Определение производных 2,4-д

Навеску пробы (5г) измельчают в фарфоровой ступке с чистым песком, заливают 0,5%-ным раствором едкого натра (20мл) и в течение 30мин периодически перемешивают. Содер­жимое ступки переносят в химический стакан, куда вно­сят 10мл насыщенного раствора фосфорно-вольфрамо-вой (фосфорно-молибденовой) кислоты и 10мл концен­трированной соляной кислоты. После смешивания выдерживают 15 мин и фильтруют. Осадок промывают 10%-ным раствором соляной кислоты.

Фильтрат переносят в делительную воронку и зали­вают 50мл хлороформа (эфира). Содержимое осторож­но перемешивают в течение 2—3 мин и хлороформенную фазу сливают в химический стакан. Экстрагирование хлороформом повторяют.

Экстракты объединяют, выпаривают в водяной бане до сухого остатка. К осадку добавляют 2мл спирт-эфира, тщательно перемешивают и упаривают до 0,2мл. Этот объем наносят на хроматографическую пластинку.

Подвижный растворитель — циклогексан, бензол, ледяная уксусная кислота (10:2:3). Проявляющий реа­гент — 0,1 н. раствор нитрата серебра в 3 н. растворе азотной кислоты.

После подсушивания проявителя пластинку облуча­ют 10—15 мин ультрафиолетовым светом. При наличии гербицидов группы 2,4-Д появляются темно-серые пят­на, площадь которых и Rf сравнивают со свидетелем.

 

КЛАССИФИКАЦИЯ МИКОТОКСИНОВ РАЗНЫХ ГРУПП

 

Вопросы для самостоятельной подготовки

1. Микотоксикозы и их классификация

2. Аспергиллотоксикозы и пенициллотоксикозы.

3. Фузариотоксикозы.

4. Микотоксикозы различных групп.

 

Микотоксикозы и их классификация

Микотоксикозы - это заболевания сельскохозяйственных животных, возникающие в результате поступления в организм ядов микозного происхождения (микотоксины). При этом сами грибы, не паразитируют в организме животных.

Микотоксины являются вторичными метаболитами микроскопических грибов и образуются из первичных метаболитов в процессе энзиматических реакций конденсации, окисления и восстановления, алкилирования и галогенизации.

Микотоксикозы имеют характерные особенности, отличающие их от других заболеваний: внезапность проявления, массовость, короткий инкубационный период, отсутствие контагиозности, затухание болезни при смене кормов.

Грибы, которые вызывают микотоксикозы делятся на 2 большие группы:

1. Грибы-паразиты. Поражают живые растения, чаще злаки в период вегетации.

2. Грибы-сапрофиты. Размножаются на мертвых растениях и кормах.

Для развития грибов необходимы определенные условия:

1. Влажность корма. Оптимальная влажность для развития грибов составляет _________15 – 16%__________________.

При более высокой влажности _____25%__________________ развитие грибов замедляется.

2. Относительная влажность воздуха ____15-16%__________________ способствует развитию грибов, а ______25%__________________ - замедлению.

3. Температура. Оптимальной для развития грибов является температура ___25-65⁰С_____________________

4. Вид корма. На живых растениях развитие замедляется. После их переработки активность повышается

Одним из важнейших моментов при исследовании микотоксикозов яляется выделение и изучение микотоксинов. На данное время выделены около 2000 видов различных токсинов, 47 из них являются высокотоксичными, 45 обладают канцерогенным и мутагенным действием.

Микотоксины, устойчивые к высоким температурам, не разрушаются при обработке паром и сушке, могут длительное время оставаться в корме после гибели образующих их грибов и, как правило, внешний вид корма не всегда является критерием безопасности.

Животные и человек на протяжении всей жизни чувствительны к микотоксинам, так как иммунитет против них не вырабатывается.

