Микрофлора воды, почвы, воздуха. Санитарно-показательные микроорганизмы. Выживаемость патогенных микробов во внешней среде. Некультивируемые формы бактерий. Значение для медицинской практики.

Характеризуя микрофлору почвы, воды и воздуха, целесообразно придерживаться определенного плана:

1) постоянная микрофлора данной среды;

2) значение данной среды как фактора передачи возбудителей за­болеваний;

3) определение микробной флоры.

При исследовании объектов внешней среды методами санитарной микробиологии определяются количественные показатели - общее ко­личество микроорганизмов в определенном объеме. Важной задачей исследования является обнаружение патогенных микробов и их ток­синов. Однако непосредственное их выявление представляет значи­тельные трудности. Причина в том, что патогенные микроорганизмы встречаются во внешней среде непостоянно, обычно в небольших ко­личествах, их трудно культивировать на питательных средах, некоторые из них вообще не культивируются на искусственных средах. Поэтому возможное загрязнение внешней среды патогенными микробами опре­деляют по косвенному показателю - обнаружению санитарно-показательного микроорганизма.

В качестве санитарно-показательных выбирают те микробы, ко­торые постоянно и в больших количествах содержатся в тех выделе­ниях человека, которые для данной среды наиболее опасны. Сроки их выживания во внешней среде должны совпадать примерно со сроками выживания патогенных микробов. Санитарно-показательные мик­роорганизмы не должны интенсивно размножаться во внешней среде и должны легко обнаруживаться при лабораторном исследовании.

Микрофлора почвы

Почва является основной средой обитания многих микроорга­низмов, которые вместе с растениями и животными составляют раз­нообразные биогеоценозы. Состав микробиоценозов почвы зависит от многих внешних факторов, в том числе от агротехнических меропри­ятий, таких как вспашка, внесение удобрений, ядохимикатов.

Самый поверхностный тонкий слой почвы содержит мало микро­организмов, так как они погибают под влиянием солнечных лучей и высушивания. Наиболее обильна микрофлора почвы на глубине 10-20 см, а в более глубоких слоях количество микробов уменьшается.

Видовой состав почвенной микрофлоры весьма разнообразен: ана­эробные и аэробные бактерии, грибы, простейшие, вирусы.

Значение микрофлоры почвы велико для круговорота веществ в природе. Микробы осуществляют разложение и минерализацию органических животных и растительных остатков, попадающих в по­чву, процесс очищения ее от нечистот и отбросов.

Среди патогенных микробов имеются такие, для которых почва является постоянным местом обитания. Это возбудители ботулизма, ак-тиномицеты и грибы - возбудители микозов. Вторая группа - это спо-рообразующие бациллы и клостридии, которые попадают в почву с выделениями человека и животных и могут длительно здесь сохраняться в виде спор. Это бациллы сибирской язвы, клостридии столбняка и газовой анаэробной инфекции.

К третьей группе относятся неспорообразующие бактерии и ви­русы, которые попадают в почву с выделениями человека и живот­ных, сохраняются здесь в течение нескольких дней и месяцев. Это бактерии - возбудители брюшного тифа и дизентерии, палочки ту­беркулеза, лептоспиры, вирусы. Значение почвы как фактора пере­дачи при этих инфекциях относительно невелико.

Микробиологическое исследование почвы имеет значение при строительстве жилищ, детских учреждений, водохранилищ. Пробы по­чвы берут из глубины. Определяют микробное число - общее количество микроорганизмов в 1 г почвы и наличие санитарно-показательных мик­роорганизмов. Присутствие в почве Escherichia coli и Streptococcus faecalis указывает на свежее фекальное загрязнение, бактерий рода

Citrobacter и Enterobacter - на несвежее, a Clostridium perfringens - на давнее.

Микрофлора воды

Вода открытых водоемов, подобно почве, является естественной средой обитания многих видов бактерий, грибов, вирусов, простей­ших. В воде обитают также различные виды микробов, принимающих участие в круговороте веществ в природе и способствующих самоочи­щению воды благодаря разложению органических соединений. Харак­тер микрофлоры воды зависит от многих причин, и в особенности от загрязнения стоками ливневых, фекальных и промышленных нечистот. По мере удаления от населенных пунктов число микробов постепенно уменьшается. Наиболее чистыми являются воды глубоких артезианс­ких скважин и родников.

Вода имеет эпидемиологическое значение как фактор передачи ин­фекций. Наблюдались водные эпидемии холеры, брюшного тифа, леп-тоспирозов и других инфекционных болезней.

