Работа № 1. Микрофлора полости рта.

Кафедра микробиологии ТГМА

Занятие № 14

Микрофлора ротовой полости

Цель:

Изучить микрофлору полости рта в норме и при патологии.Освоить методы дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний полости рта. Изучить способы микробиологического исследования кариеса, пародонтита, стоматита.

 

Студенты должны знать:

 

1. Основные представители нормальной микрофлоры полости рта.

2. Значение анаэробных и микроаэрофильных бактерий полости рта.

3. Основные группы микроорганизмов зубного налета.

4. Роль слюны как фактора, определяющего природу и состояние флоры полости рта.

1. Изменение микрофлоры ротовой полости при стоматите, кариесе.
2. Микробный пейзаж при заболеваниях пародонта.
3. Этиологию, патогенез и осложнения заболеваний полости рта.

 

Студенты должны уметь:

 

1. Сделать правильно забор материала из полости рта для бактериологического исследования.

2. Сделать посев материала на питательные среды.

3. Окрашивать готовые препараты по методу Грама.

4. Исследовать в биологическом микроскопе мазки из микробной культуры.

5. Интерпретировать результаты исследований.

Студенты должны иметь представление:

v о роли микроорганизмов в патологических процессах полости рта;

v о физиологических и гуморальных защитных механизмах полости рта;

v о режиме работы с материалом, содержащим патогенные

микроорганизмы.

Методические указания

Работа № 1. Микрофлора полости рта.

Цель: изучить качественный и количественный состав микрофлоры полости рта.

Самостоятельная работа

Ход работы:

1. Произвести забор материала со слизистых оболочек и поверхности языка стерильным ватным тампоном.

2. Высев на питательные среды.

3. Инкубировать посевы в термостате в течение 24 часов.

4. Идентифицировать выделенные штаммы микроорганизмов на основании морфоло-гических, тинкториальных и культуральных признаков.

5. Сделать вывод.

 

Культуральные свойства

 

ЖСА

 

Результат:

 

Среда Эндо

Результат:

 

 

Кровяной агар

Результат:

 

 

Среда Сабуро

 

Результат:

 

 

Среда тиогликолевая

 

Результат:

Вывод:

Морфологические и тинкториальные свойства

 

Со среды ЖСА

Результат:

Со среды Эндо

 

 

Со среды Эндо

Результат:

 

С кровяного агара

Результат:

 

Со среды Сабуро

Результат:

 

С тиогликолевой среды

 

Результат:

Вывод:

Работа № 2. Дифференциально – диагностическая микрофлора при различных патологических состояниях полости рта

Цель: Используя теоретическую справку заполнить предложенную таблицу

 

Представители микрофлоры	стоматит	кариес	пародонтит
стафилококки
стрептококки
фузобактерии
бактероиды
вейлонеллы
грибы рода Candida
актиномицеты
спирохеты
лактобактерии
коринебактерии
лептотрихи
Пептококки, пептострептококки
превотеллы
порфиромонады

 

Вывод:

Работа № 3. Микрофлора кариозной полости.

Цель: изучить микрофлору кариозной полости.

У пациента с множественным кариесом взят материал на бактериологическое исследование. Сделан посев на различные питательные среды: КА, Сабуро, тиогликолевую. Из выросших колоний сделаны мазки, окрашены по Граму. Изучить готовые посевы и микропрепараты. Зарисовать. Сделать вывод об этиологических факторах кариеса.

КА Сабуро Тиогликолевая среда

Описать морфологические и тинкториальные свойства

Результат:

 

 

Результат:

 

Результат:

 

Вывод:

 

 

Работа № 4. Микрофлора десневого экссудата при пародонтите.

Цель: определить микрофлору при гнойном воспалении

Задача.

Мужчина в возрасте 45 лет обратился с просьбой удаления подвижного зуба. При осмотре полости рта: слизистая рыхлая, отечная, ярко малинового цвета, при нажатии из зубо-десневого кармана выраженное гноетечение, шейки фронтальной группы зубов оголены на 1/2, имеют 3 степень подвижности, также на жевательной группе зубов множественный кариес. Врачом стоматологом был поставлен предварительный диагноз «пародонтит»? Какие методы лабораторной диагностики следует назначить больному для подтверждения диагноза?

