Подкласс – анаэробные дегидрогеназы

Материал для исследования

1) Кипяченые дрожжи, 2) некипяченые дрожжи.

Принцип:

Анаэробные дегидрогеназы дрожжей – холоферменты с коферментами НАД⁺ и НАДФ⁺, катализируют реакции переноса атомов Н oт альдегидоспиртов, альдегидов на промежуточный субстрат (акцептор). Обнаружение дегидрогеназ проводят по изменению окраски добавленного к раствору дрожжей акцептора водорода – метиленового синего, который при восстановлении обесцвечивается.

Ход работы:

Берут 2 пробирки. В 1-ю наливают 10 капель кипяченых дрожжей, во 2-ю 10 капель некипяченых, добавляют по 10 капель 10 % глюкозы и по 1–2 капли метиленового синего (акцептор). Пробирки закрывают пробками и помещают в термостат при 37º С. Наблюдают изменение окраски в одной из пробирок.

Оформление работы

Указывают принципы методов, регистрируют результаты, делают вывод о проявлении активности ферментов разных классов, поясняют особенности реакций (донорно-акцепторные отношения – I класс, атакуемые связи – III класс).

Вопросы для самоконтроля

1) Природа, структурно-функциональная организация и роль простых и сложных ферментов. Классификация и роль кофакторов (коферментов и др.)

2) Механизм действия и свойства ферментов. Регуляция действия ферментов.

3) Современная номенклатура и классификация ферментов.

4) Принципы количественного определения активности ферментов. Единицы измерения активности ферментов.

5) Практическое использование ферментов и их ингибиторов в медицине.

ТЕМА 2.2.
Строение, классификация и роль витаминов

Актуальность

Витамины ‑ низкомолекулярные органические вещества различной химической природы, регуляторы обменных процессов и жизнедеятельности организма. В организме не синтезируются и являются незаменимыми пищевыми факторами. Биологическая роль витаминов связана с регуляцией обменных процессов в организме, поскольку многие из них входят в состав коферментов (простетических групп) ферментов. При недостаточном поступлении витаминов в организм развиваются тяжелые заболевания ‑ авитаминозы. Теоретические сведения о витаминах, а также практические навыки качественного и количественного определения этих веществ в различных биологических объектах нужны врачу для профилактики, диагностики и лечения гипо‑ и авитаминозов.

Цель

1) Изучить свойства, химическую структуру, классификацию, биологическую роль и источники витаминов и витаминоподобных веществ, клиническую картину гипер- и гиповитаминозов.

2) Научиться проводить качественные реакции с растворами витаминов.

3) Использовать полученные навыки для обнаружения водо‑ и жирорастворимых витаминов в биологических объектах.

Вопросы для самоподготовки

1) Понятие о витаминах. Признаки витаминов и витаминоподобных веществ, сходство и отличия.

2) Классификация и номенклатура витаминов. Единицы активности.

3) Разнообразие химических структур витаминов. Свойства витаминов.

4) Роль витаминов в метаболизме (коферменты, антиоксиданты и др.), способы регуляции обменных процессов.

5) Значение витаминов в питании, суточная потребность, возможности синтеза в организме.

6) Понятие о провитаминах. Примеры превращения провитаминов в витамины.

7) Понятие об антивитаминах. Примеры использования антивитаминов в качестве лекарственных средств.

8) Степени обеспеченности организма витаминами и влияющие факторы. Гипо‑ и авитаминозы (экзо‑ и эндогенные).

9) Гипервитаминозы, неспецифические признаки и признаки, характерные для отдельных витаминов. Депонирование жирорастворимых витаминов.

10) Характеристика отдельных жирорастворимых и водорастворимых витаминов. Их строение, активный центр и биологическая роль.

11) Лекарственные формы жиро‑ и водорастворимых витаминов.

Самостоятельная работа

Заполнить графы 1‑8 в Приложении 2 (таблица витаминов и витаминоподобных веществ, где графа 9 заполняется по мере изучения материала в течение года).

Лабораторная работа 1.
Реакции на жирорастворимые витамины

Реактивы

1) Серная кислота (конц.), 2) хлороформ, 3) уксусный ангидрид, 4) азотная кислота (конц.), 5) 0,025 % раствор цистеина, 6) 10 % раствор NaOH.

Реакция на ретинол (витамин А)

Принцип

Метод основан на способности концентрированной серной кислоты отнимать воду от ретинола с образованием окрашенных продуктов.

Материал для исследования

Витамин А (0,05 % масляной раствор).

Проведение анализа

В пробирку вносят 2 капли раствора витамина А, 5 капель хлороформа и 1‑2 капли концентрированной серной кислоты. Появляется синее окрашивание, очень быстро переходящее сначала в фиолетовое, затем в красно‑бурое (окраска развивается до темного, почти черного цвета).

Реакция на кальциферол (витамин D)

Принцип

Витамины группы D и их провитамины в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида теряют молекулу воды, превращаясь в продукт холестерилен сине-фиолетового и зеленого цвета.

Материал для исследования

Витамин D (масляной раствор).

Проведение анализа

В пробирку вносят 3 капли раствора витамина D, 5 капель хлороформа, добавляют 3 капли уксусного ангидрида и 3 капли концентрированной серной кислоты. Развивается красное окрашивание, быстро переходящая в фиолетовое, синее и далее в зеленое. Если объекты имеют примеси холестерина, то зеленая окраска переходит в красную.