Современная промышленная технологическая линия производства живой сухой вакцины против рожи свиней, из штамма вр-2

Промышленная технология производства представлена на примере живой сухой вакцины из штамма ВР-2 против рожи свиней.

При культивировании штамма ВР-2 в биореакторе его биологические свойства не изменяются и соответствуют требованиям инструкции или регламента.

Термическая стерилизация питательной среды (125 °С) удлиняет время культивирования и уменьшает концентрацию микробных тел возбудителя рожи свиней.

В процессе хранения каждой серии жидких вакцин из штамма ВР-2 значительная часть микробных клеток отмирает. Лиофилизированные вакцины более стандартны, так как имеют в прививной дозе определенное количество микробных тел. Известно, что препараты с мелкими частицами сорбента более иммуногенны, чем препараты с крупными частицами (хлопьями).

Воробьев (1986) и Васильев (1975) пишут, что антигены, сорбированные на гидрате окиси алюминия при замораживании и оттаивания, практически полностью утрачивают свою первоначальную высокую иммуногенность. Одновременно они резко изменяют свою дисперсность в результате агрегации частиц сорбента, приобретением хлопьевидными частицами сорбированного антигена свойств частиц твердого тела, быстро оседающих на дно.

Уплотнение частиц приводит к тому, что антиген, связанный с сорбентом, не усваивается организмом и не обеспечивает создание длительного и напряженного иммунитета.

Современная промышленная технология производства вакцины из штамма ВР-2 учитывает недостатки ранее существующей технологии по составу питательной среды и методу их стерилизации, среде высушивания режимов культивирования и концентрирования.

Штамм. Эталонный сухой стандартный заражающий Erysipelothrix rhusiopathiae вакцинный штамм ВР-2 возбудителя рожи свиней получают в высушенном виде в ампулах из ВГНКИ.

Питательная среда. Культивирование штамма Erysipelothrix rhusiopathiae ВР-2 при производстве вакцины против рожи свиней осуществляется на питательной среде на основе перевара Хоттингера и печеночного экстракта с содержанием следующих компонентов: пептон; сухой дрожжевой экстракт; NaCl; KH 2PO4; Твин-80; глюкоза; нормальная сыворотка крупного рогатого скота; L-аргинин.

Среда высушивания. При изготовлении живой сухой вакцины против рожи свиней из Erysipelothrix rhusiopathiae ВР-2 при сублимационной сушке используется среда высушивания на основе фосфатно-буферного раствора с содержанием следующих компонентов: желатин, пептон, сахароза.

Для промышленного культивирования используют вакцинный штамм ВР-2.Культивирование матровой расплодки осуществляется на мясо-пептонном бульоне в 100 мл флаконах (по 2 флакона на 1 ампулу), затем пересевают в 100 мл флаконы с полужидким МПБ. Культуру посевной серии пересевают в 3-х л бутыли.

Посевную культуру засевают в простерилизованный биореактор в который предварительно подают питательную среду на основе перевара Хоттингера: перевар Хоттингера - 25 - 30%; печеночный экстракт - 5%; пептон - 5%; сухой дрожжевой экстракт - 0,5%; NaCl - 0,2%; КН ₂Р0₄ - 0,3%; Na 2HPO4 - 1,8%; Твин-80 -0,05%; глюкоза - 0,2%; нормальная сыворотка крупного рогатого скота - 2%; L-аргинин - 0,05%; дистиллированная вода до 100%.

Концентрация пептона в предлагаемой среде составляет 5%, что позволяет обеспечить бактерии рожи источником азота, который необходим для синтеза белковых соединений и формирования протоплазмы.

В состав среды в качестве источника углерода вводится глюкоза, которая при расщеплении в форме АТФ используется микроорганизмами как источник энергии.

Кроме того, для улучшения ростовых свойств питательной среды добавляется аминокислота L-аргинин и нормальная сыворотка крупного рогатого скота (КРС).

Для сохранения ростовых свойств питательной среды используется метод холодной стерилизующей фильтрации с применением патронного микрофильтра типа КФО-1 («Карлсон Форд», Англия) с фильтрующим материалом, состоящим из композита целлюлозы с минеральными волокнами.

В биореактор загружают питательную среду из расчета 2/3 рабочего объема биореактора, а засевная доза составляет 3 - 5% к объему питательной среды.

Глубинное культивирование проводят при температуре (36 ± 0,5) °С в течение 20 - 22 ч при постоянном перемешивании (100 - 150 об/мин), что обеспечивает поддержание парциального давления растворенного кислорода (рО₂) на уровне 40 - 50 % от насыщения. После окончания культивирования в отдельно взятой пробе из биореактора определяют оптическую концентрацию культуры, которая должна находиться в пределах (7 ± 2) млрд/мл.

