Н-12. Нозокомиальные и внебольничныеMRSA и их молекулярно-генетическая характеристика

О.Е.Хохлова^1,2, О.В. Перьянова^1,2, В.В. Гостев⁴, С.В. Сидоренко⁴, Н.К. Поткина², О.В. Теплякова¹, В.В. Камшилова⁵, Д.Н. Капшук¹, Я. Ивао³, Т. Ямамото^{2,3 1}ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф.Войно-Ясенецкого Минздрава России, Красноярск, Россия, ²Российско-Японский центр микробиологии, метагеномики и инфекционных заболеваний, Красноярск, Россия, ³Международный медицинский научно-образовательный центр г. Ниигата, Япония, ⁴НИИ Детских инфекций ФМБА России, СПб, Россия; ⁵ Красноярская межрайонная клиническая больница скорой медицинской помощи имени H.С. Карповича, Красноярск, Россия.

Актуальность и цель: Метициллинорезистентный Staphylococcus aureus (MRSA) является одним из основных возбудителей, характеризующихся множественной лекарственной устойчивостью с начала 1960-х годов. MRSA является одним из наиболее важных человеческих патогенов, вызывающих инфекции различной степени тяжести, начиная от абсцессов кожи и раневой инфекции и даже опасных для жизни заболеваний, таких как сепсис, пневмония, синдром септического шока и других. При этом MRSA могут быть как причиной госпитальных инфекций (НA-MRSA), так и вызывать различные заболевания у здоровых лиц, не находящихся в стационаре (CA-MRSA). Целью данной работы является исследование молекулярно-генетических особенностей HA- и CA-MRSA.

Материал и методы: Штаммы MRSA (n = 134) были изолированы из клинических образцов в больницах и амбулаторно в Красноярске в течение 2007-2016 гг. Материалами для исследования на бактерионосительство служили мазки из носа, зева, мазки с кожи; от пациентов – в зависимости от нозологии, мокрота, раневое отделяемое, биоптат, кровь. Штаммы MRSA были выделены от больных с пневмонией, сепсисом, с инфекциями кожи и мягких тканей, остеомиелитом, онкологических больных, ожоговых больных, от студентов, спортсменов, медицинских работников. Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили бактериологическим методом. Подтверждение принадлежности к MRSA - с помощью ПЦР (гены nuc, mecA ). Молекулярно-генетическое исследование MRSA – ST типирование, spa типирование методом секвенирования; agr и SCC mec типирование методом ПЦР; коагулазотипирование (kit Denka Seiken, Tokyo, Japan). Определяли наличие 43 генов вирулентности методом ПЦР: 3 лейкоцидина, 5 гемолизинов, 17 энтеротоксинов, 3 эксфолиатина, 14 адгезинов, ACME- arsA, set, edin генов. Чувствительность к 38 антибиотикам - методом серийных разведений в плотной среде, в соответствии с рекомендациями CLSI. Гель-электрофорез в пульсирующем поле (PFGE) проводили с применением SmaI.

Результаты: В Красноярске выявлены следующие генетические варианты MRSA: ST239 / SCCmecIIIA, ST8 / SCCmecIV.3.1.1 (IVс), ST239 / SCCmecIII.1.1.1 и ST12 / SCCmec (untypeable) в 64,18%, 29,85%, 5,22 %, и 0,75%, соответственно. Штаммы MRSA ST8 демонстрировали одинаковый генотип (ST8 / спа1 [T008] / agr1 / SCCmecIVc / CoaIII); у таких штаммов установлено наличие генов lukED, генов, кодирующих адгезины, гемолизины и они были положительными для гена SEA. По результатам гель-электрофореза в пульсирующем поле установлено распространения одного генетического варианта как в условиях стационаров, так и вне больниц. Штаммы MRSA ST8 оказались устойчивыми к 1-2 не β-лактамным антибиотикам, таким как аминогликозиды, фторхинолоны, хлорамфеникол. Штаммы MRSA с генотипом ST239 / spa3 (T037) / agr1 / SCCmecIIIA / CoaIV; имели гены lukED, гены, кодирующие адгезины, гемолизины и были положительными для гена TSST-1, кодирующего токсин синдрома токсического шока, а также генов sek seq, кодирующих энтеротоксины. Другой вариант клональной линии ST239 MRSA - штаммы с генотипом ST239 / agr1 / SCCmecIII.1.1.1, у которых отсутствовал ген TSST-1.Штаммы ST239 MRSA характеризовались устойчивостью практически ко всем антибиотикам, включая аминогликозиды, тетрациклины, макролиды, линкозамиды, фторхинолоны, хлорамфеникол, рифампицин, Такие штаммы участвовали в развитии только госпитальных инфекций, они отличались разнообразием генетических вариантов, но при этом относились к одной генетической линии. В качестве генетического признака, ST239 MRSA демонстрирует непрерывное и динамичное развитие за счет горизонтального переноса генов, который опосредуется мобильных генетических элементов, плазмид и фагов, а также через мутации.

Выводы: В г. Красноярске выявлено распространение генетических вариантов MRSA ST8 (ST8_Kras) и ST239 (ST239_Kras). Разные генетические варианты отличаются по чувствительности к антимикробным препаратам, что важно при подборе антибактериальной терапии.