Стрептококка, чувствительного к антибиотикам

Метод определения ингибирующих веществ в молоке основан на использовании тест-культуры термофильного стрептококка, чувствительного к антибиотикам. Стрептококк выделяет фермент редуктазу, который обесцвечивает фермент резазурин. Сравнение ведут с эталоном. Эталоном служит препарат СКИВ (это сухое молоко, не содержащее ингибиторов).

Чувствительность метода позволяет обнаружить содержание в молоке пенициллина более 0,01 МЕ/см³, стрептомицина – более 10 мкг/см³, тетрациклина – более 1 мкг/см³, формалина – около 0,005 %, перекиси водорода - более 0,01 %.

Ход анализа. Наливают в пробирку 10 см³ молока, закрывают ватными пробками.

Готовят эталон: в пенициллиновый пузырек с препаратом СКИВ наливают 10 см³ воды, подогретой до 50 + 10 ^оС. Закрывают пробкой, перемешивают до полного растворения сухого молока, переливают в пробирку, закрывают ватной пробкой.

Пробирки с исследуемым молоком и эталоном пастеризуют на водяной бане при температуре 87 + 2^оС в течение 10 мин. Затем пробирки охлаждают до 43-45 ^оС и стерильной пипеткой вносят в каждую пробирку по 0,5 см³ тест-культуры термофильного стрептококка. Содержимое пробирок закрывают стерильными резиновыми пробками, перемешивают и ставят в термостат на 2 часа при температуре 42-43 ^оС.

Вынув пробирки из термостата, в каждую вносят по 1 см³ 0,05 % (основного) раствора резазурина. Перемешивают путем двукратного переворачивания и выдерживают в термостате при 42-43 ^оС 15 мин. Затем сравнивают окраску исследуемого молока с окраской эталона.

Если исследуемое молоко имеет более темную окраску, чем эталон, то в молоке присутствуют ингибиторы. Например, эталон - розовый, исследуемое молоко - сиреневое.

Если исследуемое молоко и эталон будут иметь одинаковую окраску (бледно- или ярко-розовую), то в молоке ингибиторов нет.

Если окраска исследуемого молока более светлая, чем окраска эталона, то оно является благоприятной средой для развития молочнокислой микрофлоры.

Определение антибиотиков в молоке

Согласно техническому регламенту, в молоке не должно быть: левомицетина, антибиотиков тетрациклиновой группы, cтрептомицина и пенициллина (табл. 9).

Методы определения антибиотиков:

1. Чашечный метод с Bac. stearothermophilus ВКМВ-510 института биохимии РАН Анализ занимает 4 ч, проводится при температуре 55 + 1 ^оС.

2. При применении Дельво-тест SP и Копан-тест используются те же культуры, что и при чашечном методе, а также индикатор бромкрезолопурпур, но Копан-тест чувствительней и реагирует не только на присутствие антибиотиков, но и сульфаниламидов. Проводится при 64 + 0,5 ^оС в течение 3 часов.

 

Таблица 7 – Требования Технического регламента по содержанию антибиотиков в молоке

Антибиотик	Требования техрегламента и СанПиНа, мг/кг	Чувствительность
Копан-теста	Дельво-теста-SP	теста Beta Star
Левомицетин	не более 0,01 с 01.07.2015 0,0003	-	7,5
Антибиотики тетрациклиновой группы	не более 0,01	0,25	0,3
Стрептомицин	не более 0,20	Более 1,0	-
Пенициллин	не более 0,004	0,001	-	0,003

3. Бета-лактам «Snap» - это тест на антибиотики бета-лактамного типа (ампициллин, цефалопирин, оксациллин, цефаперазон). Проводится иммуноферментная реакция с индикаторным устройством Snap (3.3.5.5-триметилбензидин и диметилсульфоксидом). Определение ведут при 45 + 5 ^оС в течение 10 мин.

4. Бета-стар (Beta Star) – это рецепторный метод с коллоидным золотом. Определяет антибиотики пенициллинового типа. Проводится при 45 + 0,5 ^оС в течение 10 мин (инкубация - 5 мин).

Последние два теста относятся к экспресс-методам. Положительные результаты, полученные экспресс-методами, обязательно должны быть подтверждены микробиологическими анализами (например, Копан-тест).

Все эти методики определяют только факт присутствия антибиотиков, какой конкретно антибиотик содержится в молоке и в каком количестве, с их помощью выявить нельзя. Для этого надо использовать другие, более сложные методы анализа.