Среда с тиоцианатом и налидиксовой кислотой (PTN).

Питательный бульон	1000,0 мл
Тиоцианат калия	37,5 г
Налидиксовая кислота	40,0 мкг/мл

Питательный бульон, содержащий тиоцианат калия, стерилизуют в течение 15 минут при +121°С. Затем добавляют налидиксовую кислоту.

Агар с триптофлавином и налидиксовой кислотой.

Триптозный агар «Дифко»	41,0 г
Налидиксовая кислота	0,04 г
Дистиллированная вода	1000,0 мл

Налидиксовую кислоту 0,8 г растворяют в 10 мл NaOH. Затем, добавляя дистиллированную воду, доводят до 100,0 мл. 5 мл этого раствора, содержащего налидиксовую кислоту, добавляют к основной среде для получения конечной концентрации 40 мкг/мл. После 15-минутной стерилизации при +120°С среду охлаждают до 70°C. Акрифлавин нейтральный растворяют в стерильной дистиллированной воде для получения 0,5% (вес/объем) раствора. Два миллилитра этого раствора добавляют к среде, содержащей триптозно-налидиксовую кислоту, чтобы получить конечную концентрацию в 10 мкг/мл. Среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам.

Мак Брайда листериозный агар MLA

(по прописи Lovett, 1988).

Фенилэтаноловый агар «Дифко»	35,5 г/л
Глицинангидрид	19,0 г/л
Хлористый литий	0,5 г/л
Овечья кровь	5 %

 

Модифицированный листериозный агар Мак Брайда

(по прописи Lovett, 1988)

Среда МLА, но вместо овечьей крови добавляют 0,2% циклогексамида.

Селективный агар Мак Брайда

(по прописи Schidt et. al., 1988)

Казеин пептон с триптическими добавками	15,0 г/л
Пептон соевой муки	5,0 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
Фенилэтиловый спирт	2,5 г/л
Глицин	10,0 г/л
Хлористый литий	0,5 г/п
Агар	15,0 г/л
Дистиллированная вода	1000,0 мл
рН – 7,3

 

Обогащенная среда для выделения листерий

(по прописи Lee, McClain, 1986).

В питательную среду добавляют:

Протеаза пептона	5 г/л
Триптон	5 г/л
Порошок «Лаб-Лемко»	5 г/л
Экстракт дрожжей	5 г/л
Na2HPO4	12 г/л
NaCl	20 г/л
КН2РО4	2,35 г/л
Эскулин	1 г/л
Налидиксовая кислота	20 мкг/л
Акрифлавин	20 мкг/л

 

Агаровая среда для выделения листерий

(по прописи Rodriquez et. al.).

Пептон	3,0 г/л
Неопептон	3,0 г/л
Протеаза пептона	3,0 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
Эскулин	1,0 г/л
Na2HPO4 · 2Н2О	12,0 г/л
Аммоний-железо сульфат	1,0 г/л
Акрифлавин	0,012 г/л
Налидиксовая кислота	0,050 г/л
Агар	15,0 г/л

 

Среда для выделения листерий (LPM)

Фенилэтаноловый агар «Дифко»	35,5 г/л
Глицин ангидрид	10,0 г/л
Хлористый литий	5,0 г/л
Моксалат	20 мкг/л

 

Селективная среда FDA

(по прописи Schidt et. al., 1988).

Триптический перевар (BBL)	30,0 г/л
Экстракт дрожжей	6,0 г/л
Акрифлавин-HCl	16,0 мг/л
Налидиксовая кислота	40,0 мг/л
Циклогексамид	50,0 мг/л

 

Листериозная селективная среда FDA/IDF-FIL

(по прописи Merck).

Казеиновый пептон	17,0 г/л
Пептон Sojmeal	3,0 г/л
D^+ глюкоза	2,5 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
КН2РО4	2,5 г/л
Дрожжевой экстракт	6,0 г/л
РН – 7,3

 

Среда LEB

Триптикасоевый бульон	1000,0 мл
Экстракт дрожжей	6,0 г/л
К2НРО4	2,5 г/л

Автоклавировать 15 минут при 121°C. Перед применением добавить (после стерилизации фильтрацией) в объеме 0,5% раствор

Акрифлавина-HCl	3,0 мл/л
Налидиксовой кислоты	8,0 мл/л
Раствор 1% циклогексамида в этаноле 40%	5,0 мл/л

Селективно-обогащенная среда для листерий

(по прописи Rodriquez et. al., 1985).

Пептон	5,0 г/л
Неопептон	5,0 г/л
Порошок «Лаб-Лемко»	10,0 г/л
Рамноза	2,0 г/л
Хлористый натрий	50,0 г/л
Na2HPO4 · 2H2O	53,22 г/л
КН2РО4	1,35 г/л
Налидиксовая кислота	0,05 г/л
Трипановый голубой	0,08 г/л

 

Селективная среда PAL CAM

(по прописи Merck).

Пептон	23,0 г/л
Крахмал	1,0 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
Агар-агар	13,0 г/л
Эскулин	0,8 г/л
Аммоний железо (III) сульфат	0,5 г/л
D-маннит	10,0 г/л
Феноловый красный	0,08 г/л
Глюкоза	0,5 г/л
Хлористый литий	15,0 г/л
рН – 7,0

 

Селективная среда для выделения листерий (PAL CAM)

(по прописи Netten et. al., 1989).

