Качественные цветные реакции на функциональные группы белков и аминокислот 


Мы поможем в написании ваших работ!



ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?

Качественные цветные реакции на функциональные группы белков и аминокислот



При взаимодействии белка с отдельными химическими веществами возникают окрашенные продукты реакции. Образование их обусловлено присутствием в молекуле белка той или иной аминокислоты, имеющей в своем составе определенную химическую группировку.

Значение качественных цветных реакций на функциональные группы белков и аминокислот в том, что они дают возможность обнаружить присутствие белка в биологических жидкостях, растворах, лекарственных препаратах и идентифицировать индивидуальные аминокислоты. Эти реакции применяют как для качественного, так и для количественного определения белка и содержащихся в нем аминокислот.

 

v Биуретовая реакция на пептидную связь (Пиотровского).

Биуретовая реакция открывает пепетидную связь в белке.

Её способны давать вещества, которые содержат не менее двух пептидных связей. Положительную биуретовую реакцию отдельные аминокислоты не дают, за исключением гистидина (His), серина (Ser), треонина (The) и аспарагина (Asn), с которыми биуретовая реакция получается при условии больших концентраций их в растворе. При добавлении сернокислой меди к сильнощелочному раствору белка или полипептида образуются соединения меди с пепетидной группировкой, окрашенные в красно-фиолетовый или сине-фиолетовый цвет в зависимости от длины полипептидной цепи. Раствор белка даёт сине-фиолетовое окрашивание, а продукты неполного гидролиза (пептоны) – розовое или красное окрашивание.

Принцип метода. В сильно щелочной среде пептидные группы полипептидных цепей переходят в енольную форму, которая, взаимодействуя с ионами Cu2+, образует окрашенный (фиолетового цвета) биуретовый комплекс.

При этом енольная форма полипептида, образованная в сильнощелочной среде, дает отрицательный заряд, и ее кислород, взаимодействуя с медью, образует ковалентную связь, а медь, взаимодействуя с атомами азота, образует координационные связи.

 

Енольная форма пептидной связи ()

 

 

Комплекс фиолетового цвета

Исследуемый материал и реактивы

1. Раствор яичного белка (1%). 2. Гидроксид натрия(10%). 3. Сернокислая медь (1%).

Ход работы

К 5 каплям раствора белка прибавляют 3 капли 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора сернокислой меди и перемешивают. Содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовый цвет.

Нельзя добавлять избыток сернокислой меди, так как синий осадок гидрата окиси меди маскирует характерное фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.

v Нингидриновая реакция.

Нингидриновая реакция характерна для аминогрупп, находящихся в альфа-положении. Растворы белка, альфа-аминокислот и пептидов при нагревании с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание.

Принцип метода. В этой реакции альфа-аминокислоты и пептиды окисляются нингидрином и подвергаются окислительному дезаминированию и декарбоксилированию с образованием аммиака, альдегида и СО2. Нингидрин восстанавливается и связывается со второй молекулой нингидрина посредством молекулы аммиака, образуя продукты конденсации, окрашенные в синий, фиолетовый, красный, а в случае пролина – в желтый цвет.

Нингидриновая реакция используется для количественного определения альфа-аминокислот в аминокислотных анализаторах, а также широко используется в хроматографическом анализе и для колориметрического количественного определения аминокислот.

 

1.

нингидрин аминокислота альдегид нингидрин

окисленный восстановленный

(гидриндантин (бесцветный))

 

2.

нингидрин нингидрин продукт конденсации

окисленный восстановленный пурпур Роумэна (сине-фиолетовый)

 



Поделиться:


Последнее изменение этой страницы: 2017-01-24; просмотров: 1600; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы!

infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 34.227.191.136 (0.014 с.)