Принципы лабораторной диагностики

Возбудитель может быть выделен от больных и трупов, из переносчиков и (при эндемических риккетсиозах) от диких животных (обычно грызунов), заражающихся в эндемичных очагах. При всех риккетсиозах источник выделения — кровь, взятая из вены больного в ранние сроки лихорадки; можно использовать цельную, дефибринированную кровь или сгустки (что лучше всего).

Один из основных методов — микроскопия возбудителя в окрашенных мазках; методы окрашивания имеют первостепенное значение. В практике применяют окраску по Романовскому-Гимзе, по Кастанеде и по Маккиавело (можно использовать модификацию П.Ф. Здродовского).

Биологическая проба (проба Музера-Нейла) Исследуемый материал вводят лабора­торным животным; наиболее приемлемы морские свинки, которым материал вводят внутрибрюшинно. При эпидемическом риккетсиозе предпочтительно использовать сам­цов, т.к. у них развивается специфический периорхит с накоплением риккетсии в мезотелии влагалищных оболочек яичка (клетки Музера). Для выделения возбудителей везикулярного, осповидного риккетсиозов и лихорадки цуцугамуши можно заражать белых мышей (вводят 0,5 мл крови). Для диагностики Q-лихорадки рекомендуют заражать морских свинок непосредственно в тестикулы (0,3-0,5 мл крови). Однако для выделения риккетсии Провачека эти методы малоэффективны. Выделение возбудителя сыпного тифа мож­но провести, используя платяных вшей, в желудках которых риккетсии активно размно­жаются. После кормления вшей инфекцию воспроизводят на чувствительном животном (в очень большом количестве накапливаются в головном мозге). Любые манипуляции с возбудителем представляют большую опасность.

Серологические исследования составляют основу современной лабораторной диагностики; получение надежных результатов возможно лишь к концу 1 недели заболевания, и лечение больного следует начинать эмпирически, не дожидаясь результатов лаборатор­ных исследований.

Реакция Вейля-Феликса — диагностическая реакция, основанная на способности сыворотки пациентов, страдающих различными риккетсиозами, агглютинировать ОХ-штаммы (особенно ОХ₁₉ и OX₂) Proteus vulgaris. Следует помнить, что AT к возбудителю сыпного тифа перекрестно реагируют только с бактериями штамма ОХ₁₉. Реакция обусловлена структурным сход­ством поверхностных Аг.

РСК — основной метод диагностики в РФ и других странах, включая США; обладает достаточной чувствительностью и специфичностью; малопригодна для диагностики свежих случаев, т.к. для выявления достоверного увеличения титров AT необходим большой временной интервал. Исследование проводят в парных сыворотках (титры 1:20-1:80).

Более чувствительна и специфична реакция непрямой иммунофлюоресценции; метод позволяет идентифицировать IgM и IgG, что удобно для ранней диагностики и определения стадии болезни. При постановке реакции существует риск получения ложноотрицательных результатов, особенно на ранней стадии заболевания.

Для выявления R. rickettsii используется реакция прямой иммунофлюоресценции, позво­ляющая идентифицировать Аг возбудителя в биоптатах кожных поражении (можно использо­вать и другие иммунохимические методы); специфичность реакции — 100% (чувствительность достигает 70%); позволяет диагностировать заболевание уже на 3-4 сутки; единственный адекватный серологический тест, пригодный для диагностики.

Для диагностики активных форм эрлихиозов разработана ПЦР; учитывая спорадический характер заболевании, широко не применяется.