О.А. Малинин разделил микотоксикозы на 3 группы:

1. Аспергиллотоксикозы и пенициллотоксикозы:

1.1. Афлатоксикоз

1.2. Охратоксикоз

1.3. Патулинотоксикоз

1.4. Стеригматоцистин

1.5. Микотоксическая нефропатия свиней

1.6. Пеницилловая кислота

1.7. Цитринин (ноталин)

1.8. Треморгентоксикоз

1.9. Рубратоксикоз

2. Фузариотоксикозы:

2.1. Трихоценовые микотоксины

2.2. Т-2 токсикоз

2.3. Зеараленон

3. Микотоксикозы различных групп:

3.1. Стахиботриотоксикоз

3.2. Клавицепстоксикозы (эрготизм, клавицепстоксикоз)

3.3. Головневые грибы

3.4. Дендродохиотоксикоз

3.5. Пикомикотоксикоз

3.6. Диплодиоз

3.7. Миротециотоксикоз

3.8. Слафраминотоксикоз

3.9. Люпиноз

3.10. Фоматоксикоз

3.11. Мукортоксикоз

3.12. Ризопустоксикоз.

 

Аспергиллотоксикозы и пенициллотоксикозы.

Две эти группы микотоксикозов трудно отделить друг от друга, т. к. многие микроскопические грибы из обеих групп могут продуцировать одни и те же виды микотоксинов. СредиродаAspergillus доминируютвиды: Aspergillus flavus, Aspergillus candidus, Aspergillus fumigatus, Aspergillus nidulans.

СредиродаPenicillium наиболеечастовстречаются: Penicillium cyclopium, Penicillium expansum, Penicillium urticae, Penicillium oxalicum, Penicillium crustosum, Penicillium nigricans, Penicil­lium commune, Penicillium paxiles.

Афлатоксикоз

Заболевание животных большинства видов и человека, вызываемое афлатоксином

Афлатоксины - вторичные метаболиты микроскопических грибов из родов Aspergillus и Penicillium.

Токсикодинамика

Наиболее чувствительными к афлатоксину является утята, индюшата, поросята 3-12 недель, беременные свиноматки и телята 1-6 месяцев. Цыплята более устойчивые.

Основной мишенью афлатоксина является печень. В печени при афлатоксикозе обнаруживаются множественные некротические очаги, жировая и белковая дистрофия гепатоцитов. Характерна быстро прогрессирующая пролиферация эпителия желчных протоков.

Токсическое действие афлатоксинов связывают, главным образом, с воздействием их на клетки печени, нарушением синтеза белка и нуклеиновых кислот. При этом постепенно развивается жировая и белковая дистрофия, переходящая в некроз гепатоцитов. Афлатоксины обладают канцерогенным, тератогенным и мутагенным действием.

Афлатоксины являются сильнымииммунодепрессантами, поражая в большей степени клеточный иммунитет. Особо высокочувствительной к афлатоксину является Т- система клеточного иммунитета. Могут они воздействовать и на систему образования интерферона.

При хроническом отравлении образуются злокачественные опухоли печени. Признано, что афлатоксин В, является сильнейшим канцерогеном

Клинические признаки

После однократной или повторной дачи афлатоксина Впроявляется острое течение болезни, которое характеризуется нарушением функции желудочно-кишечного тракта и нервным синдромом (нарушение координации движений, судороги, парезы, параличи). При вскрытии обнаруживают дистрофию печени, некроз печеночных клеток, кровоизлияния в паренхиматозных органах и скелетных мышцах.

Подострое течение афлатоксикоза сопровождается резким снижением продуктивности, атаксией, расстройством сердечной деятельности, нервными симптомами, огрубением и тусклостью волосяного покрова. Возможны случаи абортов. При патологоанатомических исследованиях отмечают желтушность слизистых; увеличение и цироз печени; желчный пузырь растянут и переполнен густой темной желчью; в паренхиматозных органах множественные кровоизлияния; катаральное воспаление желудочно-кишечного тракта; застойная гиперемия в паренхиматозных органах.

Охратоксикоз

Заболевание, вызываемое поеданием кормов, содержащих токсические метаболиты микроскопических грибов из родов Penicillium и Aspergillus (охратоксины А, В, С и Д).

Термин "охратоксикоз" используется довольно редко. Чаще всего эти заболевания описаны под названиями "нефропатия свиней", иногда "датская или скандинавская нефропатия" или " балканская эндемическаянефропатия".

Токсикодинамика

Охратоксин Аотносится к высоко токсичным веществам с тератогенными свойствами.

