Лекция №4. Гаструляция и формирование основных закладок.

После объединения хромосомных наборов обоих пронуклеусов без всякого перерыва начинается митотическое деление ядра зиготы. За этим первым делением - следует серия следующих делений ядер и цитоплазмы, общие свойства которых таковы: 1. Разделившиеся клетки зародыша не растут, т. е. в промежутке между делениями масса их цитоплазмы не увеличивается. В результате суммарный объем и масса всех возникших клеток не превышает объема и массы яйцеклетки во время оплодотворения; 2. Между тем количество ДНК в ядре удваивается после каждого деления, как и при обычном митозе, так что все клетки сохраняют диплоидность. Эта серия делений называется дроблением яйцеклетки. Действительно, из-за отсутствия роста клеток после деления яйцеклетка как бы дробится на все более мелкие клетки. Последние называются бластомерами, а разделяющие их плоскости — бороздами дробления. Таким образом, дробление — это многократные митотические деления зиготы, в результате которых зародыш становится многоклеточным, не меняя при этом существенно своего объема.

Образование многоклеточности — первая и основная биоло­гическая функция дробления. Вторая его функция состоит в увеличении так называемого ядерно-плазменного отношения. Еще задолго до возникновения современных представлений о роли ДНК в клеточном метаболизме было понято, что для нормальной жизнедеятельности клетки должно поддерживаться определенное отношение между количеством ядерного и цитоплазматического вещества. Это отношение было названо ядерно-плазменным отношением и обозначалось как я/пл.

Основные способы гаструляции

После того как зародыш достиг стадии бластулы, в нем начинаются интенсивные передвижения отдельных клеток и обширных участков стенки бластулы, приводящие, в конце концов, к тому, что более или менее однородный перед этим зародыш расчленяется на два или три слоя, которые называются зародышевыми листками. Самый внутренний зародышевый листок называется энтодермой, внешний — эктодермой. На эти листки расчленяются зародыши всех многоклеточных животных: лишь у губок дальнейшая судьба листков настолько необычна, что некоторые авторы избегают говорить применительно к ним об экто- и энтодерме. У всех животных, кроме губок и кишечнополостных, формируется средний зародышевый листок — мезодерма, располагающийся между двумя первыми. Процесс расчленения зародыша на зародышевые листки называется гаструляцией, а сам зародыш на стадии расчленения — гаструлой.

Способы гаструляции довольно разнообразны. Они отчасти связаны со строением бластулы, но эта связь далеко не однозначна. Особенно разнообразны типы гаструляции у низших беспозвоночных — кишечнополостных. У них распространен иммиграционный тип гаструляции, который был открыт в 1886 г. И. И. Мечниковым у некоторых гидромедуз и может считаться эволюционно наиболее древним. Этот процесс сводится к вселению в полость бластоцеля отдельных клеток, выклинивающихся из стенки бластулы. Иногда процессы иммиграции идут без особого порядка по всей поверхности бластулы. Тогда говорят о мультиполярной иммиграции. Большей же частью выселение идет с одного определенного полюса— униполярная иммиграция.

Известна также биполярная иммиграции, когда выселение идет с противоположных полюсов.

У тех кишечнополостных, где дробление заканчивается морулой без полости, наблюдается другой тип гаструляции, который получил название деламинация (расслоение). Он ограничивается выравниванием внутренних стенок клеток наружного слоя, причем такое выравнивание нередко идет волной, от одной соседней клетки к другой. Вдоль выровненных поверхностей формируется базальная мембрана, отделяющая этот внешний клеточный слой (эктодерму) от внутренней массы клеток, которая вся становится энтодермой. При деламинации, таким образом, клеточные перемещения почти отсутствуют.

Наконец, некоторым высшим кишечнополостным (сцифоидные медузы, коралловые полипы) присущ иной тип гаструляции, широко распространенный у более высших форм: впячивание, или инвагинация (впрочем, небольшое впячивание в месте униполярной иммиграции обнаружено и у некоторых гидроидных полипов). В этих случаях внутрь бластоцеля входят не отдельные клетки, а клеточный пласт, не утративший эпителиальной структуры. Впрочем, этот способ гаструляции легко заменяется другим, более примитивным. Так, сцифоме-дузе Aurelia flavldula свойственна более или менее выраженная инвагинация, Aurelia marginalis — мультиполярная иммиграция, Aurelia aurita — нечто вроде униполярной иммиграции с последующей эпитализацией. Для ряда видов гидроидных полипов тоже характерны различные сочетания иммиграционных и деламинационных процессов или же у них последовательно протекают оба процесса. Во всяком случае, гаструляционные процессы у кишечнополостных крайне вариабельны.