Род Coxiella

Представлен короткими палочками 0,2-0,4´0,4-1 мкм; по тинкториальным свойствам, зависимости от клеток хозяина, естественной связи с переносчиками-членистоногими и позвоночными сходны с прочими риккетсиями; образуют фильтрующиеся формы. Размножаются преимущественно в вакуолях и фаголизосомах клеток, хорошо растут в желточном мешке куриного эмбриона. Способны к фазовой изменчивости с образованием форм, аналогичных S- и R-формам бактерий; в природе встречаются в I фазе, после длительных пасса­жей трансформируются во II фазу; диссоциация носит обратимый характер (после пассажей на животных). Риккетсии II фазы склонны к спонтанной агглютинации и агглютинации в нормальной сыворотке, фагоцитируются при отсутствии AT. Образуют спорообразные формы, обеспечи­вающие устойчивость к высоким температурам и высушиванию: типовой вид — С. burnetii, вызывает своеобразное заболевание, известное как Q-лихорадка (лихорадка девятой мили, квадрилатеральная лихорадка). Как отдельное заболевание впервые была выявлена в 1935 г. Дерриком в Южном Квинсленде (Австралия); возбудитель был идентифицирован в 1937 г. и по предложению Деррика назван С. bumetii. Независимо от австралийских исследователей в США Кокс выделил фильтрующийся агент из клещей-переносчиков лихорадки Скалистых Гор и доказал его риккетсиозную природу (1938). В Европе история заболевания связана с эпидемиями так называемого «балканского гриппа», отмечаемыми в 1941-1943 гг. среди немецких войск, дислоцированных на Балканах, в Греции и Крыму. Заболевание регистрируют повсеместно, особенно в районах с развитым животноводством. Переносчики — многие виды иксодовых, аргасовых и гамазовых клещей (среди животных и птиц). Резервуар — клещи (возможна трансовариальная передача), грызуны, птицы и домашние животные (крупный рога­тый скот). Основной путь заражения — ингаляция возбудителя.

Род Rochalimaea

Морфологически сходны с представителями рода Rickettsia и проявляют аналогичные тинкториальные свойства. Растут преимущественно в вакуолях клеток позвоночных; в организме членистоногого-хозяина живут во внеклеточной среде (очень устойчивы к физическим и химическим агентам во внеклеточном окружении). Их также можно культивировать на бесклеточных средах, например на КА или ША. Систематика рода остается незавершенной, некоторые авторы предлагают отнести их к семейству Bartonellaceae. Реакция Вейля-Феликса отрицательна. Типовой вид — R. quintana.

Волынская лихорадка (пятидневная или тибиальная лихорадка, болезнь Вернера-Хисса). Доброкачественное инфекционное заболевание; известно еще с античного времени, т.к. поражения с похожей симптоматикой упоминаются в трудах Гиппократа и Галена. Под названием «молдаво-валахской лихорадки» было описано в период русско-турецкой войны 1877-1878 гг. В современную инфекционную патологию заболевание вошло во время первой мировой вой­ны, впервые появившись в английском экспедиционном корпусе во Фландрии (1915); забо­леваемость исчислялась сотнями тысяч человек, и тогда болезнь получила свое наиболее популярное название — траншейная, или окопная лихорадка. Еще до начала войны в Польше были зарегистрированы эндемичные очаги, где заболевание получило название «волынская лихорадка» (Лаверан, 1927). Возбудитель — R. quintana, выделен Тепфером (1916), Эркрайтом и Бэкотом (1919). Заболевание распространено в очагах педикулеза (но часто не распознается врачами), и при наличии педикулеза в местах скопления большого количества людей может формировать эпидемические вспышки. Переносчик — платяная вошь. Резервуар — больной человек (возможно длительное носительство).

Болезнь «кошачьих царапин» (гранулема Малларе). Возбудитель — Rochalimaea henselae — полиморфная грамотрицательная бактерия 1-3´0,2-0,5 мкм. Оксидазо-, каталазо- и уреазоотрицательна, инертна к углеводам. Заболевание протекает доброкачественно и напоминает поражения, вызываемые Alipia felis. Распространено повсеместно; обычно возникает после кошачьего укуса или царапин; наиболее часто наблюдают у детей. Характерны медленно заживающие повреждения, регионарный лимфаденит, лихорадка; в большинстве случаев заболевание спонтанно разрешается в течение нескольких месяцев.

В некоторых случаях наблюдают осложнения: поражения ЦНС (энцефаломенингиты, парезы), дыхательных путей (пневмонии), печени и селезенки (увеличение печени и селезенки, печеночная пурпура); наиболее часто они ассоциированы с дефектами иммунологического реагирования.