Наиболее характерно для всех видов животных поражение почек. Охратоксины являются почечными токсинами. Они вызывают дистрофические изменения в эпителиальных клетках петли Генли. Наряду с этим у них выявлены гепатотоксические и тератогенные свойства. Принятый внутрь охратоксин А ассимилируется белками плазмы крови. Ассимилированный охратоксин локализует­ся в печени, почках и мышечной ткани. Охратокси­ны подавляют синтез белка и окислительноефосфорилирование. Под влиянием микрофлоры кишечника от охратоксина отщепляется феннилаланин и остается малотоксичный альфа-охратоксин.

Клинические признаки

Острое течение наблюдается обычно у поросят - отъемышей. Обычно его обозначают как "околопочечный отек". У животных отмечают полиурию, атаксию, угнетение, энтериты, отечность кожи, вздутие живота, особенно в области поясницы. Смертность достигает 90% в течение первых 2 суток.

Подострое течение охратоксикоза отмечали при введении свиньям токсина в дозе 1 мг/кг массы тела. Из клинических признаков подострой формы следует выделить сильную жажду. Животные выпивают воды в 2-4 раза больше, чем в норме. Остальное признаки аналогичны острой форме. При своевременно принятых мерах летальность уменьшается.

Хроническая форма охратоксикоза развивалась при систематическом (постоянном и с перерывами) скармливании охратоксина А.Необходимый срок для проявления токсикоза - 2-5 месяцев. На первой план выступает усилившаяся жажда, полиурия, снижение продуктивности. В крови больных снижается количество гемоглобина и эритроцитов, отмечается лейкоцитоз (в основном за счет лимфоцитов). Наиболее часто охратоксикоз встречается у молодняка. У супоросных свиноматок возможны аборты, рождение мертвого и нежизнеспособного приплода (поросята гибнут на 1-6 сутки со дня рождения), ухудшается свертываемость крови.

Слизистая желудка и кишечника катарально воспалена. Печень неравномерно окрашена, без видимых изменений. Наиболее выражены изменения в почках. Почки незначительно увеличены, капсула местами соединена спайками с корковым слоем. Корковый и мозговой слои неравномерно окрашены (бледные участки). При гистологическом исследовании обнаруживается некроз клеток проксимальных канальцев, дистрофия клеток в извитых канальцах и петле Генли. В почках возможно обнаружение кист.

Патулинотоксикоз

Микотоксикоз, которыйразвивается при поедании животными кормов, содержащих патулин (клавицин, клавиформин, экспансии). Продуцентами патулина являются многие грибы из рода Penicillium, некоторые грибы из рода Aspergillus и другие. Чаще всего выделяется из грибов вида Penicilliumexpansum.

Токсикодинамика

У патулина в эксперименте обнаружены и тератогенные свойства. Считают, что высокая частота случаев обнаружения рака пищевода связана с высоким уровнем концентрации патулина в яблоках и сидре.

При подкожном введении патулин индуцирует фибросаркомы у крыс.

Клинические признаки

Патулинотоксикоз относится к группе малоизученных заболеваний с нефротоксическим и гепатотоксическим синдромом.

Патулинотоксикоз наиболее часто регистрировался у свиней. В начале заболевание проявляется посинением пятачка и нижней части живота, угнетением. В дальнейшем появляется кашель, обильная саливация, возможна рвота. У животных резко нарушена функция дыхания, в легких - хрипы, пульс учащен. Затем развивается нарушение координации движений, парез тазовых конечностей, конвульсии Хроническая форма протекает без видимых признаков болезни. Но животные отстают в росте, худеют, иногда наблюдается диарея.

В крови отмечалось снижение количества гемоглобина и эритроцитов, увеличение количества лейкоцитов.

Стеригматоцистин

Стеригматоцистинзаболевание большинства видов животных и человека, вызываемое стеригматоцистином (относится к группе антибиотических токсинов).

Токсикодинамика

Стеригматоцистин наиболее часто является продуктом метаболизма гибов Aspergillusvericolor, а также Aspergillusnidulans, Aspergillussydowi, Aspergillusryqulosus, AspergillusflavusСтеригматоцистин относится к группе малоизученных микотоксинов. Основным органом

- мишенью воздействия стеригматоцистина является печень. Известно, что стеригматоцистин вызывает образование карциномы печени.

Клинические признаки

Симптомы,связанные с поражением печени