Методика обработки материала для электронно-микроскопического исследования

1. Быстрое взятие материала.

2. Фиксация в 2—4 % забуференном растворе глутаральдегида в течение 1ч.

3. Промывка материала буферным раствором (рН 7,3—7,4) 3 раза по 30 мин.

4. Постфиксация в 1 % растворе тетраоксида осмия в течение 1—2 ч.

5. Промывка материала буферным раствором 3 раза по 30 мин.

6. Обезвоживание в спиртах восходящей концентрации (70 %, 90 %, 100 %) по 10 мин, в 100 % — 2 раза по 15 мин.

7. Пропитывание материала заливочной средой, состоящей из эпоксидных смол, до 24 ч.

8. Заливка материала эпоксидными смолами с добавлением катализатора и последующим помещением его в термостат (60 °С) для полимеризации до 24 ч.

9. Заточка и резка блока.

10. Окрашивание срезов:

а) получение полутонких срезов и окрашивание их метиленовым синим;

б) получение ультратонких срезов с последующим окрашиванием их (контрастированием) раствором уранилацетата (1—2 ч), а затем раствором цитрата свинца (20—30 мин).

Записать или зарисовать в альбом.

1. Требования, предъявляемые к гистологическому препарату

2. Основные этапы приготовления гистологических препаратов.

3. Методы окрашивания и основные типы красителей.

4. Требования при работе с микроскопом.

5. Методы исследования, применяемые в гистологии, цитологии, эмбриологии.

Выполнение самостоятельных контрольных работ.

Самостоятельная контрольная работа № 1

1. На рисунке представлен оптический микроскоп. Цифрами отмечены детали. Подпишите их.

 

1)

2)

3)

4)

5)

6)

7)

К оптической системе микроскопа относятся №_____________

 

2. У микроскопа объектив имеет увеличение х40, окуляр – х15. Видимое изображение больше реального в:

А) 500 раз;

Б) 55 раз;

В) 600 раз;

Г) 1000 раз.

3. Данный рисунок получен с использованием:

А) трансмиссионной микроскопии;

Б) иммуногистохимии;

В) сканирующей микроскопии;

Г) оптической микроскопии.

 

 

4. Заполнить таблицу «Приготовление препаратов для оптической микроскопии».

 

Этап	Сущность этапов

 

5. Каким образом рассчитывают увеличение светового микроскопа?

6. Вам необходимо выяснить присутствуют ли в выданной вам ткани эластические волокна. Какой метод окраски и тип микроскопии вы выберете?

7. Заполнить таблицу «Типы красителя».

Тип красителя	Окрашиваемые структуры	пример

 

8. Дайте определение метода фиксации. Напишите классификацию фиксатора.

Самостоятельная контрольная работа № 2

1. На рисунке представлен оптический микроскоп. Цифрами отмечены детали.

Подпишите их.

 

 

К механической системе микроскопа относятся №_____________

 

2. Видимое изображение больше реального в 400 раз, объектив имеет увеличение х40, окуляр:

А) х 10;

Б) х20;

В) х8;

Г) х15.

3. Данный рисунок получен с использованием:

А) трансмиссионной микроскопии;

Б) флуоресцентной микроскопии;

В) сканирующей микроскопии;

Г) оптической микроскопии.

 

4. Заполнить таблицу «Приготовление препаратов для электронной микроскопии».

 

Этап	Сущность этапов

 

5. Для чего появились замороженные срезы?

6. Какими методами подготовки гистологических препаратов и окраски нужно воспользоваться для получения препарата жировых капель в белой жировой ткани?

7. Заполнить таблицу «Специфические методы окраски»

Тип окраски	Окрашиваемые структуры	Принцип метода

 

8. Дайте определение линейного увеличения микроскопа. Рассчитайте линейное увеличение светового микроскопа, если увеличение окуляра 7х, а увеличение объектива 40х.

Самостоятельная контрольная работа № 3

1.На рисунке представлен оптический микроскоп. Цифрами отмечены детали.

Подпишите их.

 

 

К осветительной системе микроскопа относятся №_____________

 

 

2. Видимое изображение больше реального в 900 раз, окуляр имеет увеличение х10, объектив:

 

А) х80;

Б) х100;

В) х90;

Г) х9.

3. Какими видами микроскопии и окраски воспользовались для получения данной фотографии?

 

 

4. Заполнить таблицу: Виды фиксаторов для оптической и электронной микроскопии.

	Оптическая	Электронная

5. Какими видами микроскопии и окраски можно воспользоваться для изучения ультраструктуры митохондрий?

6. Как настроить фокус микроскопа при большом увеличении и не разбить покровное стекло препарата?

7. Заполнить таблицу «Типы микроскопии».

Тип микроскопии	Облучающая система	Увеличение	Разрешение	Тип окраски
Оптическая
Электронная

 

8. Дайте определение понятия «Разрешающая способность микроскопа». Напишите формулу, по которой она вычисляется. Рассчитайте разрешающую способность светового микроскопа.

Тема