Опыт 1. Биуретовая реакция (реакция Пиотровского)

Биуретовая реакция обусловлена наличием в соединениях пептидной группировки (-СО-NH-). Белки, пептоны, пептиды, амиды и имиды кислот дают с солями меди в щелочной среде окрашенный биуретовый комплекс. Схематично реакцию можно представить следующим образом:

NaOH

...- NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-CH-CO-...

R₁ R₂ R₃ R₄

Полипептид (кетоформа)

 

OH OH OH OH

Cu(OH)₂

... = N-CH-C=NH-CH-C=NH-CH-C=NH-CH-C=...

R₁ R₂ R₃ R₄

Полипептид (енольная форма)

R₂

N CH C = N

C O CH - R₃

R₁ - CH O Cu C

N N OH

_......

 

Окрашенный биуретовый комплекс

 

 

Для медных биуретовых комплексов различных соединений характерна окраска от красной через фиолетовую до синей с максимумом поглощения в интервале от 440 до 640 нм, что используется при количественном определении общего белка в исследуемом продукте.

Окраска биуретового комплекса зависит от качества медной соли в растворе и от структуры вещества, с которым координирован ион меди. Продукты распада белка - пептоны и полипептиды дают биуретовую реакцию с красным оттенком. Присутствие в исследуемом растворе белка аммонийных солей, например, сернокислого аммония, препятствует образованию окрашенного продукта. В этом случае для успешного проведения реакции требуется брать большой избыток щелочи. Избыток медного купороса маскирует образование окраски.

Ход работы:

В пробирку наливают 5 капель 1%-ного раствора яичного белка. Затем приливают 5 капель 10%-ного едкого натра и 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди. Отмечают окраску. Результаты работы записывают в табл.1.

 

 

Опыт 2. Нингидриновая реакция.

 

Реакция основана на взаимодействии аминокислот и аминов с нингидрином. Большинство аминокислот дает красно-фиолетовое окрашивание, аспарагин - оранжево-коричневое, пролин и оксипролин -желтое.

Нингидрин (трикетогидринденгидрат) вызывает окислительное дезаминирование аминокислот с образованием конденсированного соединения розовато-фиолетового цвета («пурпура Руэманна»):

 

 

Нингидриновая реакция широко используется как для открытия отдельных аминокислот, так и для определения их количества в биологических объектах.

Ход работы:

В одну пробирку вносят 5 капель 1%-ного раствора яичного белка, в другую - 5 капель 1%-ного раствора желатина. В каждую пробирку добавляют по 3 капли 0,5%-ного раствора нингидрина, закрывают пробирки плотно пробками и нагревают на кипящей водяной бане 18 минут. Через 2-3 минуты в обеих пробирках появляется окраска. Результаты работы записывают в табл. 1.