Культивирование личинок гельминтов

Культивирование личинок гельминтов заключается в со­здании для их яиц таких условий, при которых они могли бы развиться до формирования инвазионных стадий личинок. По особенностям структуры инвазионных личинок определяют родовую, а иногда и видовую их принадлежность.

Культивирование стронгилят жвачных по методу А.М. Петрова и В.Г. Гагарина состоит в том, что в бактериологические чашки или в стаканчики кладут по 10 г свежих фекалий животных, увлажняют и помещают в термостат при температуре 27-30°С на 7-10 дней. Ежеднев­но фекалии перемешивают (с целью аэрации) и при необхо­димости увлажняют. После указанного срока пробы фекалий помещают в аппарат Бермана и из них выделяют личинок стронгилят. Помещают личинок на предметное стекло и микроскопируют с целью дифференциальной диагностики.

Для лучшей аэрации фекалий разработана методика культивирования личинок стронгилят в фекалиях с добавле­нием в них прокаленных древесных опилок. Соотношение фе­калий к опилкам составляет 3:1-5:1. Остальной режим куль­тивирования личинок стронгилят сохраняется таким же, как описано выше. Определение личинок до рода проводится по П.А.Полякову.

Культивирование личинок стронгилят лошадей по П.А. Величкину. В стакан емкостью 100 мл помещают 50 г свежих фекалий лошадей и ставят их в термостат при темпе­ратуре 25-27°С. Стаканы сверху обвязывают чистым бинтом, марлей или плотной бумагой, в которой делают небольшое от­верстие для аэрации. Срок культивирования личинок 6-7 дней. При культивировании личинок при комнатной темпера­туре (20-22°С) они достигают третьей стадии через 9-10 дней. При температуре ниже 8°С развитие их не происходит. При необходимости фекалии увлажняют и периодически пе­ремешивают.

Для выделения личинок стронгилят лошадей П.А. Величкин рекомендует после окончания срока культивирования пробу фекалий завернуть в марлю и поместить в стакан емко­стью 200 мл с теплой (35-36°С) водой. Для предупреждения соприкосновения пробы фекалий с дном стакана в него поме­щают предметное стекло или металлическую сетку. Спустя 2-3 ч пробу удаляют, верхний слой жидкости сливают, а оса­док помещают в бактериологические чашки и микроскопируют. Для лучшей дифференциации личинок их необходимо обездвижить, для чего к осадку в чашку добавляют 8-10 ка­пель раствора Люголя. Личинки стронгилят лошадей покры­ты гофрированным чехлом, имеют длинный хвостовой конец. Личинки свободноживущих нематод гофрированного чехлика лишены и у них короткие хвостовые концы. Родовую при­надлежность стронгилят лошадей определяют по внутренней структуре личинок. Определение родов и видов личинок стронгилят лошадей проводят по А.М.Петрову и В.Н.Гагарину.

Культивирование личинок стронгилоидесов по Т.И. Попо­вой проводят в обычных стеклянных стаканчиках, в которые помещают 50-100 г фекалий и выдерживают в течение 1-2 дней при температуре 20-23°С. Вышедшие из яиц личинки стронгилоидесов мигрируют на стенку стакана, образуя серо-белые скоп­ления, которые могут сохраняться до 1 мес. Личинки стронги­лоидесов из этих колоний можно использовать для эксперимен­тального заражения животных.

Посмертная диагностика гельминтозов

Полное гельминтологическое вскрытие животных по К.И. Скрябину проводят в тех случаях, когда необходимо иметь полную картину заражения гельминтами всех органов и тканей животных. Для этого перед вскрытием трупа тща­тельно осматривают его кожные покровы и слизистые оболоч­ки на наличие гельминтов. По правилам обычной секционной техники от трупа отделяют все органы, не нарушая их связи друг с другом. Всю кровь из серозных полостей собирают в кюветы для последующего промывания и исследования. Се­розные покровы полостей тщательно осматривают. Затем из­влекают спинной и головной мозг, вскрывают конъюнктивальные мешки, синовиальные и носовые полости, лобные пазухи и исследуют их содержимое. Извлеченные органы помещают в отдельную посуду (ведра, кастрюли, кюветы). Изучение их ведется мокрым или сухим способом.