Санитарно-показательными микроорганизмами для воды являют­ся бактерии группы кишечной палочки (БГКП), принадлежащие к раз­ным родам семейства энтеробактерий. Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается по следующим показателям:

1) микробное число - общее количество бактерий в 1 мл воды;

2) коли-титр - наименьший объем воды в миллилитрах, в котором обнаруживаются БГКП;

3) коли-индекс - количество БГКП в 1 литре воды;

4) кроме того, в воде определяют наличие патогенных и условнопатогенных микроорганизмов: энтерококков, сальмонелл, холерного вибриона, энтеровирусов.

В соответствии с ГОСТом на питьевую водопроводную воду, мик­робное число ее должно быть не более 100, коли-титр должен быть не ниже 300, коли-индекс - не более 3.

Микрофлора воздуха

В воздух микробы попадают из почвы с поверхностей растений и животных, а также с промышленными отходами некоторых предпри­ятий. В отличие от воды и почвы, где микробы могут размножаться, в воздухе они только сохраняются в течение некоторого времени, а за­тем гибнут вследствие высыхания и влияния солнечных лучей. Ус­тойчивые к таким воздействиям микроорганизмы могут долго сохра­няться в воздухе. Это споры грибов, споры бактерий, сарцины и дру­гие кокки, образующие пигменты. Больше всего микробов в воздухе промышленных городов, меньше всего - в воздухе лесов и гор. В от­крытом воздухе количество микробов летом больше, чем зимой, в воз­духе закрытых помещений - наоборот.

Воздух может служить фактором передачи патогенных микробов: стафилококков, стрептококков, палочек дифтерии, коклюша, тубер­кулеза, а также вирусов кори, гриппа. Передача воздушно-капельным и воздушно-пылевым путем почти всегда происходит в закрытых по­мещениях и редко - на открытом воздухе.

Показатели санитарно-микробиологического состояния воздуха

закрытых помещений:

- микробное число - количество микробов, обнаруженных в 1 м3

воздуха;

- наличие санитарно-показательных бактерий: Streptococcus haeraolyticus и Staphylococcus aureus.

Чистота воздуха зависит от своевременного проветривания по­мещения и влажной уборки. Применяется обработка воздуха бактери­цидными УФ-лампами. Для уменьшения контаминации воздуха при­меняют марлевые и ватно-марлевые маски.

35. Бактериологическое исследование воды: показатели, методы их определения и оценка.

Санитарно-гюказательными микроорганизмами для воды являют­ся бактерии группы кишечной палочки (БГКП), принадлежащие к раз­ным родам семейства энтеробактерий. Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается по следующим показателям:

1) микробное число - общее количество бактерий в 1 мл воды;

2) коли-титр - наименьший объем воды в миллилитрах, в котором обнаруживаются БГКП;

3) коли-индекс - количество БГКП в 1 литре воды;

4) кроме того, в воде определяют наличие патогенных и условнопатогенных микроорганизмов: энтерококков, сальмонелл, холерного вибриона, энтеровирусов.

В соответствии с ГОСТом на питьевую водопроводную воду, мик­робное число ее должно быть не более 100, коли-титр должен быть не ниже 300, коли-индекс - не более 3.

Определение микробного числа воды

Водопроводную воду засевают в объеме 1 мл, воду откры­тых водоемов —в объемах 1,0; 0,1; 0,01 мл. Все пробы вносят в стерильные чашки Петри, после чего их заливают 10—12 мл расплавленным и остуженным до 45—50° С питательным агаром, который тщательно перемешивают с водой. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—48 ч. Воду из открытых водоемов засевают параллельно на две серии чашек, одну из которых инкубируют при 37°С в течение суток, а другую —2 сут при 20° С. Затем подсчитывают количество выросших на поверхности и в глубине среды колоний и вычисляют микробное число воды — количество микробов в 1 мл.

Определение коли-титра и коли-индекса воды

Коли-титр воды измеряется минимальным количеством воды (в мл), в котором обнаруживаются БГКП, кол и - индеке— количеством БГКП, содержащихся в 1 л исследуемой воды. Коли-титр воды определяют бродильным методом и методом мембранных фильтров.

Бродильный метод. Воду открытых водоемов в объемах 100; 10; 1 и 0,1 мл засевают в глюкозопептонную среду, причем для посевов больших количеств воды (100 и 10 мл) используют концентрированную среду, содержащую десятикрат­ные количества указанных веществ.

Состав глюкозопептонной среды: 1% пептонная вода, 0,5% глю­козы, 0,5% хлорида натрия, индикатор Андреде и поплавок.

