Классические группы крови АВ0

В зависимости от наличия в ЭР агглютиногенов А и В, а в сыворотке соответствующих им агглютининов α и β, всех людей далят на четыре группы: Агглютиниты –АТ альфа и бета, агглютиногены-АГ

• группа 0(I): в ЭР агглютиногенов нет, в сыворотке присутствуют агглютинины α и β;

• группа А(II): в ЭР - агглютиноген А, в сыворотке - агглютинин β;

• группа В(Ш): в ЭР присутствует агглютиноген В, в сыворотке выявляют агглютинин α;

• группа АВ(IV): в ЭР - агглютиногены А и В, агглютининов в сыворотке нет.

В последнее время в системе АВ0 обнаружены разновидности классических антигенов А и В, а также другие антигены.

Подтипы антигена А:• Подтип А₁ обладает большей адсорбцией агглютинина по сравнению с агглютиногеном А₂, (А₃, А₄, A_z – редки). Подтипы антигена В -1,2,3-клинич знач не имеют. Кровяные химеры-встречаются у близнецов-одновременное присутствие ЭР принадлежащие 2ум фенатипам.

Способы определения группы крови

Групповую принадлежность крови по системе АВ0 определяют с помощью реакции агглютинации:• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток; • с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных ЭР (перекрёстный способ); • с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При плановом исс врач опр группу крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, после чего посылает кровь в серолог лабораторию для проверки группы перекрёстным методом.Если результаты исс-ий расходятся, оба исследования нужно повторить.

Определение групп крови с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток:

Обнаружение в исследуемой крови групповых АГ А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этого используют реакцию агглютинации.

Необходимо: 1. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп 0(I), A(II), В(III) и АВ(IV) двух различных серий. Сыворотки для опр групп крови изготавливают в спецсерологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 С (в холодильнике). Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают так, чтобы они имели определённый цвет: 0(I) - бесцветная, А(II) - синяя, В(III) - красная, АВ(IV) - ярко-жёлтая.

Методика проведения реакции

1. На тарелку наносят ФИО, после чего наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II и III групп в объёме 0,1 мл (капля около 1 см в диаметре). Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать чёткой агглютинации. Всего получается шесть капель, образующих два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0(I), А(П), В(Ш).

2. Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку (0,01 мл, маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в шесть точек, каждую - рядом с каплей стандартной сыворотки (крови в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой её смешивают), затем перемешивают.

3. После смешивания тарелку периодически покачивают.

Агглютинация начинается в течение первых 10-30 с, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 мин ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы A₂(II).

4. В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной. При положительной реакции обычно в течение первых 10- 30 с в смеси появляются видимые мелкие красные зёрнышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. Положительная реакция может быть пескообразной или лепестковой.

При отрицательной реакции капля остаётся равномерно окрашенной в красный цвет, в ней не обнаруживают никаких зёрнышек (агглютинатов).

При этом следует отметить, что если сыворотки всех трёх групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена (А и В) и принадлежит к группе AB(IV).

Идентификацию подгрупп антигена А проводят в серологической лаборатории с помощью специальных экстрактов из семян Dolichos biflorus и Ulex Europeus. Первый из них агглютинирует эритроциты с антигеном А₁, но не реагирует с антигеном А₂, а второй - наоборот.

Определение групп крови перекрёстным способом

Часто исп в серологических лабораториях. Суть метода состоит в определении наличия или отсутствия в исследуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, а также групповых антител α и β с помощью стандартных эритроцитов. Реакцию со стандартными сыворотками проводят описанным выше способом.

Реакцию со стандартными эритроцитами проводят следующим образом.

Оснащение для реакции со стандартными эритроцитами отличается тем, что для её проведения необходимы стандартные эритроциты трёх групп крови: 0(I), А(II), B(III). Стандартные эритроциты приготавливают из крови доноров с заранее известной группой крови, хранят при 4-8 С. Срок годности 2-3 дня.

Методика проведения реакции

1. Кровь для исследования берут из вены в сухую пробирку, центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 мин для получения сыворотки.

2. На маркированную тарелку пипеткой наносят три больших капли (0,1 мл) сыворотки исследуемой крови из пробирки, а рядом с ними - по одной маленькой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов групп.

3. Капли смешивают стеклянными палочками, планшет покачивают, наблюдают в течение 5 мин, в капли с агглютинацией доб изот раствор хлорида натрия, далее оценивают.

Оценка результатов определения группы крови перекрёстным способом

Трактовка результатов

Особенность трактовки результатов реакции со стандартными эритроцитами - эритроциты группы 0(I) считают контрольными (в них нет антигенов, что делает принципиально невозможной специфическую реакцию агглютинации с любой сывороткой).

Результат достоверен, если при оценке результатов р со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и со стандартными эритроцитами ответы о группе исследуемой крови совпадают.

Определение групп крови моноклональными антителами Используют моноклональные АТ, для получения которых применяют гибридомную биотехнологию.

Гибридома - клеточный гибрид, образованный путём слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические моноклональные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родителей»: способность к нео граниченному росту, характерную для опухолевой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую иммунному лимфоциту.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А и анти-В. Рядом с ними наносят по одной маленькой капле (0,01 мл) исследуемой крови. После перемешивания составных частей за реакцией агглютинации наблюдают в течение 2-3 мин.

