Бактериологическая диагностика дисбактериоза толстого кишечника

Второй этап. Подсчет колоний и макроскопическое описание их. 

1. Лактозопозитивные колонии кишечной палочки на среде Эндо образует малиново-красные колонии с металлическим блеском или без него. Бактерии, не ферментирющие (лактозонегативные) лактозу формируют сероватые (бесцветные) колонии. Подсчитайте общее число колоний кишечной палочки.

Подсчитайте число и определить % лактозонегативных и слабо ферментирующих колоний (розовые) бактерий. Подсчет ведется с помощью камеры Вольфгюгеля или электросчетчика. Пересчитывают на 1 г фекалий.

2. Отсейте все типы колоний энтеробактерий на среду Клиглера или Олькеницкого.

Среда Олькинецкого (три-сахарный агар с мочевиной) – двухслойная питательная среда для идентификации Enterobactericidae по их способности ферментировать глюкозу, лактозу, образовывать сероводород и расщеплять мочевину.

Горячую среду скашивают, чтобы при застывании образовался заполненный «столбик» (2 см) и «косяк» контактирующий с воздухом. Цвет готовой среды красный или оранжевый.

Посев культуры проводится прокалыванием среды микробиологической петлей до самого дна пробирки и распределением по поверхности. Образцы культивируют при 37°С в течение 24 часов, после чего оценивают изменение внешнего вида среды.

E. coli ферментирует лактозу (желтый косяк) и глюкозу (желтый столбик) с газообразованием в столбике желтой среды.

3. Анализ колоний на 5% кровяном агаре (КА).

Изучите соотношение:

­ колоний кишечной палочки, обладающей и не обладающей гемолизирующими свойствами;

­ колоний кишечной палочки и кокковых форм бактерий;

­ соотношение гемолизирующих и негемолизирующих кокков.

Гемолиз проявляется в виде зоны просветления вокруг колонии. Морфологию микроорганизмов определяют при микроскопироваании.

Для получения чистой культуры подозрительные колонии пересеять на скошенный агар.

4. Анализ колонии грибов на среде Сабуро.

Из подозрительных колоний приготовьте микропрепарат (нативный или окрашенный метиленовым синим) для выявления почкующихся клеток и псевдомицелия.

5. Анализ роста бифидобактерий на среде Блаурокка.

Из посева, в которой виден рост в виде помутнения всей среды, в виде отдельных колоний или тяжей, приготовьте окрашенные по Граму мазки.

Обнаружение характерных грамположительных палочек с разветвлениями на концах, расположенных в виде римской цифры V, с несколько утолщенными концами или в виде скоплений, напоминающих китайские иероглифы, подтверждает их принадлежность к бифидобактериям. При отсутствии роста через 48 часов посевы оставляют в термостате до 72 часов.

6. Анализ роста лактобактерий на среде МРС.

Подсчитайте число колоний и приготовьте мазок, окрашенный по Граму. Под иммерсионным объективом микроскопа наблюдаются грамположительные палочки, расположенные одиночно, парно и короткими цепочками. 

7. Анализ колоний, выросших на желточно-солевым агаре.

Подсчитайте число стафилококков, в т.ч. лецитиназоположительных колоний на среде ЖСА. Лецитиназоположительные стафилококки дают радужный ободок вокруг колонии.

Для получения чистой культуры проведите посев на скошенный агар.

 

Третий этап. Биохимическая идентификация чистых культур микроорганизмов.

Приготовьте суспензию чистой культуры в физ.растворе – 10⁷ КОЕ/мл по стандарту мутности.

Для идентификации использовать посев на «пестрый ряд» или дифференциально-диагностические пластины (тесты).

Провести расчет содержания микроорганизмов в 1 г фекалий (КОЕ/г).

Содержание бактерий в 1 г определяют путем умножения количества колоний, выросших на питательной среде на соответствующее разведение фекалий.

 

Задание 2