Для исследования водопроводной воды делают посев 4 проб по 100 мл и Ю проб по 10 мл или 3 проб по 100 мл и 3 проб по 10 мл в концентрированную среду и 3 проб по 1 мл в обычную глюкозопептонную среду. Посевы инкубируют в течение суток при 37° С. О брожении судят по наличию пузырьков газа в поплавке. Из забродивших или помутневших проб производят посевы на среду Эндо. Из выросших колоний делают мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест, позволяющий дифференцировать бактерии родов Esherichia, Citrobacter и Enterobacter от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonadacae и других оксидазаположительных бактерий, оби­тающих в воде, С этой целью стеклянной палочкой снимают 2—3 изолированные колонии с поверхности среды и наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную диметил-п-фенилендиамином. При отрицательном оксидазном тесте цвет бумаги не изменяется, при положительном — она окрашивается в синий цвет в течение 1 мин.

Грамотрицательные палочки, не образующие оксидазу, вновь исследуют в бродильном тесте —вносят в полужидкий питательный агар с 0,5% глюкозы и инкубируют при 37°С в течение суток. При положительном результате определяют коли-титр и коли-индекс по таблицам ГОСТа 18963-73.

Метод мембранных фильтров. Мембранный фильтр № 3 помещают в воронку Зейтца, вмонтированную в колбу Бунзена, которая присоединяется к вакуум-насосу. Мембранные фильтры предварительно стерилизуют кипячением в дистил­лированной воде. Воду из водопроводной сети Москвы и Ленин­града и воду артезианских скважин фильтруют в объеме 500 мл, воду других городов — в объеме 333 мл. Чистую воду открытого водоема фильтруют в объеме 100; 10; 1 и 0,1 мл, более загряз­ненную перед фильтрацией разводят стерильной водой. Затем фильтры помешают на поверхность среды Эндо в чашку Петри и после инкубации при 37°С в течение суток подсчи­тывают количество выросших колоний, типичных для БГКП. Из 2—3 колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму и ставят оксидазный тест. Для этого фильтр с выросшими на нем колониями бактерий переносят пинцетом, не переворачивая, на кружок фильтровальной бумаги, смоченной диметил-п-фенилендиамином. При наличии оксидазы индикатор окрашивает колонию в синий цвет. Две —три колонии, не изме­нившие первоначальную окраску, засевают в полужидкую среду с 0,5% глюкозы. Посевы инкубируют в течение суток при 37°С. При наличии газообразования подсчитывают количество крас­ных колоний на фильтре и определяют коли-индекс, из зна­чения которого вычисляют коли-титр. Например, если коли-индекс равен 5. то коли-титр составит 200 (1000:5 =200).

Общее количество бактерий в 1 мл неразделенной волы, не более 100.

Количество БГКП 3.

При использовании жидких сред накопления коли – титр, не менее 333.

Для определения титра Staph. faecalis готовят десятикрат­ные разведения воды. Цельную воду и ее разведения в объеме 1 мл засевают в одну из жидких элективных сред (КФ, полимик-синовая и др.), инкубируют при 37°С в течение 2 сут, а затем через 24 и 48 ч производят высевы на чашки с плотными элективно-дифференциальными средами: агар КФ, агар ТТХ (среда с трифенилтетразолхлоридом), полимиксинотеллуритный агар. Идентифицируют фекальные стрептококки по виду коло-ний, морфологии клеток и окраске по Граму. На среде с ТТХ Staph. faecalis образует колонии темно-красного цвета, на агаре с теллуритом — черного цвета.

Состав cред. Среда КФ: 2% питательный агар с 1% дрожжевого экст­ракта, 2% мальтоны, 0.1% лактозы, 0,4% анида натрия, 0,06% кацбоната натрия, индикатор бромкрезоловый красный. Полимиксиновая среда: пита­тельный агар, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, полимнксин М 200 ЕД/мл, индикатор бромтимоловый синий. Полимиксинотеллуритный агар: питательный агар, дрожжевой экстракт, 1% глюкозы, кристаллический фиолетовый 1:800 000, полимиксин М 200 ЕД/мл, 0.01% теллурита калия, агар ТТХ: питательный агар, 1% дрожжевого экстракта, 1% глюкозы, кристал­лический фиолетовый 1: 800000, 0,01% ТТХ.

При определении индекса Staph. faecalis пользуются статис­тическими таблицами, применяемыми при установлении коли-индекса. Кроме того, с этой целью используют метод мемб­ранных фильтров.

Для обнаружения патогенных бактерий максимальные объемы воды пропускают через мембранные фильтры, которые затем помещают в жидкие элективные среды или на поверх­ность плотных дифференциально-диагностических сред.