Определение глюкозы в крови (набором реактивов «Глюкоза-ФКД»)

Содержание глюкозы в крови – основной биохимический показатель состояния углеводного обмена. Нормальная концентрация глюкозы в крови – 3,5-5,5 (6,4)ммоль/л. Отклонение его от нормы происходит при ряде заболеваний.

Увеличение содержания глюкозы в крови (гипергликемия) наблюдается при сахарном диабете, остром панкреатите, панкреатических циррозах, эмоциональных стрессах, после эфирного наркоза, обильного приема углеводов с пищей, а также при повышении гормональной активности ряда желез (щитовидной, гипофиза, коркового и мозгового слоя надпочечников).

Снижение уровня глюкозы в крови (гипогликемия) встречается при поражении паренхимы печени, нарушении ферментативной активности при распаде гликогена; недостаточной функции щитовидной железы, надпочечников, гипофиза; передозировке инсулина при лечении сахарного диабета, нарушении всасывания углеводов, отравлениях фосфором, бензолом, хлороформом, при недостатке приема с пищей углеводов, после больших потерь крови.

Принцип метода. В основе метода лежит ферментативное окисление глюкозы кислородом воздуха при участии фермента глюкозооксидазы. При этой реакции образуется перекись водорода в количестве эквимолярном окисленной глюкозе. Перекись водорода в присутствии пероксидазы крови окисляет добавленный σ-толуидин, который приобретает синее окрашивание. Интенсивность возникшей окраски прямо пропорциональна концентрации глюкозы и определяется на фотоэлектроколориметре. Метод специфичен для глюкозы.

Исследуемый материал и реактивы

1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор. 5. Ферментно-хромогенная смесь (1таблетка). 6. Антикоагулянт (оксалат натрия, фторид натрия). 7. Калибратор (раствор глюкозы с концентрацией 10ммоль/л). 8. Дистиллированная вода.

 

Ход работы

А. Приготовление рабочих растворов. 1. Таблетку «ферменты-хромогены» растворить в 100 мл дистиллированной воды, тщательно перемешивая, не встряхивая (!). Допускается наличие мелких нерастворимых частиц. 2. Таблетку антикоагулянта растворить в 50 мл дистиллированной воды.

Б. Приготовления калибровочной пробы. В пробирку внести 1 часть калибратора и 9 частей раствора антикоагулянта, тщательно перемешать. Полученную калибровочную смесь использовать для анализа.

В. Определение содержания глюкозы в плазме крови. Для получения плазмы крови в центрифужную пробирку внести 0,9 мл раствора антикоагулянта, добавить 0,1 мл крови (или 0,45 мл и 0,05 мл соответственно), тщательно перемешать и центрифугировать при 1000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочную жидкость перенести в чистую пробирку и использовать для анализа.

Для проведенения анализа на КФК в пробирки внести 2,0 мл рабочего раствора и добавить по 0,2 мл надосадочной жидкости, калибровочной смеси и дистиллированной воды для кюветы с длиной оптического пути 10мм, и по 0,4 мл – для кюветы с длиной оптического пути 5мм.

При использовании FP-901 в кюветы внести 0,7 мл рабочего раствора и 0,1 мл надосадочной жидкости.

Г. Определение содержания глюкозы в сыворотке крови. При использовании КФК внести в пробирки образцы сыворотки крови и реагенты по схеме:

 

Для кювет	с длиной оптического пути 10мм	с длиной оптического пути 5мм
Реагенты	Опытная проба, мл	Калибр. проба, мл	Холостая проба, мл	Опытная проба, мл	Калибр. проба, мл	Холостая проба, мл
Рабочий раствор	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0	2,0
Сыворотка крови	0,02	–	–	0,04	–	–
Калибратор	–	0,02	–	–	0,04	–
Вода дистил.	–	–	0,02	–	–	0,04

 

Пробы тщательно перемешать и инкубировать в течение 15 мин при +37⁰С (водный термостат) или в течение 25 мин при 18-25⁰С («на столе»). Через 5-10 мин после начала инкубации пробирки с пробами интенсивно встряхнуть вручную.

После инкубации измерить величину оптической плотности опытной и калибровочной проб против холостой пробы в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10мм при длине волны 500 (490-540)нм. Окраска проб сохраняет стабильность в течение более 4-х часов после окончания инкубации.

Концентрации глюкозы в пробах провести по формуле:

где С – концентрация глюкозы, моль/л; Е_О – оптическая плотность опытной пробы, ед.опт.плот.; Е_СТ – оптическая плотность калибровочной пробы, ед.опт.плот.; 10 – концентрация глюкозы в калибраторе, моль/л.

 

Указания к оформлению лабораторной работы

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученный результат и сделайте выводы.

 

Контрольные вопросы

1. Какова нормальная концентрация глюкозы (сахара) в крови?
2. Какие углеводы могут всасываться в тонком кишечнике человека?
3. Что такое гипергликемия и гипогликемия? При каких состояниях организма наблюдаются гипер- и гипогликемия?

 

Биохимия липидов

Липиды – биологически важные органические соединения растительного и животного происхождения разнообразной химической структуры, нерастворимые в воде и растворимые в малополярных органических растворителях (эфир, спирт, хлороформ, ацетон и др.).

Липиды – важная составная часть пищевых продуктов не только вследствие высокой энергетической ценности, но также и потому, что в натуральных пищевых жирах содержатся жирорастворимые витамины и «незаменимые» жирные кислоты (полиненасыщенные), которые являются предшественниками таких биологически активных веществ как гормоны, витамины, простагландины. Липиды, наряду с белками, играют важную роль в структурной организации клеточных мембран, поэтому с ними связаны многие эффекты лекарственной терапии.

 

Лабораторная работа №17