Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь FAQ Написать работу КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Суперовуляция. Способы извлечения эмбрионов↑ ⇐ ПредыдущаяСтр 18 из 18 Содержание книги
Поиск на нашем сайте
Для вызывания суперовуляции у крупного рогатого скота используются гонадотропные препараты (гонадотропин сыворотки жеребых кобыл - ГСЖК и фолликулостимулирующий гормон - ФСГ - гипофиза животных), для синхронизации половых циклов - аналоги простагландина Ф2-альфа (эстрофан, магэстрофан, клопростенол, суперфан, ремофан, клатрапростин, эстуфалан и др.). Препараты ГСЖК обладают комплексной фолликулостимулирующей и лютеинизирующей активностью. Период полураспада экзогенного ГСЖК у коров составляет около 6 дней. Соотношение ФСГ и ЛГ в различных партиях неодинаковое, что сказывается на результативности суперовуляции. Стимуляция роста фолликулов препаратами ГСЖК сопровождается, как правило, увеличением массы яичников, образованием после овуляции разного числа и величины желтых тел. Из-за длительного распада ГСЖК в крови животных накапливаются повышенные концентрации гормонов. Изменение эндокринного статуса при индукции суперовуляции может оказывать неблагоприятное действие на оплодотворяемость яйцеклеток, развитие зародышей, а также на физиологическое состояние половых органов (в частности, наблюдается кистозное перерождение яичников). Для исключения длительной стимуляции роста фолликулов применяется анти-СЖК. Обработка антисывороткой в день проявления охоты нейтрализует циркулирующую в крови животных ГСЖК и тем самым прекращает дальнейшую стимуляцию роста фолликулов в яичниках. Это создает более благоприятный фон для овуляции, оплодотворяемости яйцеклеток и последующего развития зародышей. В практике используются стандартные гонадотропные препараты высокой степени очистки: сергон (Чехия), фоллигон (Голландия), прегмагон (Германия). Эти препараты инъецируют донорам на 11-12-ый день полового цикла, однократно, в дозе 50 И.Е. на 100 кг живой массы животного. Применение этих гонадотропинов обеспечивает вызывание множественной овуляции у 75-78% животных и получение в среднем 3,5-4,0 жизнеспособных эмбриона на донора. Опыт работы по вызыванию суперовуляции у коров-доноров сывороточными и гипофизарными препаратами показал, что при использовании гипофизарных гормонов (ФСГ-п, ФСГ-супер, фолликотропин, фоллитропин) получаются более стабильные и высокие результаты суперовуляции и эмбриопродукции (табл.1). Так, процент коров-доноров, реагирующих на обработку сывороточными гонадотропинами, составил 75,0-78,3%, гипофизарными препаратами - 85,3-88,8%, число овуляций на донора - соответственно 8,3-9,7 и 10,2-12,0, количество пригодных эмбрионов - 3,5-4,0 и 5,5-6,1. Используют бластоцисты и морулы, между 7 и 8 сутками. Оплодотворённые яйцеклетки можно извлечь 3 способами. 1. После убоя доноров. Самый простой, надёжный, 100% способ. 2. Хирургический – через разрез верхнего свода влагалища,.лапаротомия в области голодной ямки, лапаротомия по белой линии живота. 3. Нехирургический. Достоинства: простота манипуляций в производственных условиях, многократное использование доноров, без голодной диеты. Извлекают на 7-8 день после осеменения. Можно фиксировать, можно не фиксировать животное. Прямую кишку освобождают от кала, дезинфицируют, низкая сакральная анестезия, миорелаксант внутримышечно. Для извлечения эмбрионов используют 4 вида катетеров. Катетеры: Прокофьева, Сергеева, Микояна. При не хирургическом способе извлечения зародыше животных фиксируют в станке. Прямую кишку освобождают от содержимого и проводят тщательное ректальное исследование. Определяют, сколько желтых тел находится в каждом яичнике. Хвост с помощью тесемки фиксируют. Проводят туалет и дезинфекцию наружных половых органов и промежностей. Для прекращения перистальтики прямой кишки эпидурально вводят 10 мл 2%-ного раствора новокаина. Для вымывания зародышей из матки применяют различные инструменты. Используют гибкий одноходовой катетер Фолея с упругим мандреном и надувным баллончиком. Инструмент должен быть стерильным. Сначала катетер