Микробиологическое исследование

1. Сбор мокроты: - специальное помещение,

- контроль,

- контейнеры,

- 3-х кратное исследование (3 дня подряд).

2. Микроскопия мокроты

Мазок по Цилю-Нельсену (1 мл – 5000 МБТ). Люминесцентная микроскопия.

3. Культуральный метод

10 – 100 МБТ 1 мл для позитивного результата. Плотные среды Левенштейна-Йенсена, Финна -рост через 4-6 нед. (до 3 мес.). Жидкие среды –рост на поверхности. Микроколонии – «жгуты» - корд-фактор. Автоматизированные системы MGIT-BACTER 960 (рост через 11-19 дней).

Бактериовыделителями считают:

· больной, у которого любым методом исследования обнаружены БК даже однократно при наличии клинико-рентгенологических данных активного туберкулеза;

· обнаружены двукратно любым методом даже при отсутствии явных рентгенологических туберкулезных изменений.

27бил. Молекулярно-генетические методы выявления микобактерии туберкулеза: ПЦР, Hain-test, тест-система INNO-LIPA, биочипы.

4. Молекулярно-генетические методы:

ПЦР – амплификация фрагментов бациллярной ДНК в диагностических образцах. Идентификация МБТ за 5-6 ч. (1-10 клеток в образце).

Hain-тест – метод генотипирования МБТ (видовая идентификация и определения ЛУ). Комбинации растворов фрагментов ДНК, наличие или отсутствие некоторых генов в геномных областях RD1, RD9, RD10. Выявление мутаций в определенных нуклеотидных последовательностях известных генов: rpob-R- устойчивость к рифампицину, katG-HinhA –к изониазиду.

Коммерческая тест-система INNO-LIPA для определения наиболее встречаемых мутаций к рифампицину, основанная на гибридизации продуктов ПЦР с зондами на нитроцеллюлозной мембране.

Биочипы (определение ЛУ) – несколько признаков. ДНК-зонд + материал = дуплекс (флюоресценция). 1 мм² – исследуются десятки ячеек. Основанный на принципе тест-системы INNO-LIPA, но благодаря использованию большого числа коротких зондов, фиксированных в микрообъеме на поверхности предметного стекла, он позволяет выявить большее число точковых точечных мутаций, а результаты анализа оценивают с помощью компактного флуоресцентного микроскопа с компьютерным обеспечением. Метод был предложен для быстрого определения ЛУ к рифампицину и изониазиду.

5. Иммунологические исследования:

ИД: CD3 + клетки 50%

CD4 + клетки 30%

CD8 + клетки 30% при из соотношении

CD4 +/CD8 + 1,5

- количество бласттрансформированных лимфоцитов на ФГА 50%, на PPD 2%.

- торможение миграции макрофагов с PPD 20%.

ɣ - интерфероновый тест

ИФН - ɣ -фактор специальной иммунологической защиты. Сенсибилизированные

Т- лимфоциты + Аг МБТ (ESAT-6, CFP-10) = S ИФH - . Концентрация ИФН -ɣ или количество Т-ЛФ, выделяющих ИФН -ɣ (E lispot).

6. Серологические методы:

ИФА – определение Ат к МБТ в сыворотке крови больного. Чувствительность 50-70%, специфичность 90%.

7. Методы лучевой диагностики:

ü Обязательные методы

1. Фонография

2. Обзорная рентгенография

3. Цифровая рентгенография – пульмоскан

ü Дополнительные методы:

4. Рентгенография в разных проекциях

5. Рентгеноскопия

6. Стандартная послойная томография

7. КТ, МРТ (заболевание позвоночника)

8. Контрастное рентгенологическое исследование (бронхография)

9. УЗИ (плевральный выпот)

10. Радионуклидная диагностика

8. Бронхологические методы:

Трахиобронхоскопия – осмотр бронхов, состояние слизистой, содержимое, диаметр, тонус, подвижность, забор материала.

Бронхоальвеолярный лаваж – промывание больших дистальных отделов бронхиального дерева, респираторных отделов.

9. Хирургические методы:

1. Плевральная пункция и пункциональная биопсия плевры

2. Торакоскопия (плевроскопия)

3. Трансбронхиальная биопсия

4. Трансторакальная биопсия (без осмотра грудной клетки)