрации альбуминов в сыворотке крови

Принцип

При взаимодействии альбумина с красителем бромкрезоловым зелёным в слабокислой среде образуется комплекс зелёного цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации альбумина в пробе.

Проведение анализа

Перед анализом рабочий и стандартный раствор альбумина выдерживают 30 мин при комнатной температуре. Готовят опытную и стандартную пробы:

	Опыт, мкл	Стандарт, мкл
Сыворотка крови	20	‑
Стандартный альбумин	‑	20
Рабочий раствор	2000	2000
	Перемешивают, инкубируют 1 мин, измеряют оптическую плотность опыта и стандарта против рабочего реактива при 628 (578‑640) нм в кювете 5,0 мм

Расчет

Содержание альбуминов [г/л] = ,

где Е_ОП и Е_СТ ‑ оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_СТ ‑ концентрация альбумина в стандартном растворе (40 г/л).

Если концентрация альбумина выше 80 г/л, пробу разбавить дистиллированной водой в 2 раза, повторить анализ, результат умножить на 2.

Нормальные величины

Сыворотка крови

30‑50 г/л

Биуретовый метод определения общего белка

Принцип

Пептидная связь в щелочной среде образует с медью комплексное сине-фиоле-товое соединение, интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка.

Проведение анализа

Рабочий и стандартный растворы должны быть комнатной температуры. Готовят опытную и стандартную пробы согласно таблице:

	Опыт, мкл	Стандарт, мкл
Сыворотка крови	20	––
Стандартный р-р белка	––	20
Биуретовый реактив	1500	1500
	Инкубируют 10 мин, измеряют оптическую плотность опытной и стандартной проб против воды при длине волны 540 нм в кювете 5,0 мм

Расчет

Содержание общего белка [г/л] = ,

где: Е_ОП и Е_СТ — оптическая плотность опытной и стандартной проб,
С_СТ — концентрация белка в стандартном растворе (70 г/л).

Нормальные величины

Сыворотка крови

65–83 г/л

Расчёт процентного содержания белков альбуминовой фракции в сыворотке крови производят по формуле:

Фракция альбуминов [%] = 100 А/Б,

где  А — концентрация альбуминов в сыворотке крови (г/л),
Б — концентрация общего белка в сыворотке крови (г/л),
100 — коэффициент пересчёта в %.

Нормальные величины

Альбумины сыворотки крови мужчины женщины

49–62 % 48,9–61,7 % 48,8–54,6 %

Клинико-диагностическое значение

Изменения концентрации альбуминов в плазме крови. Снижение содержания альбуминов (если исключить неполноценное питание, нарушение всасывания в кишечнике, большую потерю белка организмом) чаще бывает при выраженном нарушении синтетической функции печени. Максимальное снижение – при портальном циррозе и жировой дистрофии печени. Альбумины первыми теряются при нарушении функции почек, первыми выходят в ткани при отёках (концентрация альбуминов в плазме крови <20 г/л сопровождается отёками).

Альбумины – отрицательные реактантыи острой фазы: диспротеинемии на фоне неизменной концентрации общего белка формируются при воспалении за счёт снижения альбуминов и роста белков острой фазы (глобулины). Возрастание глобулиновых фракций в крови при парапротеинемиях или иных патологиях происходит также за счет снижения концентрации альбуминов.

Изменения концентрации общего белка в плазме крови могут иметь как абсолютный, так и относительный характер. Изменения абсолютного характера являются следствием колебаний содержания белка в плазме крови, в свою очередь относительные изменения зависят от объема крови, то есть наблюдаются при обезвоживании или гипергидратации.

Гиперпротеинемия. Истинный рост содержания белка в крови чаще всего связан с увеличением фракции глобулинов при острых инфекциях (активный синтез белков острой фазы), хронических инфекциях (за счет g‑глобулинемии), миеломной болезни, лимфогрануломатозе, саркоидозе.

Относительная гиперпротеинемия вызывается потерями внутрисосудистой жидкости в результате профузных поносов (например, холере), усиленном потоотделении, неукротимой рвоте, несахарном диабете, тяжелых и обширных ожогах, генерализованных перитонитах.

Гипопротеинемия часто связана с уменьшением фракции альбуминов крови. Истинная (абсолютная) гипопротеинемия: при недостаточном потреблении белка с пищей — заболевания желудочно-кишечного тракта, сужение пищевода, частичное/полное голодание; снижении синтеза белка — дисбаланс пищи по аминокислотам, хронические гепатиты, интоксикации, злокачественные опухоли, лечение кортикостероидами; усиленном распаде белка — кахексия, тяжелые инфекции, длительные воспалительные процессы, лихорадочные состояния, тиреотоксикозы; потере белка — нарушения проницаемости стенок капилляров, кровоизлияния, ожоги, острые и хронические кровотечения, нефротический синдром.

Относительная гипопротеинемия связана с  нарушением водного баланса — гипергидратация при гиперальдостеронизме; со снижением экскреции солей — при почечной недостаточности, а также использовани для питья морской воды и неадекватных инфузиях солевых растворов.

Оформление работы

Указывают принципы методов, регистрируют результаты по общему белку и альбумину, производят расчёты с вычислением %-го содержания фракции альбуминов от общего белка сыворотки крови, делают вывод о наличии/отсутствии патологий, отмечают клиническое значение.

Лабораторная работа 4.
Проведение проб на коллоидоустойчивость
белков сыворотки крови

Устойчивость белков сыворотки крови зависит от заряда и наличия гидратной оболочки. Нарушение коллоидной устойчивости белков под влиянием различных агентов проявляется сначала склеиванием (коагуляцией) молекул, а затем выпадением в осадок. При этом в первую очередь осаждаются более крупные и менее заряженные белки — глобулины. В норме устойчивость сывороточных белков зависит от соотношения количества альбуминов и глобулинов.

Материал для исследования

Сыворотка крови.

Тимоловая проба

Принцип

Сывороточные b‑, g‑глобулины, липопротеины осаждаются тимоловым реактивом при рН 7,55 при образовании глобулин-тимол-липидного комплекса.

Реактивы

1) Тимоловый буфер, рН 7,55‑7,6, 2) шкала сравнения: калибровочные растворы с разной интенсивностью мутности (перед использованием их перемешивают)

N пробы	Единицы помутнения, S‑H (по авторам: Shank‑Haagland)
1 2 3 4	5 10 15 20

Проведениеанализа

Берут 0,05 мл сыворотки крови, добавляют 3,0 мл тимолового буфера, перемешивают и инкубируют 15 мин при комнатной температуре, перемешивают и сравнивают со шкалой. Результат выражают в единицах помутнения S‑H.

Нормальные величины:

Сыворотка крови

0‑4 ед.S‑H

Практическое значение

Как и все коагуляционные тесты, тимоловая проба неспецифична. Однако по сравнению с другими коллоидными пробами она более приемлема для функционального исследования печени при дифференциальной диагностике. При поражении паренхимы печени (инфекционный, токсический гепатит) уже в преджелтушной стадии или при безжелтушной форме в 90‑100 % случаев проба выше нормы. У здоровых лиц, при механической желтухе, иной патологии печени, нарушении функции других органов тимоловая проба в пределах нормы.