вводят во влагалище по верхнему его своду и проводят под ректальным контролем через канал шейки матки в рог матки. Для более полного извлечения зародышей нужно, не травмируя слизистую оболочку, как можно глубже ввести инструмент в рог матки после того как катетер достигнет в роге матки необходимого положения, мандрен удаляют и в баллончик катетера накачивают 10–15 мл воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера. Закрепив катетер, промывают полость рога матки с помощью шприца Люэра вместимостью 50–60 мл. В рог матки в зависимости от его величины вводят порциями от 40–60 мл промывной жидкости, затрачивая на промывание каждого рога не более 500 мл. Наполнение матки промывной средой и степень ее оттока контролируют ректально. Для более полного извлечения зародышей верхушку рога матки приподнимают и выпрямляют. Некоторые авторы рекомендуют яйцепровод вблизи верхушки рога матки осторожно зажать большим и указательным пальцами. При этом предотвращается поступление в брюшную полость жидкости, содержащей зародыши. Но практика показывает, что поступление в брюшную полость жидкости из рога матки отмечается только при наличии большого давления в матке, поэтому яйцепровод можно не зажимать. Перед извлечением катетера следует удалить воздух из баллончика. Таким же образом промывают и второй рог. В качестве среды для промывания используют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко. Раствор готовят на тридистиллированной воде. Первые 4 вещества растворяют 800 мл, а 5-е и 6-е каждый отдельно в 100 мл. в итоге получают три раствора которые автоклавируют, а затем смешивают. В таком виде их можно хранить при 4 градусах до 2 недели. Непосредственно перед употреблением в ФБС вводят следующие компоненты (в расчете на один литр): альбумин бычьей сыворотки – 4г; глюкоза – 1г; натрий-пироват – 0,036г; пенициллин – 100 тыс. ЕД. Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20–35 мин. при температуре 20–37 градусов, чтобы зародыши опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Нижний слой жидкости порционно по 20–30 мл для обнаружения зародышей исследуют в больших часовых стеклах или чашках Петри под бинокулярной лупой при 10–50-кратном увеличении. Найденных зародышей при помощи пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37 градусах до момента пересадки или оставляют для хранения. Оценка и культивирование зародышей Оценка качества эмбрионов Морула (6 день); Ранняя бластоциста (7 день), бластоциста (8-9 дней). В лаборатории или отдельном помещении ветеринарного пункта температура в пределах 20-25 ̊С. За 3 часа до работы помещение обрабатывают при помощи УФ ламп (1Вт на 1 м3). После промывания каждого из рогов матки цилиндры тс эмбрионами переносят в стерильный бокс. Осаждение эмбрионов в течение 20 минут. Работу проводят в термостате при температуре 37 ̊С. Верхнюю часть жидкости из сосуда удаляют шприцом, оставляют 60-100 мл. Оставшуюся жидкость с эмбрионами переносят в 2-3 чашки Петри. Каждый отдельный эмбрион с помощью специального микрошприца переносят в часовое стекло (миниатюрная чашка Петри), для кратковременного хранения используют 1 мл питательной жидкости. Чтобы оценить целостность морфологических структур, используют микроскоп с увеличением 160-180 или увеличительное стекло. Обращают внимание на форму зиготы (морула, ранняя или поздняя бластоциста), состояние зоны пеллюцида, число блатомеров, равномерность их дробления, выраженность эмбриобласта и трофобласта. Полноценные: шарообразная форма, неповрежденная прозрачная оболочка (зона пеллюцида), одинаковыебластомеры с четкой плазматической оболочкой, светлая гомогенная цитоплазма. Экспресс-метод определения жизнеспособности. Классификация эмбрионов Отличные – идеально соответствуют стадиям развития. Округлая форма. Нет видимых нарушений морфологии. зародышевые клетки однородные по цвету. Хорошие – незначительные отклонения. Неравномерное увеличение 2-3 бластомеров, до 5 клеток мертвые, форма яйцевидная. Посредственные (сомнительные) – используют, когда возникает дефицит отличных и хороших. Степень их приживаемости не больше 10-12%. Эмбрионы подвержены дегенеративным изменениям, отстают в своем развитии. В зародышевых клетках имеет место просветление зародышевой массы. 