 

 

Самостоятельная работа студента. Изучить готовые посевы. Сделать заключение.

Описать культуральные свойства микроорганизмов.

 

 

 

КА ЖСА Среда тиогликолевая

 

Род Fusobacterium

 

По Граму

 

Род Actinomyces

 

По Граму

Вывод:

Теоретическая справка

Кариес — это патологический процесс, при котором происходит деминерализация и размягчение твердых тканей зуба с последующим образованием дефекта в виде полости.

В настоящее время общепризнанным механизмом возникновения кариеса является прогрессирующая деминерализация твердых тканей зубов под действием органических кислот, образование которых связано с деятельностью микроорганизмов.

Причины пародонтита

Все предполагаемые причины пародонтита можно разделить на два фактора: местные и общие.

Местные факторы:

· неправильный прикус, приводящий к неравномерной нагрузке зубов и десен и к ухудшению самоочищения полости рта;

· наличие зубного налета и зубного камня, являющихся приютом для огромного количества микробов;

· мелкое преддверие полости рта, приводящего к опущению края десны;

· короткие уздечки языка и губ.

Общие факторы – это различные общие заболевания организма, такие как сахарный диабет, ишемическая болезнь сердца, сердечно-сосудистые заболевания, мочекаменная болезнь, гипертония, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, вегето-сосудистая дистония, заболевание щитовидной железы, гипо- и авитаминоз и множество других соматических заболеваний.

Также предполагается, что пародонтит провоцируется недостаточным кровоснабжением тканей десен, приводящих к их атрофии. Все воспалительные процессы в пародонте начинаются с образования зубных бляшек, преимущественно субгингивальных, в результате колонизации поверхности зубов факультативными анаэробами, прежде всего A. viscosus и S.mutans.

ЗУБНЫЕ БЛЯШКИ - это скопления бактерий в матриксе органических веществ, главным образом протеинов и полисахаридов, приносимых туда слюной и продуцируемых самими микроорганизмами. Различают над- и поддесневые бляшки. Первые имеют патогенетическое значение при развитии кариеса зубов, вторые - при развитии патогенетических процессов в пародонте. Процесс бляшкообразования начинается с взаимодействия гликопротеинов слюны с поверхностью зуба, причем кислые группы гликопротеинов соединяются с ионами кальция зубной эмали, а основные взаимодействуют с фосфатами гидроксиапатитов. Таким образом, на поверхности зуба образуется пленка - пелликула. Первые микробные клетки оседают в углублениях на поверхности зуба. Размножаясь, они заполняют все углубления, а затем переходят на гладкую поверхность зуба. В это время наряду с кокками появляется большое количество палочек, нитевидных форм бактерий.

При формировании зубных бляшек особая роль принадлежит оральным стрептококкам. Так, в течение первых 8 часов количество клеток S. sangius в бляшках составляет 15-35% от общего количества микроорганизмов, а ко второму дню - 70%. S. salivarius в бляшках обнаруживается лишь в течение первых 15 мин, затем к нему присоединяются вейлонеллы, коринебактерии и актиномицеты. На 9-11 день появляются фузиформные бактерии, количество которых быстро возрастает. Таким образом, при образовании бляшек вначале превалирует аэробная и факультативно-анаэробная микрофлора, которая резко понижает окислительно-восстановительный потенциал в данной области, создавая тем самым условия для развития строгих анаэробов.

Микрофлора бляшек на зубах верхней и нижней челюстей различается по составу: в бляшках зубов верхней челюсти обитают чаще стрептококки и лактобактерии, в бляшках нижней челюсти - вейлонеллы и нитевидные бактерии. Актиномицеты выделяются из бляшек обеих челюстей в одинаковом количестве. Такое распределение микрофлоры объясняется различными значениями рН среды.

Бляшкообразование происходит на поверхности фиссур и в межзубных промежутках. Первичная колонизация идет очень быстро и уже в первый день достигает максимума. В дальнейшем количество бактериальных клеток в течение длительного времени остается постоянным.