Род Еhrlichia

В последние годы отмечают рост заболеваний вызываемых риккетсиями рода Еhrlichia (семейство Ehrlichieae), известных как эрлихиозы. Подавляющее большинство эрлихий патогенно для различных животных: собак (особенно немецких овчарок), лошадей и др. Первой эрлихией, выделенной от человека, была Е. sennetsu (1986), позднее в Форт Чэффи (Арканзас, США) у пациента с эрлихиозом был выделен ранее неизвестный микроорганизм, получивший название Е. chaffeensis. Со дня выявления первого случая зарегистрированы больше 200 больных. Резервуар — олени и, по мнению некоторых авторов, собаки; переносчики – клещи и прочие кровососущие членистоногие. Для поражений характерна выраженная сезонность — до 80% поражений отмечают с мая по июль. Наибольшее количество случаев зарегистрировано в центральных и юго-западных штатах США — Арканзасе, Оклахоме, Миссури, Вирджинии и Теннесси.

Эрлихии размножаются в тканевых макрофагах и моноцитах периферической крови с последующей их гибелью (механизм цитотоксического действия остается неизвестным) и гематогенным диссеминированием возбудителя по всему организму (включая костный мозг и орга­ны ЦНС). Формирующийся симптомокомплекс напоминает симптомы пятнистой лихорадки, Скалистых Гор (на фоне лейко- и тромбоцитопении), но сыпь и васкулиты отмечают редко; характерный признак болезни — повышенное содержание аминотрансфераз в сыворотке крови.

Диагностика заболевания: обычно проводят микроскопию мазков периферической крови; при эрлихиозе в 1-2% нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов обнаруживают внутриклеточные гроздеобразные включения-морулы, напоминающие ягоды малины. Морулы — вакуоли размером 2-5 мкм, содержащие эрлихии. Приемлемо проведение серологических исследований с использованием доступных Аг Е. canis, перекрестно реагирующих с AT к Е. sennetsu.

Список литературы

1. Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 9^th edition. Baltimore: Williams & Wilkins, 1994 (перевод: Определитель бактерий Берджи, т.1 и т.2. М.: Мир,1997)

2. Butterworths Medical Dictionary, 2nd edition. McDonald Critchey ed. London-Boston: Butterworths, 1980.

3. Color atlas of medical microbiology. Hart Т., Shears P. Mosby'Wolf, 1996.

4. Diagnostic Pathology of Infectious Diseases. Woods G.L., Gutierrez Y. Philadelphia-London: Lea & Febiger, 1993.

5. Handbuch der mikrobiologischen Laboratoriumstechnik. Dickseit R., Janke D. Dresden: Veriag Theodor Steinkopff, 1969.

6. Infectious disease secrets. Gates R. Philadelphia; Hartley & Belfus, 1998.

7. Mechanisms of Microbial Diseases, 2th edition. Schaechter М., Medoff G., Eisenstein B. Baltimore: Williams & Wilkins, 1993.

8. Microbiology and Immunology. Johnson A.G., Ziegler R., Fitzgerald T.J,, Lukasewycz О., Hawley L. Baltimore: Williams& Wilkins, 1989.

9. Microbiology and Infectious Diseases, 3rd edition. Virella G. Baltimore: Williams & Wilkins, 1997

10. Stedman's Medical Dictionary,26th ed. Baltimore: Williams & Wilkins, 1995.

11. The Enterobacteria. Janda J.M., Abbott S.L. Lippincott'Raven, 1998.

12. Webster's Medical Desk Dictionary. Springfield; Merriam-Webster, 1995.

13. Антропозоонозы. Руднев Г.П. М.: Медицина, 1976

14. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. Езепчук Ю.В. М.: Медицина, 1973.

15. Биохимическая организация микробной клетки. Кашкин П.Н., Любимов Ю.А. Ленинград: ЛенГИДУВ, 1977.

16. Ветеринарная микробиология и иммунология. М.: Агропромиздат,1991.

17. Внутрибольничная инфекция. Руководство по лабораторным методам исследования. Parker М. М.: Медицина, 1988.

18. Возбудители пастереллезов и близких к ним заболеваний. Доморадский И.В.М.: Медицина, 1971.

