Рецепторы мембраны тромбоцитов

Специфические функции тромбоцитов в ге­мостазе требуют активного взаимодействия с другими клетками, плазменными белками и не­белковыми веществами. Роль посредника меж­ду тромбоцитом и различными факторами внеш­ней среды, в том числе другими участниками процесса гемостаза, играют рецепторы тромбо­цитов.

На поверхности каждого тромбоцита распо­ложено значительное количество различных ре­цепторов. В самом тромбоците имеется сложная система передачи и обработки сигналов, посту­пающих извне.

Большинство рецепторов являются гликопро-теинами (ГП), фиксированными на цитоплазмати-ческой мембране тромбоцита. Один конец моле­кулы рецепторных ГП находится во внеклеточ­ном пространстве, а другой «пронизывает» мем­брану и контактирует со структурами тромбоци­та, расположенными на внутренней стороне ци-топлазматической мембраны. На наружных час­тях ГП молекул располагаются рецепторные ло-кусы (рис. 19), специфичные для разных веществ (лигандов). Лиганды - вещества, которые могут специфически взаимодействовать с рецептором, вызывать его конформационные изменения и та­ким образом модулировать функциональную ак­тивность тромбоцита.

Каждый рецептор имеет один или несколько физиологических агонистов и может связывать их с высокой или с низкой аффинностью.

В табл. 3 представлены данные об основных рецепторах на поверхности тромбоцитов и их агонистах.

Рис. 19. Поверхностные гликопротеиновые (GP) рецеп­торы тромбоцита. На наружных частях молекул гликопро-теинов располагаются рецепторные локусы. Молекула ре-цепторного гликопротеина «пронизывает» мембрану. После соединения рецепторных локусов с лигандами создается сигнал активации, передающийся к внутренним частям тромбоцитов

Тромбоциты

Рецепторы на тромбоцитарной мембране

Таблица 3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Мембранные рецепторы	Агонисты (лиганды)	Число рецепторов на 1 тромбоците
Рецепторы для высокомолеку­лярных белков	GPIb-V-IX	Фактор Виллебранда, тромбин	50 000
GPIIb-IIIa	Фибриноген, фактор Виллебранда, фибрин, фибронектин, витронектин, тромбоспондин	50 000
GPIc-IIa	Фибронектин, ламинин
VN-R	Витронектин, тромбоспондин
GPIa-IIa	Коллаген
GPIIIb	Тромбоспондин
GPVI	Коллаген
Рецепторы для физиологиче­ских стимуля­торов	P2-R	АДФ	Выc. афф. 600 Низ. афф. 60 000
α2-adr-R	Адреналин
5-HT2-R	Серотонин
HrR	Гистамин
V,-R	Вазопрессин
Thr-R (STDR)	Тромбин	1700-2000
TP-R	Тромбоксан	1000-1700

 

Выс. афф. - высокоаффинные места связи, низ. афф. - низкоаффинные места связи.

Рецепторы для высокомолекулярных белков

Гликопротеиновый комплекс GPIb-V-IX тром­боцитов участвует в опосредованной фактором Виллебранда адгезии тромбоцитов к субэндотели-альным структурам и активации тромбоцитов.

Полипептидные цепи GPIba, GPIb(3, GPV, GPIX полностью расшифрованы по аминокис­лотной последовательности, известны их кодиру­ющие гены. Характерной особенностью комплек­са является включение в пептидные цепи 24 ами­нокислотных остатков с лейцином, которые на­ходятся в строго определенных местах. Эти бел­ки получили название богатых лейцином глико-протеинов (LRG - leucine rich glycoproteins).

Связывание фактора Виллебранда с GPIb-V-IX интактных тромбоцитов незначительно. Контакт молекулы фактора Виллебранда с субэн-дотелиальным слоем, особенно при воздействии высокой скорости кровотока, приводит к конфор-мационным изменениям в молекуле, что значи­тельно повышает сродство фактора Виллебран­да к GPIb-V-IX.

Нефизиологическими стимуляторами процес­са взаимодействия фактора Виллебранда и GPIb-V-IX являются антибиотик ристомицин и проте­ин змеиного яда - ботроцетин. Ристомицин свя-

зывается с богатым пролином участком молеку­лы фактора Виллебранда и с одним или более доменами GPIb на тромбоцитах, а ботроцетин -только с фактором Виллебранда. Эти воздействия приводят к аналогичным физиологическим кон-формационным изменениям молекулы фактора Виллебранда и GPIb-V-IX и резко увеличивают сродство между фактором Виллебранда и тром­боцитарной мембраной.

