Проведение измерений оптической плотности на КФК-2.

1 Устанавливают ручку чувствительности 5 в положение минимальной чувствительности - "I", а ручку 6 - "Установка 100 грубо" - в крайнее левое и положение, соответствующее минимальной чувствительности, что пре­дохраняет усилитель прибора и микроамперметр I от перегрузки и возмож­ной их порчи при включении прибора и переключении светофильтров (рис. 10)

2 Прибор включают в электрическую сеть на 15-20 минут до начала измерений при помощи вилки электрошнура и тумблера "сеть", располо­женной на задней панели прибора. Во время его прогрева кюветное от­деление должно быть открыто.

3 Ручкой 3 устанавливают необходимый светофильтр /красный/.

4 После прогревания прибора в световой пучок помещают кювету с растворителем, по отношению к которому проводятся измерения, закрывают крышку кюветной камеры 8.

5 Ручками "Чувствительность" 5, '"Установка 100 грубо" 6 и "Точно" б' устанавливают отсчёт по шкале оптической плотности "О», в которую оциф­рована шкала микроамперметра I.

6 Поворотом ручки 4 в световой пучок вводят кювету с исследуемым раствором соли меди.

7 По нижней шкале микроамперметра берут отсчет оптической плотнос­ти исследуемого раствора. Измерение проводят 2-3 раза и находят сред­нее значение.

 

 

Примечание.

При необходимости можно провести определение коэффи­циента пропускания в % по верхней шкале.

 

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Фотоколориметрическое определение содержания меди (II) в исследуемом растворе

 

Фотометрические определения меди выполняют аммиачным, ферроцианидным и другими методами. Аммиачный метод основан на образовании ионов меди/П/ с аммиаком комплексных ионов окрашенных в интенсивно-синий цвет с фиолетовым оттенком. Окраска раствора комплекс­ного соединения достаточно устойчива. Определение удобно выполнять ме­тодом градуировочного графика.

 

Алгоритм определения

Приготовление стандартного раствора соли меди (II).

Навеску массой 3,927 г химически чистого пентагидрата сульфата меди (II) переносят в мерную колбу на I л, растворяют, приливают 5 ил раствора концентриро­ванной серной кислоты /р = 1,84 г/мл / и доводят водой до метки. I мл этого раствора содержится I мг ионов меди (II).

Построение градуировочного графика.

В мерные колбы на 100 мл поме­щают, используя градуированную пипетку на 10 мл, последовательно I; 3; 5; 7; 9; 10 мл стандартного раствора сульфата меди. В каждую колбу до­бавляют по 25 мл раствора с массовой долей аммиака 5% и доводят объем раствора в мерных колбах до метки очищенной водой, тщательно перемешивают. Концентрации ионов меди (II) в колбах составляют: 0,01; 0,03; 0,05; 0,07; 0,09; 0,1 мг/мл.

Измеряют оптическую плотность всех растворов с красным светофиль­тром, используя кюветы с длиной 30 мм. По полученным данным строят градуировочный график.

Определение содержания меди/П/ в исследуемом растворе.

Исследуемый раствор, содержащий меди (II), помещают в мерную колбу на 100 мл, прибавляют к нему 25 мл раствора с массовой долей аммиака 5% и доводят объем раствора в мерной колбе до метки водой, тщательно пе­ремешивают.

Наливают раствор в кювету с длиной 30 мм и измеряют оптическую плотность при тех же условиях, при каких был получен градуировочный график.

Зная оптическую плотность находят по градуировочному графику кон­центрацию ионов меди (II) в мг на I мл раствора.

Вычисление результатов анализа.

I.Вычисление содержания меди (II) в исследуемом растворе проводится по формуле:

т/С u²⁺/ = С/Си²⁺/*V/p-ра/, мг

 

Вопросы для самоконтроля

1 Что называется, фотоэлектроколориметрией?

2 Что называется, фотоэффектом?

3 Что называется, фотоэлементом?

4 Каков принцип действия фотоэлектроколориметра?

5 Какова связь между интенсивностью светового потока и си­лой возникающего в фотоэлементе тока?

6 На каком световом явлении основана фотоэлектроколориметрия?

7 Какова связь между концентрацией веществ в исследуемом растворе, взвеси и силой тока?

8 Что регистрирует микроамперметр?

9 Какими светофильтрами снабжен прибор и каково их назна­чение?

10 Можно ли начинать определение сразу же после включения прибора?

11 В чем заключается подготовка прибора к работе?

12 Чем руководствуются при выборе кювет?

13 Как определить концентрацию вещества в растворе по пока­зателю экстинкции?

ЗАДАНИЕ:

Начертите калибровочную кривую по следующим данным: при­готовлены растворы гемоглобина: 60, 90, 120, 180 г/л. Растворы профотометрированы и получены показатели экстинкции соответ­ственно 0,005; 0,020; 0,050 и 0,065. Определите количество гемогло­бина по построенному графику при показателе экстинкции 0,045.

 

 

Перечень рекомендуемых учебных изданий, дополнительной литературы:

Основные источники:

1. Камышников В.С. – Техника лабораторных работ в медицинской практике. 3-е издание переработанное и дополненное. М.: «МеЕДпресс-информ», 2013

2. Пустовалова Л.М. /Л.М. Пустовалова, И.Е.Никанорова/ - Техника лабораторных работ. Ростов н/Д.: «Феникс», 2004 - 288с.

3. Санитарно-эпидемиологические правила СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности и возбудителями паразитарных болезней» от 28.01.08.

4. ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности».

5. ГОСТ РИСО 15189-2006 «Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности».

6. Методические рекомендации работников, выполняющих работы, связанные с риском возникновения инфекционных заболеваний» от 16.08.07.

7. Санитарно-эпидемиологические правила СП 3.1.2485-09 «Профилактика внутри больничных инфекций в стационарах (отделениях) хирургического профиля лечебных организаций» от 13.02.09.

8. Временные рекомендации (правила) по охране труда при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-пидемиологических учреждений системы Минздрава России от 11.04.02. - М, 2002г.

Интернет-ресурсы: http://kdl.inf.ua/

Дополнительные источники:

1. Кишкун А.А. - Клиническая лабораторная диагностика: учебное пособие для медицинских сестер. - М: ГЭОТАР - Медиа, 2008 - 720с.

2. Пустовалова Л.М. /Л.М. Пустовалова, И.Е.Никанорова/ - Общая химия. Ростов н/Д.: «Феникс», 2005 - 478с.

3. Руководство по лабораторным методам диагностики. - М: ГЭОТАР — Медиа, 2007 - 800с.

4. Чернявская Е.Г. Микроскопия: Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов. /Е.Г.Чернявская - Омск: 2009 - 37с.

5. Чернявская Е.Г. Растворы. Приготовление растворов различной концентрации: Учебно-методическое пособие для самостоятельной работы студентов. /Е.Г.Чернявская - Омск: 2008 - 37с. MP 2.2.9.2242-07 «Гигиенические и эпидемиологические требования к условиям труда медицинских работников.