Затем в биореактор с культуральной жидкостью добавляют среду высушивания из расчета 1:4 на сонове фосфатно-буферного раствора.

Для повышения качества и сроков хранения сублимационно высушенной противорожистой вакцины концентрация пептона, как одного из наиболее термозащищающих веществ, доводится до 15%. Концентрация желатина, обладающая меньшими защитными свойствами, с целью снижения количества балластных веществ уменьшена до 4%. Для повышения стабильности вакцины при высушивании и хранении концентрация сахарозы увеличена до 20%.

Применение предложенной среды высушивания позволяет повысить выживаемость культуры бактерий рожи при сушке до 70 - 75% и увеличить сроки хранения с 6 месяцев до 1 года.

Среду высушивания перемешивают с культуральной жидкостью при 200 - 300 об/мин в течение 15 мин. После этого бактериальную суспензию перекачивают в емкость для расфасовки, выдерживают при температуре (6 ± 2) °С в течение 1 - 3 сут, до получения предварительных результатов исследований на чистоту культуры. После этого ее передают на фасовку в 20 мл флаконы, а затем - на лиофилизацию.

Контроль вакцины. Вакцина против рожи свиней из штамма ВР-2 живая сухая должна соответствовать требованиям технических условий и изготовляться согласно «Инструкции по изготовлению и контролю вакцины против рожи свиней из штамма ВР-2 живой сухой».

По физико-химическим и биологическим свойствам вакцина должна соответствовать требованиям и нормам.

Упаковка и маркировка. Бактериальную культуру вакцинного штамма ВР-2 после контроля типичности и чистоты роста, соединенную в соотношении 1:1 - 1:4 со средой высушивания, расфасовывают по 10 см³ ± 3% в чистые стерильные флаконы вместимостью 20 мл, установленные в кассеты, предварительно укупоривают пробками УЛ-1, подвергают замораживанию и лиофилизации.

 

Таблица 1.

Показатели качества вакцины

Наименование показателя	Характеристика и норма
Внешний вид	Сухая мелкопористая масса
Цвет	Беловато-желтый
Наличие посторонней примеси, плесени, следов оттаивания, трещин флаконов	Не допускается
Растворимость	Вакцина должна полностью растворяться в физиологическом растворе в течение 1 -3 мин
Массовая доля влаги, %	1,6-4,0
Контаминация посторонней микрофлорой и типичность роста	Вакцина не должна быть контаминирована посторонней микрофлорой. При посевах на МПА через 24-48 ч вакцинный штамм должен расти с образованием бесцветных, гладких, прозрачных колоний на МПБ через 24 ч - равномерное помутнение
Количество доз во флаконе	25,50,100,150,200 доз в одном флаконе из расчета 200 млн. в 1 мл микробных клеток в одной иммунизирующей дозе
Погрешность фасования, %	±3
Безвредность	Вакцина должна быть безвредной
Иммуногенная активность	Вакцина должна быть иммуногенной
Массовая доля кислорода, % не более	1,0

Окончательное укупоривание флаконов осуществляется с помощью прижимной плиты в атмосфере азота. После этого флаконы с вакциной закатывают колпачками.

На флаконы с вакциной должны быть наклеены этикетки с указанием наименования предприятия-изготовителя, наименования препарата, номера серии и контроля, дозы препарата, даты изготовления, срока годности.

Широкое распространение возбудителя в природе является одной из существенных сторон его биологии, что обусловливает возникновение заболевания почти повсеместно в виде спорадических случаев и эпизоотических вспышек, представляя в отдельных хозяйствах серьезную проблему.

Распространённость эризипелотрикса в природе не зависит от заболеваемости свиней.

При создании новых высокоэффективных противорожистых препаратов следует уделять внимание разработке сухих вакцин. Они стандарты, устойчивы при хранении.

Схема специфической профилактики молодняка требует совершенствования, так как осуществление принятой в промышленном свиноводстве схемы вакцинации даже в самом жестком варианте (при угрожающей эпизоотической обстановке) не вызывает накопления достаточных титров антител у молодняка до 3-х мес. возраста.

Традиционные методы и схемы индивидуальной иммунизации свиней в крупных промышленных комплексах достаточно сложны, трудоемки, дороги и в эпизоотическом отношении недостаточно эффективны. В настоящее время назрела необходимость разработки и внедрения методов групповой вакцинации животных.

Проведенные данные свидетельствуют о широком круге проблем по данному вопросу. Ликвидация рожи свиней во многом зависит от разработки новых методов профилактики, диагностики и лечения, от внедрения новых систем ветеринарно-санитарных, противоэпизоотических мероприятий и использования современного автоматизированного оборудования в линиях производства вакцины.