Виготовлення нервово-м’язового препарату

Мета Ознайомитись із основними способами знерухомлення піддослідної тварини, навчитись препарувати та виготовляти нервово-м’язовий препарат.

 

Прилади та матеріали. Фізіологічний розчин (вода дистильована- 100 мл, хлорід натрію- 0,65 г),набір для препарування(лоток, дві пари ножиць, препарувальні голки, скляні гачечки, серветки, пінцет).

 

Об’єкт дослідження жаба

 

Питання для теоретичної підготовки Предмет і значення фізіології, поняття: організм, фізіологічна функція, рефлекс, функціональна система; основні властивості живої тканини; подразливість та види подразників

 

Завдання 1 Способи знерухомлення жаби.

1. Руйнування спинного та головного мозку.

Жабу беруть у ліву руку черевцем до долоні. Великим пальцем нахиляють голову жаби вниз. Знаходять невелике заглиблення позаду від потиличної кістки і вводять в субокципітальну ділянку кінець препарувальної голки на глибину 1-2 мм (до дотику з тілом хребця). Зробивши декілька поперечних рухів вістріям голки, відділяють головний мозок від спинного. Після цього повертають голку на 90° в напрямку до тулуба, входять в спинномозковий канал і руйнують спинний мозок. Виводять голку з спиномозкового каналу, вводять її в череп та руйнують головний мозок (Мал.2).

1. 2.

 

Мал.2. Препарування жаби.

1 – Місце розрізання хребта;

2 – Місце введення препарувальної голки.

2. Декапітація з наступним руйнуванням спинного мозку.

Жабу беруть в ліву руку, а правою вводять, як можна глибше в рот під задню частину верхньої шелепи, нижню браншу ножиць. Швидким рухом відрізають верхню щелепу на рівні заднього кінця барабанних перетинок (нижню щелепу зберігають). В отвір спинномозкового каналу вволять препарувальну голку і руйнують спинний мозок.

У цілому ряді дослідів використовується спінальний препаратжаби - жаба, в якої зруйнований головний і збережений спинний мозок.

Завдання 2. Фіксація жаби.

При препаруванні відповідних нервів та м’язів і проведенні досліджень спінальну жабу необхідно закріпити на пластинці нерухомо. Краще всього фіксувати її на корковій або парафіновій пластинці розміром 20х10 см.

Фіксуючи жабу на пластинці, дуже важливо добре натягнути її кінцівки, щоб вони були нерухомі і не заважали запису відповідних реакцій. Булавки необхідно протикати в напрямку протилежному рухові кінцівки, інакше лапки будуть ковзати по булавці і фіксація не забезпечиться.

 

Завдання 3. Гострий дослід на спінальній жабі

Підготувати препарат спинальної жаби. Підвісити жабу в штативі, для чого проколоти гачком нижню щелепу і закріпити її корком. Дослід починати через кілька хвилин після того, як скінчіться різке збудження і прігничення (спинальний шок). Послідовно з інтервалами у 2-3 хвилини робити подразненя шкіри задньої кінцівки жаби: механічне – пощіпування пінцетом лапки, хімічне – накладання шматочнків вати змоченної 0,5% розчином H2SO4. Після кожної дії змивати кислоту водою. Температурне – дотик до лапки нагрітою скляною паличкою. Єлектричне – нанесення поодиноких мінімальних подразнень. У кожному випадку відмічатихарактер відповідної реакції.

Зруйнувати у жаби спинний мозок та повторити дію тих же подразників.

На задній поверхні стегна жаби розрізати шкіру, розсунути скляним гачком м’язи, знайти і підняти сідничний нерв. Завдати нерву тих же подразнень та відмітити характер відповідної реакції.

 

Завдання 4. Виготовлення нервово-м’язового препарату та препарату ізольованого литкового м’яза жаби.

Знерухомлюють тварину. Ножицями перерізають хребет на 1 см вище куприкової кістки (Мал.2) і видаляють звисаючу передню частину тулуба та тканини черевної стінки разом із внутрішніми органами. Утримуючи однією рукою через серветку залишок хребта, другою рукою, через серветку, знімаємо шкіру з обох лапок і отримуємо препарат двох задніх лапок жаби (реоскопічні лапки).

Надалі виготовляють препарат ізольованої лапки. З цією метою розміщують препарат так, щоб лапки звисали донизу під прямим кутом до хребта. Ножицями вирізають куприкову кістку – уростіль, який при такому положенні препарату видається доверху. Потім акуратно, поздовжнім розрізом, розділяють лапки по середній лінії хребців, що залишилися. Таким же чином розрізають лобкове зчленування. Далі відпрепаровують литковий м’яз та сіднічний нерв (під час препарування не слід торкатися ножицями до нерва). Для цього підводять під ахіловий сухожилок браншу ножиць, відділяють м'яз по всій довжині і підрізають нижче сесамовидної кістки.

Для препарування сідничного нерва стегно розташовують спинною стороною догори. М'язи стегна розводять препарувальними голками і скляними гачками. Відпрепаровують сідничний нерв по всій його довжині, піднімаючи його скляним гачком та підрізаючи навколишні тканини. Відрізаємо усі м’язи стегна (залишаючи вільною головку стегнової кістки), а також тазові кістки, залишаючи вільним нерв та приєднаний до нього шматочок хребта.

Утримуючи ахілове сухожилля пінцетом, відтягують м’яз в бік для відокремлення від фасцій що зв’язують його з іншими тканинами.

Потім перерізають гомілку нижче колінного суглоба, залишаючи шматочок гомілкової кістки. Таким чином, отримуемо нервово-м’язовий препарат, якій складається з литкового м’яза, сідничного нерва, невеликого шматочка хребта і стегнової кістки.Готовий нервово-м’язовий препарат поміщаємо у чашку Петрі з фіз.розчином (Мал.3;4).

Мал.3. Стадії приготування нервово-м’язового препарата.

1-3 – препарування жаби; 7;8 – препарування

4 – реоскопічні лапки; литкового м’яза.

5;6 – препарування сідничного нерва;

 

Для виготовлення препарату ізольованого литкового м'яза нерв відсікають повністю біля самого м’яза.

Питання для самопідготовки та контролю

1 Що таке спінальна жаба?

2 Із чого складаються реоскопичні лапки?

3.Як приготувати нервово-м‘язовий препарат та препарат ізольованого литкового м'яза?

4 Пояснить, чому після руйнування спинного мозку немає відповідної реакції на подразненя шкіри?

5 Які подразники є адекватними та неадекватними для збудливих тканин?

 

Лабораторна робота № 2.