19. Иммунологические аспекты инфекционных заболеваний. Под редакцией G.Dick. М.: Медицина, 1982.

20. Генетика бактерий и бактериофагов. Hays W. М.: Мир, 1965.

21. Кампилобактериоз. Чайка Н.А., Хазенсон Л.Б., Butzler J. М.; Медицина., 1988.

22. Клиническая микробиология. Нейчев С. София: Медицина и физкультура, 1977.

23. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. Под редакцией Л.Б. Борисова и А.М. Смирновой. М.: Медицина, 1994.

24. Медицинская микробиология. Под редакцией В.И. Покровского. М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА 1998.

25. Методы общей бактериологии. Васильев Д.А., Золотухин С.Н., Никишина Н.М.. Ульяновск: изд-воУГСХА, 1998.

26. Методы определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам. Ведьмина Е.А., Власова И.В., Гивенталь М.И. М.: ЦОЛИУВ, 1979.

27. Микоплазмозы. Прозоровский Н.С. н др. М.: Медицина, 1978.

28. Микробиология. Лебедева М.Н.. М. Медицина 1969.

29. Микробиология. Тимаков В.Д. М.: Медицина, 1973.

30. Микрофлора человека в норме и в патологии. Петровская В.Г., Марко О.П. М.: Медицина, 1976.

31. Мир микробов, 4-е издание. Stainer R.Y., Adetberg E.A., Ingraham J.L, тт. I-III. М.: Мир, 1979.

32. Молекулярная микробиология. М.:Мир.1977.

33. Общая микробиология. Schlegel Н. М.: Мир, 1972.

34. Основы микробиологии. Фробишер М. М.:Мир 1965.

35. Приобретенный иммунитет и инфекционный процесс. Покровский В., Авербах М., Литвинов В., Рубцов И. М.:Медицина, 1979.

36. Руководство по медицинской микробиологии. Джавец Э., Мельник Д., Эйдельберг Э., 1-3 т.т. М.:Мир, 1982.

37. Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, тт.I-Х.М.: Медицина, 1968.

38. Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, 2-е издание. Под редакцией К.И. Матвеева. М.: Медицина, 1973.

39. Сальмонеллезы Покровский В.И., Черкасский Б.Л. «Мед газета», 1995.

40. Санитарная микробиология. Под редакцией Г.П. Калины и Г.Н. Чистовича. М.: Медицина, 1969.

41. Сибирская язва. М.: Колос, 1996.

42. Справочник по лабораторной диагностике зооантропонозов. Шляхов Э.Н„ Андриеш Л., Груз Е. Кишинев: Картя Молдовеняске, 1979.

43. Учебник медицинской микробиологии. Аристовский В.М, Минкевич И.Е., Фрид С.М. М.: Медгиз, 1945.

44. Учение о риккетсиях и риккетсиозах. Здродовский П.Ф., Голиневич Е.М. М.: Медицина, 1972.

45. Физиология бактерий. Месровяну Л., Пэунеску Э. Бухарест: Editura Academiei Reepublicii Populare Romine, 1960.

46. Частная эпизоотология. М.: Сельхозгиз 1948.

47. Эпизоотология. М.: Колос, 1974.

СОДЕРЖАНИЕ

Предисловие.............................................................................................................................. 3

Введение..................................................................................................................................... 4

Бактерии рода Bacillus........................................................................................................ 6

Bacillus anthracis............................................................................................................ 6

Bacillus cereus.............................................................................................................. 14

Прочие виды, имеющие значение.............................................................................. 16

Питательные среды для культивирования бактерий рода Bacillus......................... 16

Бактерии рода Clostridium................................................................................................ 18

Столбнячная палочка................................................................................................. 26

Clostridium botulinum.................................................................................................. 31

Clostridium novyi......................................................................................................... 35

Прочие возбудители анаэробной раневой инфекции............................................... 40

Питательные среды для культивирования клостридий........................................... 45

Грамположительные, аэробные и факультативные кокки............................................. 49

Микроорганизмы рода Staphylococcus............................................................................ 49

Staphylococcus aureus.................................................................................................. 51

S. epidermidis............................................................................................................... 54