На развитие зубных бляшек во многом влияют количество и состав потребляемой пищи, в частности углеводов. В результате ферментативной деятельности оральных стрептококков и лактобактерий происходит расщепление сахарозы с образованием молочной кислоты, что резко снижает рН среды. Дальнейший распад образовавшейся молочной кислоты вейлонеллами, нейссериями и другими микроорганизмами приводит к накоплению уксусной, пропионовой, муравьиной и др. органических кислот. При избыточном потреблении сахарозы и других углеводов происходит образование внутри- и внеклеточных полисахаридов. Первые близки к гликогену и могут использоваться бактериальной клеткой как запасные питательные вещества. При их разложении происходит образование молочной и других органических кислот, которые снижают значение рН среды и участвуют в бляшкообразовании. Однако при рН ниже 5,5 синтез внутриклеточных полисахаридов подавляется. Многие микроорганизмы полости рта, особенно S. mutans, способны образовывать внеклеточные полисахариды – растворимый и нерастворимый глюкан (декстран) и леван (фруктан). Растворимый глюкан и леван легко расщепляются как S. mutans, так и другими микроорганизмами. Нерастворимый глюкан активно участвует в процессе адгезии оральных микроорганизмов.

Наряду с кислыми продуктами в результате метаболизма образуются щелочные продукты, например, мочевина, аммиак и др., присутствие которых приводит к повышению значения рН в бляшках. При первичной колонизации зуба факультативные анаэробы снижают окислительно-восстановительный потенциал, создавая тем самым условия для размножения строгих анаэробов, имеющих патогенетическое значение в развитии заболеваний пародонта. Благоприятные условия для размножения анаэробных микроорганизмов создаются в глубине зубных бляшек. Здесь находятся преимущественно спирохеты и бактероиды. В поверхностных слоях бляшек микрофлора представлена главным образом S. mutans и некоторыми актиномицетами. Из субгингивальных бляшек выделено до 400 видов различных микроорганизмов, относящихся к родам Fusobacterium, Bacteroides, Actinomycetes, Peptococcus, Treponema.

Ситуационные задачи

1. Врачем-стоматологом у больного выявлен язвенный стоматит. Как можно провести микробиологическое исследование для определения микрофлоры, являющейся источником инфекции?

 

2. В поликлинику обратился пациент с жалобами на температуру, болезненность и кровоточивость десен, гиперсаливацию, гнилостный запах изо рта. При исследовании тканевой жидкости из места поражения в темнопольном микроскопе обнаружено много подвижных палочек, вибрионов и спирохет. Имеется ли у пациента стоматит? Если да, то определите вид.

 

3. В результате лечения антибиотиками стоматита у больного развился кандидоз. Какова этиология болезни и какие методы диагностики следует применять?

 

4. У ребенка начали прорезаться зубы, и на фоне этого появились симптомы стоматита. Третий день температура не падает ниже 38 градусов. На языке и слизистой появился белесоватый налет. У ребенка пропал аппетит и сон, он постоянно капризничает. Определить вид стоматита, возбудителя? Каковы меры профилактики?

 

5. К врачу-стоматологу обратился пациент с жалобами на болезненность и кровоточивость десны. При осмотре обнаружена гиперемия и небольшая припухлость. Из анамнеза - легкая интоксикация солями свинца. Определите вид стоматита, этиологию, род возбудителя.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Основная литература:

1. Микробиология: Учебник А.А.Воробьев, А.С. Быков, Е.П.Пашков, А.М.Рыбакова, М.: Медицина 2003г.

2. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Воробьев А.В., Кривошеин Е.С., Широкобоков В.П., М.: 2006г.

3. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. А.А.Воробьева, А.С.Быкова, М.: 2003-2008г.

 

Дополнительная литература:

1. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Карташова О.Л. Биология патогенных кокков. М.: Медицина; Екатеринбург: УрО РАН, 2002г.

2. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник-СПб; «Специальная литература», 2002г.

3. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. / Под ред. Л.Б.Борисова. М.: 2002г.

4. Маянский А.Н. Микробиология для врачей (очерки патогенетической микробиологии). Нижний Новгород: Изд-во Нижегородской государственной медицинской академии.1999г.