При мокром способе проводят многократное промывание водой или изотоническим раствором натрия хлорида содер­жимого полостей различных органов с целью выделения гель­минтов; исследование содержимого различных отделов желу­дочно-кишечного тракта методом последовательных промы­ваний и просмотр отмытого материала (матриксов) поочеред­но на белом и черном фоне; компрессионное исследование слизистых оболочек всех органов; размозжение тканей раз­личных органов между стеклянными пластинками; размозже­ние тканей отдельных органов с последующим последователь­ным промыванием их и изучением отмытого матрикса с помо­щью лупы.

Сухой способ – это раздавливание органов между стек­лами до прозрачности и просмотр их под лупой без вскрытия и промывания. Его используют при изучении мелких живот­ных (моллюсков, членистоногих и др.).

Полное гельминтологическое вскрытие очень трудоемко, требует значительных затрат времени и поэтому применяется главным образом при научных исследованиях.

Неполное гельминтологическое вскрытие часто прово­дят при патологоанатомическом вскрытии трупов животных. При этом из органов и тканей трупа извлекают заметных не­вооруженным глазом гельминтов или крупные личинки, опре­деляют и подсчитывают их количество. При паразитировании мелких гельминтов или личинок этот метод малоэффективен. Интенсивность поражения крупными гельминтами неполным гельминтологическим вскрытием учитывают лишь приблизительно, отмечая слабое поражение (+), среднее (++) и силь­ное (+++).

Метод порционных гельминтологических вскрытий. Вви­ду громоздкости метода полных гельминтологических вскры­тий Р.С. Шульцем предложено матриксы из органов исследо­вать не полностью, а лишь одну четвертую их часть. Можно брать одну пятую, одну десятую часть и т.д. Для этого приго­товленный обычным способом матрикс помещают в измери­тельный цилиндр, тщательно взбалтывают и соответствующую часть отливают в другую посуду. Эту часть исследуют обыч­ными способами, т.е. матрикс просматривают на черном и белом фоне, а также под лупой. Всех обнаруженных парази­тов извлекают, подсчитывают, их количество умножают на число частей матрикса (на 4, 5, 10 и т. д.).

Особенности гельминтологического вскрытия птиц. У птиц ощипывают перья и тщательно исследуют поверхность кожи. После снятия кожи и осмотра подкожной клетчатки труп кладут на спину так, чтобы видны были все внутреннос­ти, и исследуют отдельные органы. Способом соскоба иссле­дуют слизистую фабрициевой сумки, зоба, железистого желуд­ка, яйцевода. Мышечный желудок вскрывают ножницами вдоль одной из его боковых суженных сторон. Двумя пальцами ле­вой руки захватывают край разрезанной кутикулы и медленно отделяют ее от собственно слизистой оболочки. Внимательно осматривают обнаженную слизистую оболочку и внутреннюю поверхность отделенной кутикулы. Почки исследуют комп­рессионным методом.

 

Консервирование гельминтов

Гельминтов, собранных для длительного хранения, необ­ходимо консервировать.

Трематод и цестод вначале кладут в проточную воду и держат до их гибели. Затем их осторожно прессуют в 70%-ном спирте 30-40 мин в бактериологической чашке между предметными стеклами. Хранят трематод и цестод в 70%-ном этиловом спирте.

Нематод обычно промывают в воде. Филярий и легочных нематод промывают только в изотоническом растворе натрия хлори­да. Хранят нематод в жидкости Барбагалло (3%-ный раствор формалина в изотоническом растворе хлорида на­трия).

Акантоцефал (скребней), добытых при вскрытии, сначала помещают в воду, затем путем слабого прессования их пере­дних концов выдавливают хоботок, чтобы зафиксировать его в вытянутом положении. Фиксируют акантоцефал в 70%-ном этиловом спирте.

Ларвоцист цестод (цистицерков, ценурусов, эхинококков, альвеококков) фиксируют жидкостью Барбагалло. Органы, пораженные гельминтами, фиксируют в 10%-ном растворе формалина.

Во всех случаях количество фиксирующей жидкости дол­жно в 20 раз превышать объем фиксируемого материала.