Представляет собой Columbia-агар (кровяной агар) с содержанием:

Глюкозы	0,05%
Полимиксина В	0,001%
Акрифлавина	0,0005%
Хлорида лития	1,5%
Цефтазидима	0,002%
Эскулина	0,08%
Аммоний железо (III) сульфат	0,05%
Маннита	1,0%
Фенолового красного	0,008%

(колонии серо-зеленые с черным, с впалым центром и черным ободком на вишнево-красном фоне среды).

Селективная среда для листерий

(по прописи Lachica, 1990).

Седечно-мозговой агар «Дифко», содержащий:

Хлористого лития	0,5%
Глицина	1,0%
Цефтазима	50,0 мкг/мл

(колонии с синеватым оттенком)

Селективная среда для листерий

(по прописи Leighton, 1979).

Триптознофосфатный бульон с

Ацетатом таллия	200,0 мкг/л
Налидиксовой кислоты	50,0 мкг/л

 

Селективная среда CNPA

(по прописи Jay, 1987).

Триптон	20,0 г
Хлористый натрий	10,0 г
Д-глюкоза	5,0 г
Дрожжевой экстракт	2,0 г
ТРИС	7,0 г
Агар	15,0 г
1,2-циклогексанедион	3,0 г
Налидиксовая кислота	45,0 мкг
Фенилэтиловый спирт	1,0 мл
Дистиллированная вода	1000,0 мл

рН – 8,2

Селективная среда

(по прописи Lucas et. al., 1990).

Агар с переваром бычьего сердца и мозга «Дифко»	52,0 г/л
Хлорид лития	15,0 г/л
Эскулин	0,75 г/л
Акрифлавин гидрохлорид	0,005 г/л
Дистиллированная вода	1000,0 мл

Смесь автоклавируют при +121°C 15 минут, охлаждают до 45°C и добавляют:

Стерильный цитрат железа аммония	70 мл 0,7%
Теллурит калия	10 мл 2,0%
Полимиксин В	10 мл 0,1%
Натриевая соль нефтазидимапентагидрата	10 мл 0,2%

На разлитую в чашки Петри среду проводят посевы, инкубируют при +37°C, затем чашки с колониями охлаждают до +4°C и добавляют 8 мл расплавленного и охлажденного до +45°C агара верхнего слоя, в состав которого входят:

Сухой бульон из перевара бычьего сердца и мозга «Дифко»	37,0 г/л
Агар	3,0 г/л
Хлористый натрий	8,0 г/л
Суспензия эритроцитов барана	50,0 мл/л

Через 14 часов инкубации при 30°C появляется зона гемолиза.

Листериозная селективная среда FEINDT

(по прописи Merck).

Триптоза	20,0 г/л
D-глюкоза	1,0 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
Витамин В1	0,005 г/л
Трипафлавин	0,01 г/л
Налидиксовая кислота	0,04 г/л
Агар-агар	13,0 г/л

рН - 7,4

Селективная среда для выделения листерий Oxford

(по прописи Merck)

Пептон	23,0 г/л
Крахмал	1,0 г/л
Хлористый натрий	5,0 г/л
Агар-агар	13,0 г/л
Эскулин	1,0 г/л
Аммонии железо (III) сульфат	0,5 г/л
Хлористый литий	15,0 г/л

рН – 7,0

 

Каждая из указанных питательных сред не лишена недостатков. Часть этих методов, способов и питательных сред дает отличные результаты в некоторых лабораториях, но не во всех. Это можно объяснить различным качеством применяемых химикатов.

Бактерии рода Erysipelothrix

Род Erysipelothrix — прямые или слегка изогнутые палочковидные бактерии (0,8-2,5´0,2-0,4 мкм), имеющие тенденцию образовывать длинные нити длиной до 60 и более мкм; послед­ние могут утолщаться и содержать гранулы. Неподвижны, спор и капсул не образу­ют; хемоорганотрофы; грамположительны, но в старых культурах могут изменять отношение к окраске по Граму. Факультативные анаэробы; каталазоотрицатель­ны; ферментативная активность слабая — ферментируют глюкозу и некоторые угле­воды с образованием кислоты; на кровяных средах дают a-гемолиз. Широко распростране­ны в природе, паразиты рыб и теплокровных.

Типовой вид — Erysipelothrix rhusiopathiae; Такахаши с соавт. (Takahashi et. аl., 1987) описали второй вид — Е. tonsillarum, отличающийся от первого лишь степенью гомологии ДНК. Все штаммы данного вида принадлежат к одному серовару и маловирулентны для свиней.

Erysipelothrix rhusiopathiae открыли Пастер и Тюилье (1882), Леффлер (1886) как возбудитель рожи свиней и Розенбах (1884) как возбудитель ползучей эритемы Бейкера или эризипелоида. Идентичность обоих микроорганизмов установил Вилявин (1955).

Распространение

Erysipelothrix rhusiopathiae устойчив во внешней среде и распростра­нен повсеместно; на разлагающихся органических субстратах может сохраняться месяца­ми, а в трупах — до года. При высушивании погибает в течение 3 недель, на прямом солнеч­ном свету — за 12 суток; кипячение убивает его в течение 3-5 минут. Неустойчив к действию дезинфектантов. Резервуар — грызуны, насекомоядные и домашние животные, включая птиц (куры, утки, индейки, голуби и др.). Эризипелоид животных — природно-очаговая нетрансмиссивная инфекция; возбудитель может сапрофитировать на различных сортах мяса и рыбы, человек заражается контактным путем, а заболеваемость носит выраженный профессиональный или бытовой характер. В группу риска относят рыбаков, лесорубов, работников боен, ветеринаров и т.д.