Биохимические характеристики

Бруцеллы ферментируют углеводы, однако образован­ия кислоты или газа обычно недостаточно для идентификации. Для дифферен­циации используют способность некоторых биотипов вырабатывать сероводород, а также чувствительность к бактериостатическому действию красителей — основного фуксина и тионина (табл. 19).

 

Таблица 19. Некоторые дифференциальные признаки рода Brucella

Признак

B.melitensis

B. abortis

B.suis

B.neotomae

B. ovis

B. canis

Субстраты, метаболизируемые окислением

Аминокислоты:

L-аланин

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

±

–

±

–

±

±

±

L-аспарагин

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

±

–

–

+

+

–

L-глутамат

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

+

±

±

+

+

+

Субстраты цикла мочевины:

DL-орнитин

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

+

+

+

–

–

+

DL-цитруллин

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

+

+

+

–

–

+

L-аргинин

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

+

+

+

–

–

+

L-лизин

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

–

+

–

+

+

+

–

+

Углеводы:

L-арабиноза

–

–

–

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

–.

+

–

±

D-галактоза

–

–

–

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

±

–

–

+

–

±

D-рибоза

–

–

–

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

±

–

+

D-глюкоза

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

+

i-эритритол

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

±

Потребность первых генераций в CO2

–

–

–

±

+

±

±

–

–

–

+

±

–

–

–

–

–

+

–

Образование H2S

–

–

–

+

+

+

+

–

±

±

–

+

+

–

–

–

±

–

–

Бактериостатнческое действие красителей:

Основной фуксин

1:50000

+

+

+

+

—

+

+

+

+

+

+

+

—

—

+

+

—

+

–

1:100000

+

+

+

+

–

+

+

+

+

+

+

+

–

–

+

+

–

+

–

Тионин

1:25000

—

—

—

—

—

+

–

–

—

–

—

—

+

—

—

—

–

+

+

1:50000

+

+

+

–

–

+

–

+

+

+

^

+

+

+

+

+

–

+

+

1:100000

+

+

+

–

–

+

–

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

Чувствит. к фагу «Тб»

–

–

–

+

+

+

+

+

+

+

+

+

–

–

–

–

–

–

–

 

Патогенез

Пути заражения: контактный, алиментарный и аспирационный. Принимая во внимание губительное действие желудочного сока на бруцелл, можно полагать, что при алиментарном заражении возбудитель инвазирует через верхние отделы ЖКТ. Из первоначальных ворот бруцеллы диссеминируют по лимфатическим путям и депонируются в лимфатичес­ких узлах.

В первые 5-10 суток бактерии размножаются в макрофагах регионарных лимфатических узлов (миндалины, заглоточные, подчелюстные, язычные, шейные узлы и лимфоидная ткань подвздошно-слепокишечного отдела кишечника), несмотря на то, что последние способны к частичному внутриклеточному их уничтожению (при малых дозах зараже­ния способны полностью элиминировать возбудитель). Показано, что бруцеллы выделяют низкомолекулярные продукты, ингибирующие фагосомо-лизосомальное слияние. Морфологически отмечают диффузную пролиферацию и гиперплазию элементов ретикулоэндотелиальной системы. К 20 суткам начинается процесс формиро­вания гранулeм, представленных крупными эпителиоидными клетками.

Из разрушенных макрофагов бруцеллы попадают в кровоток, что приводит к инфицированию печени, селезенки, почек, костного мозга, эндокарда (нельзя исключить и того, что возбудитель может сразу захватываться фагоцитами крови в месте внедре­ния и гематогенно диссеминировать). В пораженных органах находят очаги некроза, окруженные инфильтратами.

В дальнейшем бактерии могут попасть в молочные железы и появиться в молоке.

При зоонозах, вызванных бруцеллами, инфицирование плаценты и тканей плода живот­ных приводит к абортам, тогда как при бруцеллезе беременных женщин спонтанные аборты регистрируют не чаще, чем у здоровых. Столь разительное различие обусловлено наличием ускоряющего рост бруцелл i-эритритола в плаценте животных.

Лабораторная диагностика

Разнообразие клинических проявлений бруцеллеза на прак­тике нередко приводит к ошибочной диагностике тифа, стрептококковых инфекций, тубер­кулеза и т.д. Для постановки достоверного диагноза необходимо идентифицировать возбуди­тель. Первоначально необходимо провести бактериологическое исследование крови, принимая во внимание системный характер поражений; также изучают мочу, грудное моло­ко, аспираты костного мозга и биопсийный материал печени.

Выделение и культивирование возбудителя. Образцы инкубируют в МПБ или бульоне Мартена (можно использовать соевый бульон) при 37°С. При проведении исследования засевают 2 порции среды и в одной создают повышенную концентрацию СО_2. Через 4-5 суток наблюдают рост бруцелл, нередко в виде мелких колоний, вкрапленных в тяжи фибрина, среда остается слегка мутной или прозрачной. После пересева на твердые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отвивают чистые культуры с последующими идентификацией биохимических свойств, определением способности расти на средах с добавлением некоторых анилиновых красителей (бактериостатический метод Хеддльсона) и определением биотипа реакциями агглютинации (рис. 18).

Рисунок 18. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителя бруцеллеза

Серологические исследования. Реакция агглютинации (реакция Райта) — один из основных методов диагностики бруцеллеза. Динамика реакции может быть различной, для нее характерно колебание титров, в течение суток положительная реакция (с первого дня заболевания); наиболее высокие титры отмечают через 1-2 месяца. Для получения адекватных результатов необходимо использовать негемолизированную сыворотку и Аг, приготовленный из S-форм бруцелл (применять Аг диссоциированных форм нельзя), в эндемичных очагах вызванных Brucella melitensis, рекомендуют применять гомологичный Аг (V доклад Комитета экспертов ВОЗ, 1970). Следует помнить, что для реакции Ранта характерны проагглютинационные зоны, или прозоны (отсутствие агглютинации в первых разведениях и четкое ее проявление в более высоких разведениях сыворотки). Часто применяют микрометод реакции агглютинации на стекле (реакция Хеддльсона).

В острой фазе заболевания диагностическую ценность имеет иммуноферментный метод, выявляющий IgM в сыворотке больного

Для диагностики, особенно при отрицательных результатах бактериологических и серологических исследований, используют аллергические кожные пробы (проба Бюрне), обычно положительные у 70-85% пациентов к концу 1 месяца заболевания. В качестве Аг применяют бруцеллин (мелитин, абортин) — протеиновый экстракт культуры бруцелл. Пробу также применяют для проведения эпидемиологических обследований (бывает положительной после вакцинации).

Для выявления возбудителя в молоке широко применяется кольцевая проба Банга.