Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Схема проведения иммунофлюоресцентного анализа
Для выявления антигенов на ту же плёнку наносят раствор антител к этому антигену, конъюгированных (т.е. связанных ковалентно) с молекулами флуоресцирующего соединения, которое выступает в роли маркёра, удобного для обнаружения. Плёнку выдерживают в растворе антител некоторое время, достаточное для связывания антител с антигенами (если таковые имелись в исследуемом образце), после чего избыток несвязавшихся антител смывают буфером, а плёнку рассматривают на флуоресцентном микроскопе. Если в образце присутствовал антиген патологии, то с ним будут прочно связаны молекулы меченых флуоресцеином антител, под микроскопом можно наблюдать зелёное окрашивание. Иммуногистохимические исследования похожи на иммунофлуоресцентный анализ. Главное отличие метода состоит в наличии биохимической составляющей вместо флюоресцентной метки. Кроме диагностики клеток крови, такие исследования полезны при оценке срезов тканей, культур клеток. Особенности проведения анализа Контрольные антитела к антигену выявляемой патологии в случаяе иммунохимического анализа конъюгированы не с флуоресцентным маркером, а с белком‑ферментом (пероксидаза хрена или щелочная фосфатаза). После сорбции меченых антител на возможных молекулах антигена в составе биообъекта добавляют раствора субстрата для ферментативной реакции. Единственная молекула белка‑фермента катализирует превращение десятков и сотен тысяч молекул неокрашенного субстрата в окрашенные продукты, усиливая «сигнал» и повышая чувствительность анализа. После остановки реакции появляются цветные окрашенные полосы в местах нахождения антигена. 3) ДНК‑диагностика заболеваний Достижения в области биохимии и молекулярной биологии меняют возможности коррекции различных патологических процессов. Доказана взаимосвязь между изменениями структуры ДНК и рядом заболеваний. Идентификация генов, нарушение работы которых приводит к развитию наследственных заболеваний, создала предпосылки для развития эффективных методов их коррекции, лечения и профилактики. На основе представлений об экспрессии генов, реализуемой в виде белкового продукта, разработаны новые способы диагностики и лечения заболеваний. С помощью генной терапии оказалось возможным встраивать полноценно работающие гены в клетки организма и восстанавливать метаболические нарушения, вызванные мутантными генами. Для выявления дефектов в структуре ДНК, ее нужно выделить (сначала из биологической жидкости, биоптата или культуры клеток, затем непосредственно из структуры клеток) и «наработать» в таком количестве, которого будет достаточно для лабораторного исследования. При использовании с целью терапии гены должны быть выделены для введения их в дефектные клетки организма. Основные методы, используемые в ДНК-диагностике заболеваний: выделение ДНК, расщепление ДНК, идентификация специфических последовательностей ДНК, блот-гибридизация ДНК, секвенирование ДНК (установление первичной структуры фрагментов), получение рекомбинантных ДНК и их амплификация.
Полимеразная цепная реакция и ПЦР‑исследования Необходимое оборудование При ПЦР‑диагностике для выделения образца ДНК или РНК используют микроцентрифугу (13000‑16000 об/мин), встряхиватель типа «вортекс» и термоблок до 100°С. Для амплификации (умножения) детектируемого участка генома выделенные образцы помещают в программируемый термостат (термоциклер или амплификатор), где можно задавать температурный режим (90‑95°С, 30‑50°С, 60‑70°С), параметры времени, количество циклов. Прибор рассчитан на одновременный анализ 24‑96 образцов клинического материала, из которых один положительный и один отрицательный контроль. Выбор оптимального режима работы определяется длиной и специфичностью амплифицируемого участка. Для ПЦР-диагностики необходимы: исследуемая ДНК, субстраты синтеза (дАТФ, дГТФ, дЦТФ, дТТФ), два праймера, термофильная ДНК‑полимераза, ионы Mg2+.
Этапы проведения анализа Амплификация заключается в повторении циклов, представляющих собой трехступенчатый процесс, протекающий при разных температурах. 1) Денатурация ДНК (90‑95°С) ‑ разрыв слабых связей между основаниями матричной молекулы ДНК с образованием 1‑цепочечных молекул.
|
||||||
Последнее изменение этой страницы: 2021-04-05; просмотров: 60; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 3.147.65.65 (0.004 с.) |