Исследования агрегации тромбоцитов в образцах цельной крови

Корпорация «Chrono-log» производит агре-гометры, работающие на образцах цельной цит-ратной крови и использующие электронно-им-педансный и люминесцентный методы детек­ции (рис. 77). Прибор регистрирует микротоки, протекающие в специальном электродном бло­ке, при погружении его в различные образцы -цельную кровь, плазму, богатую тромбоцитами (ПБТ), разведенную кровь или во взвесь отмы­тых тромбоцитов. Первоначальный контакт электродов с образцом приводит к образованию монослоя тромбоцитов. Затем при добавлении индукторов агрегации и других активных аген­тов происходит постепенная агрегация тромбо­цитов на электродах, которая приводит к харак­терным изменениям электрических свойств сис­темы.

Методом электронного импеданса можно проводить измерения агрегации в условиях, в

которых оптическая агрегация это сделать не может - в гемолизированных, иктеричных и ли-пемичных образцах. Импедансная агрегометрия может быть использована с успехом при иссле­довании пациентов с синдромом гигантских тромбоцитов, где оптическая агрегометрия при­водит к неправильным результатам.

Исследование агрегации на агрегометрах «Chrono-log» проводится очень быстро: для ис­следования агрегации в 5 мл цельной крови не­обходимо времени меньше, чем требуется для приготовления плазмы для коагулограммы. При этом методика позволяет выявить большинство видов дисфункции тромбоцитов. Высокочув­ствительный импедансный метод позволяет очень быстро и точно провести скрининг для выявления болезни Виллебранда на основе рис-тоцетин-агрегации цельной крови (рис. 78). Этот же подход помогает подтвердить синдром Бер-нара-Сулье у детей, быстро найти объяснение длительным кровотечениям у пациентов, прини­мающих различные противовоспалительные ле­карства.

 

Рис. 77. Агрегометр «Chrono-log», исследующий агрега­цию тромбоцитов на цельной крови электронно-импеданс-ным методом

Рис. 78. Быстрая диагностика болезни Виллебранда и

врожденных нарушений функции тромбоцитов на агрего-метре «Chrono-log» с цифровым и графическим представ­лением результатов

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

Наличие на агрегометре люминесцентного датчика позволяет одновременно с агрегацией тромбоцитов исследовать и другие процессы, на­пример секрецию гранул.

В то же время практически все агрегометры корпорации «Chrono-log», как дополнение к им-педансным и люминесцентным каналам, имеют оптические каналы для проведения классической (турбидиметрической) агрегометрии.

Процессы агрегации в цельной крови наи­более приближены к физиологическим услови­ям in vivo. Именно поэтому достигается высокая достоверность и специфичность результатов ис­следования, что дает возможность не только

быстро провести необходимую диагностику, но и обеспечить надежную программу мониторин­га проводимой терапии в реальном времени. По­скольку импедансная агрегометрия на цельной крови является наиболее адекватным средством для определения гиперагрегации, метод реко­мендуется для исследования пациентов с риском тромбоэмболических осложнений. Этот метод более чувствителен и адекватен по сравнению с оптической агрегацией, поскольку измерения происходят в присутствии всех нативных элемен­тов цельной крови, включая эритроциты и лей­коциты.

Тромбоэластография

Тромбоэластография (ТЭГ) - один из первых методов комплексной оценки гемостаза. Тромбо­эластография была предложена еще в 1948 г. Гар-тертом (Hartert) и до настоящего времени оста­ется единственным методом, который качествен­но и полуколичественно позволяет охарактери­зовать процесс образования сгустка, его механи­ческие характеристики, плотность, стабильность и процесс фибринолиза. В настоящее время ме­тод усовершенствован, он позволяет количествен­но оценить перечисленные параметры. Модифи­кацию метода с использованием компьютерного анализа данных можно назвать тромбоэластомет-рией (ТЭМ). ТЭГ и ТЭМ могут быть использова­ны для исследования цельной крови, цельной кро­ви с антикоагулянтами, богатой и бедной тром­боцитами плазмы с цитратом в качестве антико­агулянта.

Принцип ТЭГ: исследуемый образец помеща­ется между двумя поверхностями, на одну из ко­торых подаются вращательно-колебательные движения, а другая соединена с устройством, при­нимающим и фиксирующим колебания. После добавления в образец активатора свертывания крови начинается образование сгустка. По мере полимеризации фибрина колебания с одной по­верхности начинают передаваться на другую и регистрироваться. Получающаяся кривая зависи­мости амплитуды колебаний от времени харак­теризует процесс свертывания крови, а позже фибринолиза (рис. 79).

Наиболее важной информацией, которую можно извлечь из кривой ТЭГ (рис. 80), является:

• Время до начала образования фибрина (г-вре-
мя).

• Время формирования сгустка (к-время).

• Максимальная амплитуда (зависит от кон­
центрации фибриногена, количества и каче­
ства тромбоцитов, взаимодействия фибрина
и тромбоцитов в сгустке).

• Время лизиса тромба.

Метод позволяет исследовать как спонтанную коагуляцию, так и индуцированную активатора­ми. Применение различных активаторов и реак­тивов позволяет достичь разных диагностических целей. В качестве дополнительных реактивов мо­гут использоваться гепарин, фибринолитики или их ингибиторы. Изменения ТЭГ, которые отража­ют наиболее распространенные изменения гемос­таза, представлены на рис. 81. Наряду с изменени­ями, вызываемыми лекарственными препаратами, ТЭГ позволяет идентифицировать тромбоцитопа-тии, гиперкоагуляцию и другие нарушения.

В настоящее время разработаны достаточно компактные тромбоэластографы, которые мож­но размещать на каталке около постели больно­го и оценивать процесс гемостаза немедленно после взятия крови, что существенно уменьшает влияние преаналитических факторов. Один из наиболее адаптированных к клиническим иссле­дованиям тромбоэластографов «Rotem Gamma» показан на рис. 82.

 

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ

 

Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