Тромбоцитарный GPIb-V-IX также является высокоаффинным местом связывания тромбина. Взаимодействие GPIb-V-IX с фактором Вилле­бранда и тромбином приводит к активации тром­боцитов.

При врожденной недостаточности рецептор-ного комплекса не происходит связывания с фак­тором Виллебранда (vWF), что характерно для болезни Бернара-Сулье.

Интегрины

Кроме богатых лейцином гликопротеинов, на мембране тромбоцитов находится большое коли­чество адгезивных рецепторов, относящихся к се­мейству иншегринов. Интегрины - трансмембран­ные гликопротеины, характеризующиеся общно-

 

Тромбоциты

стью протеиновых цепей, антигенных свойств и функции. Они принимают участие во взаимодей­ствии клетки с клеткой и клетки с субэндотелиаль-ным матриксом. Благодаря способности образо­вывать связи со многими белками интегрины уча­ствуют в процессах распознавания, адгезии, миг­рации клеток на матриксе, репаративных, иммун­ных и других реакциях. К семейству интегринов относятся рецепторы к фибриногену, витронекти-ну, фибронектину, коллагену и другим белкам. Ин­тегрины способны распознавать характерную ами­нокислотную последовательность RGD (трипеп-тид Arg-Gly-Asp), имеющуюся в лигандах. Эта пос­ледовательность присутствует во всех адгезивных белках крови, белках α-гранул тромбоцитов, фиб­риногене, факторе Виллебранда, фибронектине, витронектине, ламинине. Для соединения интегри­нов с лигандами типична зависимость от двухва­лентных катионов Са²⁺ и Mg²⁺.

Комплекс GPIIb-IIIa является интегриновым рецептором тромбоцитов, который взаимодей­ствует в первую очередь с фибриногеном (фиб-риногеновый рецептор). Это взаимодействие обеспечивает основной путь агрегации тромбоци­тов друг с другом через «фибриновые мостики». При врожденном дефиците этого рецептора - тромбостении Гланцмана - резко нарушена или отсутствует агрегация тромбоцитов с большин­ством индукторов агрегации, в том числе колла­геном, тромбином, АДФ. Агрегация тромбоци­тов с этими индукторами также отсутствует в плазме пациентов с афибриногенемией, если фиб­риноген отсутствует также и в пулах хранения самих тромбоцитов.

Наличие в комплексе GPIIb-IIIa мест распоз­навания RGD объясняет способность этого ин-тегрина соединяться с фактором Виллебранда, фибронектином, витронектином. Показано, что связь GPIIb-IIIa с фактором Виллебранда важна для эффективной агрегации тромбоцитов в усло­виях воздействия высоких скоростей кровотока. Ключевой особенностью комплекса GPIIb-IIIa является способность исполнять роль рецептора только на поверхности активированных тромбо­цитов. Аффинность этого комплекса на поверх­ности неактивированных клеток очень низкая, а его антигенная характеристика отличается от та­ковой на активных тромбоцитах. Активация тромбоцитов приводит к значительному повыше­нию аффинности и изменению антигенной харак­теристики GPIIb-IIIa.

Активированные тромбоциты могут связы­вать на своей поверхности более 40 000 молекул фибриногена посредством GPIIb-IIIa. Это взаимо-

Рис. 20. Тромбиновый рецептор тромбоцитарной мембраны, Схожее строение имеют рецепторы к АДФ, адреналину, серотонину, эйкозаноидам и другим низкомолекулярным соединениям. За счет нескольких петель рецептор имеет мно­гофункциональный характер. Внутриклеточный С-конец взаимодействует с цАМФ-зависимой протеинкиназой, гидрофиль­ные петли рецептора активируют опосредуемые G-белками внутриклеточные функциональные перестройки. Со сторо­ны N-конца тромбин вызывает частичный протеолиз и тем самым активирует рецептор

 

 

Тромбоциты

действие происходит в присутствии двухвалентных катионов (Са²⁺) и поначалу является обратимым. Далее, по мере образования дополнительных кон-тактов, происходит стабилизация агрегата.

У 25% жителей Северной Европы в связи с по­лиморфизмом аллелей в GPIIIa имеется ассоциация В развитием ишемической болезни сердца и инфар­кта миокарда в относительно молодом возрасте.

Использование ингибиторов для комплекса GPIIb-IIIa на ранних стадиях тромбоза приводит к быстрому восстановлению кровотока по тром-бированному сосуду и позволяет избежать инфар­кта тромбированного органа.