Возможные ошибки • низкое качество реагентов(Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки и стандартные эритроциты могут иметь низкие агглютинабельные свойства-см срок годности, усл хранения и вид);• технические ошибки(плохая освещенность, темпер более 25 -замедляет реакцию или ниже 15-агглютинация всех групп кр, добавление несоот капель);• особенности исследуемой крови.

15. Резус-фактор присутствует в крови 85% людей, а у 15% отсутствует.

Система АГ резус представлена пятью осн АГ: D, C, с, Е, e кот расположены на 2ух хромосомах. Наиболее активен из всех АГ Rh_o(D) - резус-фактор. В зависимости от его наличия или отсутствия кровь людей делят на резус-положительную (Rh⁺⁾ и резус-отрицательную (Rh^-).

1)Способы определения резус-фактора в клинической практике: используют экспресс-методы определения (D-фактора). Для исследования можно исп свежую несвернувшуюся кровь, взятую из пальца перед исследованием, или консервированную кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.

Методика Исследование проводят в центрифужных пробирках объёмом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ(IV), разведённую 33% раствором декстрана. Затем в неё доб одну каплю исс-ей крови (или ЭР). Круговым вращением пробирки содержимое размазывают по её внутр поверхности, чтобы содержимое растеклось по стенкам (ускоряет р). Агглютинация наступает в течении 1 мин, но следует ждать 3 мин. Затем для искл неспецифической агрегации эЭР в пробирку добавляют 2-3 мл физ раствора и перемешивают путём одно-двукратного перевертывания пробирки (без взбалтывания!). Трактовка результатов. Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветлённой жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно окрашенная розовая жидкость) - резус-отрицательная принадлежность.

2)Лабораторные способы определения резус-фактора

1.Метод агглютинации в солевой среде Используют спец сыворотки, содержащие полные антитела анти-резус. Эритроциты в виде 2% взвеси в изотоническом растворе хлорида натрия соединяют в пробирках с антирезусной сывороткой. Пробирки помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 С, после чего осадок ЭР на дне рассматривают с помощью лупы и по его форме учитывают результат. При положительном результате (Rh⁺⁾ осадок имеет характерный рисунок в виде нитей или зернистости. При отрицательном -вид правильно очерченного круга.

2.Метод агглютинации в присутствии желатина B две пробирки помещают по 0,02-0,03 мл осадка исследуемых эритроцитов. Затем в первую пробирку добавляют 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) анти-резусной сыворотки, во вторую (контрольную) пробирку - 2 капли (0,1 мл) 10% раствора желатина и 2 капли (0,1 мл) физиологического раствора.

Содержимое осторожно перемешивают. Затем пробирки инкубируют в термостате при температуре 45-48?С в течение 30 мин, после чего добавляют 5-8 мл физиологического раствора и переворачивают пробирки 1-2 раза для перемешивания.

Результат учитывают, просматривая пробирки на свет невооружённым глазом или через лупу. Eсли ЭР резус-положительны, произойдёт их агглютинация. Отсутствие агглютинации -кровь резус-отрицательная. B контрольной пробирке агглютинация эритроцитов должна отсутствовать.

3.Непрямой антиглобулиновыи тест (реакция Кумбса) при возникновении трудностей в определении резус-принадлежности крови, связанных с нечёткими результатами. Реакция основана на использовании антиглобулиновой сыворотки.

При обработке резус-положительных ЭР неполными антителами наступает их обволакивание, сенсибилизация по отношению к антиглобулиновой сыворотке, которая агглютинирует сенсибилизированные ЭР, поскольку имеет антитела к глобулинам.

В пробирку вносят антирезусную сыворотку и отмытые физ раствором ЭР, помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 С, после чего ЭР тщательно отмывают. Последующий этап реакции проводят на плоскости. Каплю взвеси ЭР смешивают с равным количеством антиглобулиновой сыворотки и учитывают результат. Наличие агглютинации - показатель того, что исследуемый образец крови резус-положительный. Если агглютинация отсутствует резус-отрицательная.

4.Реакция с анти-D-моноклональными антителами На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D-монокло- нальных антител и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови. За реакцией наблюдают в течение 3 мин. При смешивании анти- D-MKA с образцами резус-положительных ЭР отмечают быстро наступающую лепестковую агглютинацию. Если кровь резусотрицательная, агглютинация отсутствует.

16. Переливание крови Кровь - одна из тканей организма, поэтому переливание крови от одного индивидуума другому можно рассматривать как операцию трансплантации ткани.

Механизм действия перелитой крови Перелитая кровь действует на элементы нервной рецепции, а также ферментные и гормональные системы обмена, изменяя его на всех уровнях: от молекулярного до органно-тканевого. Перелитая кровь оказывает на организм реципиента следующие эффекты:

• заместительный(возмещении утраченной организмом части крови);• гемодинамический (у больных с острой кровопотерей и травматическим шоком оно приводит к стойкому увеличению ОЦК, увелич венозного притока к правым отделам сердца, усилению работы сердца и повышению минутного объёма крови. Улуч микроциркул-ия) иммунологический (За счёт введения гранулоцитов, макрофагов, лимфоцитов, компонентов комплемента, Ig, цитокинов)• гемостатический;• стимулирующий (повышается основной обмен, увеличивается дыхательный коэффициент, усиливается газообмен).