Опыт 4. Осаждение белков трихлоруксусной кислотой

 

Трихлоруксусная кислота (CCl₃COOH) является очень чувствительным и специфическим реактивом на белок, поэтому ее используют для осаждения белков в биологическом материале. Трихлоруксусная кислота осаждает из раствора только белки, но не осаждает продукты их гидролиза. Это особенно важно для разделения белковых и небелковых азотсодержащих веществ.

Ход работы:

В три пробирки наливают по 1 см³ растворов яичного белка и добавляют несколько капель 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты до появления осадка. Наблюдения и выводы записывают в тетрадь.

 

Задание:

1. Изучить методические указания и ход предлагаемых работ.

2. Провести выше описанные опыты.

3. Письменно подготовить отчет по занятию: записать цель, название опытов, ход их проведения, результаты опытов и выводы.

4. Сделать вывод о возможных способах осаждения белков.

5. Защитить работу и сдать теоретический материал по контрольным вопросам темы: «Обмен белков».

 

Задание для СРС: подготовить теоретический материал по теме: «Ферменты».

 

Контрольные вопросы

1. Расскажите о ферментативном гидролизе белков пищи в желудочно-кишечном тракте.

2. Промежуточный распад аминокислот. Напишите реакции дезаминирования, переаминирования, декарбоксилирования аминокислот. Каковы продукты данных реакциий?

3. Каковы пути обезвреживания аммиака в организме?

4. Расскажите об орнитиновом цикле мочеобразования.

5. Дайте понятие о положительном и отрицательном азотистым балансах. Назовите факторы, влияющие на азотистое равновесие.

6. Дайте характеристику ДНК, строение, локализация в клетке.

7. Назовите основные виды РНК, строение и связь с биосинтезом белка.

8. Биосинтез белка в организме, его основные этапы.

9. Назовите необходимые условия для биосинтеза белка.

 

 

ЗАНЯТИЕ 4

Тема: Ферменты.

Цель: Получить опыт в выделении ферментов, определении их свойств и выявить факторы, влияющие на активность ферментов.

Материальное обеспечение:

Продукты: свежие пекарские дрожжи; 0,2% раствор крахмала.

Реактивы: 1%-ый раствор йода; 2%-ый раствор сахарозы; 5%-ый раствор гидроксида натрия; 5-ый раствор сульфата меди; 0,15 М однозамещенного фосфата калия КН₂РО₄ (рН=4); 0,15 М двузамещенного фосфата натрия Na₂НРО₄ (рН=9); 1%-ый раствор хлорида натрия; дистиллированная вода.

Посуда и оборудование: пробирки; складчатые бумажные фильтры; цилиндры на 10 см³; спиртовки; водяная баня; холодильник; термостат.

Методические указания

Ферменты - это специфические белки, входящие в состав всех клеток и тканей живых организмов, играющие роль биологических катализаторов.

Ферменты чрезвычайно эффективны и проявляют высокую каталитическую активность в условиях умеренной температуры (температура тела), нормального давления и в области, близких к нейтральным значениям pH среды. Активность изменяется от присутствия различных веществ- активаторов и ингибиторов.

Например, соляная кислота активирует фермент пипсиноген, но парализует действие амилазы слюны. Большинство тяжелых металлов (свинец, кадмий, ртуть) являются ферментными ядами.

Активаторами служат ионы магния, марганца, кальция, цинка. Фермент обнаруживается по его действию на субстрат. Например, отсутствие синей окраски при добавлении йода в крахмал показывает, что в растворе присутствует фермент амилаза, под действием которого крахмал осахаривается.

При длительном кипячении, действии химическими реагентами ферменты денатурируют, как все белки, теряя при этом каталитические свойства.

Как белки, они легко осаждаются из водных растворов при низких температуры методами высаливания или осторожным добавления ацетона, этанола. При этом ферменты не теряют своих каталитических свойств.