Рецепторы для физиологических стимуляторов

Рецепторы для физиологических стимулято­ров (тромбина, АДФ, адреналина, серотонина,

эйкозаноидов и др.) представляют собой транс­мембранные пептиды с 7 гидрофобными повто­рами, которые 7 раз пересекают плазматическую мембрану (рис. 20). Между ними расположены крупные гидрофильные участки, обращенные наружу и внутрь клетки. Цитоплазматический С-конец может фосфорилироваться протеинки-назами, прежде всего цАМФ-зависимой кина-зой. В цитоплазматических петлях находятся места связывания с системой G-белков, которые в качестве внутриклеточных посредников обес­печивают разнообразные физиологические реак­ции, в первую очередь освобождение внутрен­него пула Са²⁺. Каждый активированный тром-биновый рецептор приводит к образованию не­скольких внутриклеточных мессенджеров акти­вации тромбоцитов.

 

Органеллы тромбоцитов

В цитоплазме тромбоцитов расположены митохондрии, пероксисомы (содержат катала-зу), включения гликогена, лизосомы и гранулы, содержащие пулы хранения различных веществ. В тромбоцитах выделяют 3 вида органелл хра­нения: а-гранулы, электронно-плотные тельца (8-гранулы) и лизосомы (у-гранулы). На рис. 21 представлены основные компоненты, которые могут освобождаться из гранул и цитозола тром­боцитов при действии разных стимуляторов.

В а-гранулах хранится до 30 различных бел­ков, большинство из которых были синтезирова­ны еще в мегакариоцитах: β-тромбоглобулин, фактор 4 тромбоцитов, фактор V, фактор Виллеб-ранда, фибриноген, тромбоспондин, фибронек-тин, витронектин, оц-макроглобулин, Р-селектин, фактор роста тромбоцитов (PDGF), ингибитор тка­невого активатора плазминогена типа 1 (PAI-1), α₂-антиплазмин, α₁-антитрипсин, протеин S, лейкоцитарный хемотаксический фактор, высо­комолекулярный кининоген и др. Участие бел­ков α-гранул в физиологических и патологичес­ких процессах многостороннее: а) митогенный и хемотаксический эффекты; б) адгезивное действие, модулирование агрегации тромбоцитов; в) учас­тие в пламенном гемостазе; г) вазоактивное дей­ствие; д) иммунные и другие эффекты.

В плотных тельцах (5-гранулы) хранятся суб­станции, вызывающие, прежде всего, сосудистые реакции и агрегацию тромбоцитов: адениловые

Рис. 21. Секретируемые факторы тромбоцитов присут­ствуют в тромбоцитах в 3 видах гранул хранения. Разные стимуляторы приводят к освобождению содержимого гра­нул тромбоцитов

Тромбоциты

 

нуклеотиды (АТФ, АДФ, АМФ, ц-АМФ, ГДФ),

серотонин, адреналин, норадреналин, дофамин, гистамин, Са²⁺ и др. Высвобождающиеся из пула хранения АТФ и АДФ быстро метаболизируют-ся в плазме до АМФ и аденозина; последние об­ладают прямым коронарорасширяющим действи­ем. АДФ является важнейшим физиологическим метаболитом, обеспечивающим первичный гемо­стаз, стимулируя агрегацию тромбоцитов.

В лизосомах (γ-гранулы) находятся гидроли­тические ферменты - пероксидаза, глюкозидазы, галактозидаза или β-глицерофосфатаза, кислая фосфатаза, неспецифическая эстераза. Лизосомы секретируют хранящийся в них секрет только при необратимой активации.

Тромбоциты способны секретировать содер­жимое гранул как частично при обратимой ак-

тивации и в процессе трофических взаимодей­ствий с органной капиллярной сетью, так и пол­ностью при реакции освобождения, связанной с необратимой активацией. После дегрануляции цитоплазма тромбоцитов «опустошена». В неак­тивированных тромбоцитах цитоплазма может выглядеть «опустошенной» при врожденном де­фекте заполнения гранул, приводящем к дефи­циту пула хранения - синдрому «серых» тромбо­цитов.

После секреции большинство гранулярных мембран деградирует, гранулы не восстанавлива­ются, и тромбоциты теряют свою физиологичес­кую активность. Если они находятся в токе кро­ви, измененная форма способствует их быстрой элиминации в селезенке.

Тромбоцитарные факторы