20 и более мертвых клеток. Разрастание отдельных бластомеров в 3 и более раз. Плохие – приживаемость не более 1-3 %. Отстают в развитии, дробление бластомеров заторможено, 50% клеток дегенерировано. Метод флуоресцентных красителей Основан на различной степени проницаемости красок через прозрачную оболочку живых и мертвых эмбрионов. Эмбрион помещают на предметное стекло, добавляют какой-то из красителей (синька Эванса, акридин-оранж, краска FDA, ДАР). Требуется не более 1,5 минут. Метод культивирования (биологический метод оценки). Основывается на тех изменениях биологических процессов, которые возникают в структурах эмбрионов. Для культивирования применяют различные питательные среды. Самый простой: культивирование в пробирках или соломинках. Эмбрион переносят в пробирку с 1 мл питательной среды + 2-3 мл вазелинового масла (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка). 0,25 мл переносят в соломинку или пробирку, ставят в термостат при температуре 37 ºС в шприце. Эмбрионы в культуре продолжают развитие в 90% случаев. Стельность более 50% на разных стадиях. При работе с эмбрионами шприцы инсулиновые. Найденных зародышей при помощи пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20% фетальной сыворотки теленка). После оценки зародышей их культивируют при 37 градусах до момента пересадки или оставляют для хранения. Способы пересадки эмбрионов В настоящее время пересадка эмбрионов реципиентам производится хирургическим и нехирургическим способами. При пересадке нужно точно знать местонахождение эмбриона в половых путях коровы. Это связано с переходом предимплантационного периода, в котором находится эмбрион до пересадки, в новый период эмбрионального развития – имплантационный. При естественном течении эмбрионального периода зародыш на стадии морулы или бластоцисты находится в верхнем отделе рога матки, поэтому и наиболее благоприятным местом для его аппликации является верхняя часть рога матки реципиента. Установлено, что пересадка эмбрионов глубоко в рог матки реципиента лучше всего обеспечивается хирургическим способом. При нехирургической же пересадке, которая происходит в период диэструса, место аппликации эмбриона в роге матки контролируется менее точно. Эффективность хирургического способа пересадки эмбриона составляет 60–70%, а число телят – 3–4 на донора. Хирургический способ использовали в основном до середины 70-х годов. Однако он требует больших затрат средств. Кроме того, широкое применение хирургического метода сдерживается сложностью проведения операций в производственных условиях, получением травм вследствие резекции мышц, и невозможностью многократного использования реципиента. Поэтому последние 10–15 лет пересадку эмбрионов в основном осуществляют нехирургическим способом. При нехирургической пересадке основным достоинством, кроме простоты и экономичности, является возможность многократного использования реципиента. Разработано несколько способов нехирургической пересадки эмбрионов. Однако все они основаны на одном принципе – введении эмбриона в рог матки через шейку, вследствие чего этот способ назван также цервикальным. После пересадки эмбрионов проводят наблюдение за реципиентами, обращая особое внимание на возможное проявление у них повторной половой охоты. Для установления стельности у коров-реципиентов используют несколько методов: визуальный; по уровню прогестерона в крови или молоке; клинический, главным образом путем ректальной пальпации. Профилактика эмбриональной смертности – инъекция прогестерона. Бесплодие и яловость Оптимальное состояние воспроизводства стада: 50% коров стельные, 17% в послеродовом периоде, 33% осемененные, но не проверенные на стельность. Высокая молочная продуктивность не приводит к снижению воспроизводительной способности. выход телят должен составлять порядка 86%.
|
||||
Последнее изменение этой страницы: 2016-04-25; просмотров: 728; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 13.59.68.161 (0.006 с.) |