Осмотр присланного на анализ объекта

Наружный осмотр объекта. Объекты подвергают подробному осмотру и сравнивают с описанием в сопроводительном документе. Обращают особое внимание на особенности упаковки объекта, надписи на банках, склянках, пакетах, ящиках, коробках, на их содержание, оттиск, целостность печати. Убедившись в полном соответствии, приступают к вскрытию упаковки, что делается осторожно, чтобы предотвратить попадание в сам объект частей печати или упаковки.

Осмотр объекта после вскрытия упаковки. Данные осмотра объекта позволяют предположить, что произошло отравление, и включить в план анализа в первую очередь исследование на предполагаемые вещества.

Определение природы, характера и запаха объекта. После вскрытия упаковки важно установить, какие органы или их части доставлены на исследование и в каком они состоянии – имеются ли признаки гнилостного разложения. Специфический запах объекта (особенно содержимого желудка) можно уловить при отсутствии резких признаков гниения, так как сероводород и аммиак, образующиеся при этом, могут маскировать запах чужеродных соединений. Характерных запах объекту могут придать «летучие» яды. Например, запах горького миндаля указывает на возможное отравление цианидами, запах пиридиновых оснований – на возможное отравление денатурированным спиртом.

Определение наличия инородных включений. Объект осматривают вначале визуально, а затем с помощью лупы. Инородные включения могут быть обнаружены в содержимом желудка. Все подозрительные инородные включения отбирают при помощи пинцета и анализируют отдельно.

Определение окраски объекта. Окраска объекта (главным образом содержимого желудка) может также ориентировать на возможное отравление некоторыми ядовитыми веществами.

Например, желтая окраска указывает на возможное отравление хроматами, азотной кислотой, некоторыми анилиновыми красителями, пикриновой кислотой, акрихином.

Биологические жидкости (кровь, моча) могут также иметь необычную окраску при отравлении некоторыми ядовитыми веществами. Например, при попадании в организм фенола моча обычно окрашена в оливковый или темно-зеленый цвет за счет продуктов окисления фенола.

 

Предварительные испытания с объектом

 

Предварительные испытания преследуют цель сократить время исследования объекта, что особенно важно при ненаправленном анализе. Такие испытания позволяют сузить круг веществ в окончательном испытании и определить направление его основного исследования. Обычно для предварительных испытаний подбирают групповые реакции, обладающие высокой чувствительностью. С их помощью можно обнаружить не только токсические, но и терапевтические дозы принятых веществ, а иногда и естественно содержащиеся в объекте соединения. Поэтому делать вывод, что найденное вещество явилось причиной отравления, только по результатам предварительных испытаний недопустимо.

Положительный результат предварительных испытаний указывает на то, что в исследуемом объекте может быть найдено одно вещество или группа веществ, которые дают такие же реакции. В этом случае в план анализа включается основное исследование на эту группу соединений с использованием специальных приемов, методов и подтверждающих реакций.

Отрицательный результат предварительных испытаний указывает на отсутствие соответствующих веществ в исследуемом объекте, и данное вещество (или группа веществ) исключается из плана анализа, после окончания экспертизы делается заключение о его (или их) необнаружении.

Подготовка объектов к изолированию ядовитых веществ

 

Внутренние органы (печень, почки, мышечная ткань). Органы измельчают до размеров кусочков 0,5*0,5*0,5 см. Естественно, что более мелкое измельчение приводит к увеличению экстракционной поверхности и одновременно к значительному увеличению количества балластных эндогенных соединений (белков, ферментов, продуктов распада белковых молекул, пигментов и др.) в извлечении. При этом химик вынужден будет применить особые способы очистки, что приведет к потере токсических веществ, особенно при их следовых количествах в объекте.

Рекомендуется использовать также вымораживание объекта при температуре -30-40⁰С. При этом в органах образуются льдинки, которые разрывают клетки, ткани и способствуют выходу токсических веществ в окружающую среду, что увеличивает процент изолирования искомых соединений.