 

Теоретическая справка

 

Нормальная микрофлора сложилась эволюционным путем как результат взаимного действия множества факторов, связанных с взаимодействием внешней среды и состоянием макроорганизма, а также в зависимости от взаимоотношений разных видов микробов, входящих в биоценоз.

В настоящее время описано несколько сотен видов микроорганизмов, входящих в нормальную микрофлору полости рта. Среди микробов полости рта встречаются аутохтонные (облигатные) и аллохтонные (транзиторные) виды.

 

Самостоятельная работа

Вопросы и задания для самоконтроля

 

1. Какие бактерии относятся к облигатной микрофлоре полости рта?

 

2. Основные представители нормальной микрофлоры полости рта.

 

3. Какова роль грамположительных палочек полости рта?

 

4. Роль грамотрицательных анаэробных и микроаэрофильных бактерий?

 

5. Основные группы микроорганизмов зубного налета?

 

6. Роль слюны как фактора, определяющего природу и состояние флоры полости рта?

 

 

Ситуационные задачи

Список литературы

 

Основная литература

 

1. Микробиология: Учебник А.А.Воробьев, А.С.Быков, Е.П.Пашков,

А.М. Рыбакова. М.: Медицина, 2003.

 

2. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии / Воробьев А.А., Кривошеин Е.С., Широкобоков В.П., М.: 2006.

 

3. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. А.А.Воробьева, А.С.Быкова. М.: 2003-2008г.

 

Дополнительная литература

1. Медицинская микробиология. Часть вторая./ Под ред. А.М. Королюка и В.Б. Сбойчакова.- СПб, 2002.

 

2. Медицинская микробиология / Гл. ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев – М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 2001.

 

3. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник. – СПб: «Специальная Литература», 2002 г.

 

4. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология / Под ред. Л.Б. Борисова. М., 2002.

 

5. Биология полости рта / Боровский Е.В., Леонтьев В.К. - «Медкнига», Н.Новгород, изд. НГМА, 2007 г.

 

 

Кафедра микробиологии ТГМА

Занятие № 14

Микрофлора ротовой полости

Цель:

Изучить микрофлору полости рта в норме и при патологии.Освоить методы дифференциальной диагностики воспалительных заболеваний полости рта. Изучить способы микробиологического исследования кариеса, пародонтита, стоматита.

 

Студенты должны знать:

 

1. Основные представители нормальной микрофлоры полости рта.

2. Значение анаэробных и микроаэрофильных бактерий полости рта.

3. Основные группы микроорганизмов зубного налета.

4. Роль слюны как фактора, определяющего природу и состояние флоры полости рта.

1. Изменение микрофлоры ротовой полости при стоматите, кариесе.
2. Микробный пейзаж при заболеваниях пародонта.
3. Этиологию, патогенез и осложнения заболеваний полости рта.

 

Студенты должны уметь:

 

1. Сделать правильно забор материала из полости рта для бактериологического исследования.

2. Сделать посев материала на питательные среды.

3. Окрашивать готовые препараты по методу Грама.

4. Исследовать в биологическом микроскопе мазки из микробной культуры.

5. Интерпретировать результаты исследований.

Студенты должны иметь представление:

v о роли микроорганизмов в патологических процессах полости рта;

v о физиологических и гуморальных защитных механизмах полости рта;

v о режиме работы с материалом, содержащим патогенные

микроорганизмы.

Методические указания

Работа № 1. Микрофлора полости рта.

Цель: изучить качественный и количественный состав микрофлоры полости рта.

Самостоятельная работа

Ход работы:

1. Произвести забор материала со слизистых оболочек и поверхности языка стерильным ватным тампоном.

2. Высев на питательные среды.

3. Инкубировать посевы в термостате в течение 24 часов.

4. Идентифицировать выделенные штаммы микроорганизмов на основании морфоло-гических, тинкториальных и культуральных признаков.

5. Сделать вывод.

 

Культуральные свойства

 

ЖСА

 

Результат:

 

Среда Эндо

Результат:

 

 

Кровяной агар

Результат:

 

 

Среда Сабуро

 

Результат:

 

 

Среда тиогликолевая

 

Результат:

Вывод: