Качественные реакции на белок в моче

Белок в нормальной моче находиться в виде следов, которые не открываются обычными реакциями, применяемыми в клинической лаборатории. Появление белка в моче называется протеинурией, которая может быть двух видов: «почечная» и «внепочечная». При «почечной» или истинной протеинурии белки сыворотки крови попадают в мочу через почки (при нефрите, т.е. при воспалении клубочков почек, когда увеличивается их проницаемость; в случае сердечной декомпенсации; при некоторых формах повышенного артериального давления; иногда при беременности). «Внепочечная» или ложная протеинурия наблюдается при попадании в мочу слизи, крови, гноя, но не из почек, а из мочевыводящих путей. Белок появляется в моче при нефрите (т.е. воспалении сосудистых клубочков почек, когда увеличивается их проницаемость), а в случае сердечной декомпенсации, при некоторых формах повышенного кровяного давления и иногда при беременности. Моча, содержащая белок, становится мутной.

Для обнаружения белка в моче обычно применяют три реакции на его осаждение: 1. Осаждение кипячением. 2. Осаждение концентрированной азотной кислотой. 3. Осаждение сульфосалициловой кислотой (самая чувствительная).

 

v Проба кипячением.

Принцип метода. При кипячении нейтральных или слабокислых растворов белка, последний денатурирует и выпадает в осадок. При денатурации белка нарушаются четвертичная, третичная и даже вторичная структуры, т.е. отмечается разрыв цементирующих белковую молекулу вторичных связей (водородных, дисульфидных, электростатических, эфирных, вандервальсовых и др.), что ведет к изменению пространственной структуры и уменьшению гидрофильности белковой молекулы.

 

Исследуемый материал и реактивы

1. Патологическая моча. 2. Раствор уксусной кислоты (1%). 3. Раствор уксусной кислоты (10%). 4. Лакмусовая бумага.

 

Ход работы

Предварительно проверяют мочу на лакмус. Если моча имеет кислую реакцию, то её (2-3 мл) сразу кипятят в пробирке, а если моча имеет щелочную реакцию, то её сначала очень слабо подкисляют на лакмус добавлением по каплям 1% уксусной кислоты. В присутствии белка при кипячении образуется муть или осадок, не растворяющийся при повторном кипячении после добавления к жидкости 3-5 капель 10% уксусной кислоты. Этим осадок свернувшихся белков отличается от осадков фосфатов и карбонатов кальция и магния, которые могут выпасть при кипячении в слабокислой среде, но растворяются при нагревании в более кислом растворе уксусной кислоты.

 

v Осаждение белка концентрированной азотной кислотой (проба Геллера).

Принцип метода. Концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию, что связано с дегидратацией белковых частиц, их нейтрализацией и образованием комплексных солей белка с кислотами Ортофосфорная кислота осадка не дает. В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший осадок белка растворяется.

 

Исследуемый материал и реактивы

1. Патологическая моча. 2. Азотная кислота (концентрированная).

 

Ход работы

В пробирку наливают около 1 мл концентрированной азотной кислоты и осторожно из пипетки по стенке пробирки наливают мочу. В присутствии белка на границе раздела двух жидкостей образуется белый аморфный слой или муть, так называемое белковое кольцо. При отсутствии белка в моче на границе обоих жидкостей появляется цветное кольцо, обусловленное изменением пигментов мочи под действием азотной кислоты.

 

v Осаждение белка сульфосалициловой кислотой.

Принцип метода. Органические кислоты вызывают необратимое осаждение белков обусловленное нейтрализацией заряда белка, что приводит к разрушению пространственной структуры, денатурации и осаждению белка.