Можно использовать лиофилизацию, т. е. высушивание объекта при низких температурах в вакууме. Это приводит к потере объектом воды и получению при изолировании более чистых извлечений.

Если объект законсервирован спиртом, его осторожно удаляют. В случае подозрения на отравление летучими соединениями мышьяка, ртути объект подщелачивают перед удалением спирта карбонатом натрия.

Для анализа берут навеску объекта 5, 25, 50 или 100 г (зависит от конкретной методики).

Кровь. Ядовитые вещества и их метаболиты в крови находятся в свободном виде или могут быть связаны с белками (альбуминами, глобулинами). При пробоподготовке крови к экстракции используют приемы, позволяющие разрушить комплекс анализируемого вещества с белком. Для этой цели рекомендованы следующие методы:

1. Добавление к крови смешивающихся с водой органических растворителей (этилового, метилового спиртов, ацетонитрила, ацетона). Их количество в 10 раз превышает объем крови. Эффективность очистки от белков зависит от величины диэлектрической проницаемости используемого растворителя. При понижении диэлектрической проницаемости сила притяжения между молекулами растворенных веществ возрастает. В результате под влиянием ацетона и спиртов (этилового и метилового) происходит агрегация молекул белковых веществ крови, понижается растворимость и происходит выпадение их в осадок.

2. Добавление химических агентов для коагуляции белков: кислот (трихлоруксусной, хлорной), солей тяжелых металлов (например, солей бария).

3. Термическая обработка крови. Этот метод используют для ядовитых веществ, которые не разлагаются при повышенной температуре. Он не рекомендуется при анализе объекта, содержащего термолабильные соединения.

Процесс пробоподготовки крови к анализу – весьма ответственная операция, при которой возникает опасность адсорбции значительного количества анализируемого вещества на скоагулированном белке.

Моча. С мочой токсические вещества выделяются как в неизменном состоянии, так и в виде метаболитов и конъюгатов с серной, уксусной, глюкуроновой кислотами. Пробоподготовка мочи к экстракции токсических веществ и их метаболитов включает проведение разрушения конъюгатов с указанными кислотами. Для этой цели проводят неспецифический кислотный или специфический ферментативный гидролиз.

Кислотный гидролиз является более быстрым и простым в осуществлении. Однако вследствие неспецифичности реакции расщепления ковалентной связи и жестких условий проведения в среде концентрированной кислоты при кипячении в течение длительного времени или при нагревании в автоклаве под давлением, образуется большое количество побочных продуктов. Экстракция органическим растворителем из полученного гидролизата дает высокий фон и много посторонних пиков при проведении анализа методом газовой хроматографии. Кислотный гидролиз проводится в герметично закрытых сосудах, которые помещают в водяные бани или специальные нагревательные блоки. Можно использовать кипячение с обратным холодильником или нагревание при 100-125⁰С в автоклаве под давлением 12-15 пси.

Ферментативный гидролиз проводится в присутствии одного или смеси ферментов β-сульфатазы и β-глюкуронидазы в мягких условиях, что уменьшает образование побочных продуктов, и гидролизат получается более чистым. Существенным недостатком методами являются необходимость соблюдения строгих условий гидролиза: рН, температуры, состава буфера, активности ферментов, - а также длительность процесса (12-20 ч). Легче гидролизуются конъюгаты, образованные через кислород фенольного гидроксила, более длительно – конъюгаты, связанные через кислород спиртовой (гидроксильной) группы.

Слюна. Для снижения активности ферментов слюну при хранении замораживают. Перед экстракцией ее разбавляют водой очищенной в отношении 1:3, после чего экстрагируют токсические вещества органическими растворителями при соответствующем значении рН.

Волосы, ногти. Для удаления внешних загрязнений волосы и ногти отмывают 2М раствором хлороводородной кислоты и метанолом (или этанолом), затем сушат при комнатной температуре и отбирают для анализа навеску 30-40 мг.[1, 4, 6, 9]