S. saprophyticus........................................................................................................... 55

Питательные среды для культивирования стафилококков..................................... 55

Микроорганизмы рода Streptococcus.............................................................................. 58

Стрептококки группы А............................................................................................. 59

Стрептококки группы В............................................................................................. 63

S. pneumoniae (пневмококк)...................................................................................... 66

Негемолитические стрептококки............................................................................... 68

Прочие стрептококки................................................................................................. 70

Питательные среды для культивирования стрептококков...................................... 73

Бактерии рода Listeria....................................................................................................... 74

Внутривидовая дифференциация листерий………………….................................77

Рецепты и способы приготовления питательных сред для выделения листерий... 86

Бактерии рода Erysipelothrix............................................................................................. 95

Питательные среды для культивирования Е. rhusiopathiae..................................... 97

Микроорганизмы рода Actinomyces................................................................................ 98

A. bovis...................................................................................................................... 101

A. viscosus................................................................................................................. 103

A. hordeovutaeris....................................................................................................... 104

A. pyogenes................................................................................................................ 104

A. suis........................................................................................................................ 105

A. humiferis................................................................................................................ 105

Питательные среды для культивирования актиномицетов................................... 105

Микроорганизмы рода Pseudomonas............................................................................ 107

Pseudomonas aeruginosa (синегнойная палочка)..................................................... 108

Pseudomonas (Burkholderia) cepacia......................................................................... 119

Pseudomonas (Burkholderia) mallei........................................................................... 120

Pseudomonas (Burkholderia) pseudomallei (палочка Уитмора)............................... 123

Питательные среды для культивирования и идентификации псевдомонад......... 127

Микроорганизмы рода Frаncisella................................................................................. 128

Питательные среды для культивирования франциселл......................................... 132

Микроорганизмы рода Yersinia..................................................................................... 133

Схема бактериологического выделения и идентификации Yersinia enterocolitica. 146

Питательные среды для культивирования иерсиний............................................. 149

Микроорганизмы рода Pasteurella................................................................................. 151

Питательные среды для культивирования пастерелл............................................ 156

Микроорганизмы рода Brucella..................................................................................... 157

Питательные среды для культивирования бруцелл............................................... 164

Микроорганизмы рода Haemophilus............................................................................. 167

Haemophilus influenzae (палочка Афанасьева-Пфейффера).................................. 168

Питательные среды для культивирования гемофильных бактерий..................... 172

Микроорганизмы рода Campylobacter........................................................................... 174

Группа Campylobocter jejuni (С. jejuni, С. coli, С. lari)............................................ 175

С. fetus подвид fetus.................................................................................................. 180

С. coli......................................................................................................................... 180

С. sputorum sb. mucosalis.......................................................................................... 181

Spirillum pulli............................................................................................................. 181

Питательные среды для культивирования и идентификации кампилобактерий. 181

Бактерии рода Leptospira................................................................................................ 182

L. interrogans.............................................................................................................. 183

Питательные среды для культивирования лептоспир........................................... 186

Бактерии рода Mycobacterium........................................................................................ 187

Mycobacterium tuberculosis (палочка Kоxa)............................................................. 188

Mycobacterium bovis................................................................................................. 198

Мycobacterium africanum.......................................................................................... 199

Мycobacterium avium................................................................................................ 199

Мycobacterium paratuberculosis................................................................................ 200

Мycobacterium intracellulare...................................................................................... 200

Питательные среды для культивирования патогенных микобактерий................ 200

Микрорганизмы рода Mycoplasma................................................................................ 204

Питательные среды для культивирования микоплазм.......................................... 209

Группа Rickettsiaceae....................................................................................................... 211

Род Coxiella............................................................................................................... 215

Род Rochalimaea........................................................................................................ 215

Род Еhrlichia.............................................................................................................. 216

Список литературы................................................................................................................ 218

 

 

МЕТОДЫ ЧАСТНОЙ БАКТЕРИОЛОГИИ

Учебно-методическое пособие

 

Дмитрий Аркадьевич Васильев Анатолий Анисимович Щербаков Лидия Владимировна Карпунина Сергей Николаевич Золотухин