В других группах животных деламинация и иммиграция тоже представляют собой компоненты гаструляционного процесса. Например, у иглокожих путем иммиграции с вегетативного полюса закладывается так называемая первичная мезенхима, из которой потом формируются некоторые временные органы личинки (скелет, органы выделения). В целом же процесс гаструляции приобретает более организованный характер и осуществляется обычно путем инвагинации вегетативной стенки бластулы. Полость вворачивания называется гастроцелем, а ведущее в нее отверстие — бластопором (первичным ртом). Края бластопора называются его губами.

Так как при инвагинации механическая целостность стенки бластулы не нарушается, очевидно, что вворачивание дна бластулы должно сопровождаться более или менее значительным смещением клеточного материала боковых стенок в вегетативном направлении (вегетопетально). Действительно, такие движения всегда происходят, и скорость их, как правило, не меньше скорости вворачивания. Вегетопетальные движения того слоя, который в данный момент еще находился па поверхности гаструлы, называют эпиболией (обрастанием). Существует немало случаев чисто эпиболической гаструляции, когда инвагинация невозможна из-за малых размеров бластоцеля. или инертности крупных, богатых желтком вегетативных макромеров. Так обстоит дело, например, у ряда малощетинковых червем: макромеры здесь просто накрываются наползающими на них микромерами.

Материал, оставшийся на поверхности зародыша после завершения гаструляции, есть наружный зародышевый листок, или эктодерма. Что касается погрузившегося любым способом внутрь материала, то лишь у кишечнополостных он представляет собой чистую энтодерму — внутренний зародышевый листок, формирующий впоследствии стенку пищеварительного тракта с его производными. У всех вышестоящих систематических групп погрузившийся внутрь в ходе гаструляции материал содержит кроме энтодермы еще и материал будущего среднего зародышевого листка — мезодермы, который потом отделяется от энтодермы.

Гаструляции у амфибий

Гаструляция амфибий — сложный комплексный процесс, состоящий из множества разнородных клеточных движений. Основными его компонентами принято считать эпиболию и инвагинацию. В первом приближении это можно принять, но не следует забывать, что сами названные процессы имеют составной характер, и, кроме того, они дополняются процессами иммиграции и деламинации. Как мы знаем, вегетативная стенка бластулы амфибий сложена из крупных, богатых желтком макромеров. Поэтому на вегетативном полюсе не может возникнуть такое обширное впячивание, как у иглокожих и ланцетника. Однако, по-видимому, некоторые богатые желтком наружные макромеры все же погружаются внутрь зародыша. Эти движения иммиграционного типа получили название предгаструляционных. Они приводят к сокращению светлой вегетативной зоны на поверхности зародыша и к соответственному увеличению темной (пигментированной) анимальной зоны. Последний процесс можно рассматривать как первую, пассивную фазу эпиболии.

Собственно гаструляция начинается в области уже известного нам серого серпа. Там сначала возникает выровненная линия клеточных стенок, проходящая чуть вегетативнее границ анимального (пигментированного) и вегетативного (светлого) полушарий, а затем по этой линии образуется узкая, идущая вглубь щель — зачаток бластопора. Щелевидное впячивание углубляется, вовлекает в себя все новые клетки поверхности зародыша и принимает вид серповидной бороздки. Анимальный верхний край этой бороздки называется спинной, или дорсальной, губой бластопора, так как здесь расположен задний край спинной стороны зародыша. Полость щелевидной бороздки несколько расширяется и превращается в зачаток первичной кишки, или архентерона.

Дальнейший ход гаструляции связан, прежде всего, с подворачиванием клеточного материала через дорсальную губу бластопора: клетки анимальных районов смещаются в вегетативном направлении (вегетопетально) вплоть до губы бластопора и, подвернувшись через нее, образуют дорсальную выстилку углубляющегося архентерона. Таким образом, из вышесказанного видно, что клеточный состав дорсальной губы бластопора непрерывно обновляется.

Вегетопетальные движения клеток наружной поверхности гаструлы в направлении дорсальной губы бластопора представляют собой продолжение движений эпиболии. В результате этих движений бластопор смещается в вегетативном направлении, и площадь поверхности, занимаемая анимальными клетками, все время увеличивается.

Движения эпиболии осуществляются главным образом благодаря следующим двум процессам: 1. Активному схождению (конвергенции) к средней (сагиттальной) линии зародыша клеток так называемой супрабластопоральной области, расположенной непосредственно дорсальнее бластопора. Схождение клеток сопровождается их переупаковкой — сменой соседей. Из-за этого схождения данный участок сужается в поперечном и растягивается в продольном направлении. На зародышах шпорцевой лягушки измерена скорость сдвига, являющегося следствием данного растяжения: она составляет примерно 3,5 мкм/мин. 2. Вдвижению друг между другом клеток внутренних слоев крыши бластоцеля в более анимальных, удаленных от бластопора районах зародыша. В результате такого вдвижения крыша бластоцеля растягивается примерно равномерно по всем направлениям. Оба движения осуществляются согласованно и способствуют увеличению площади анимальной части зародыша, т. е. эпиболии.

Тем временем бластомер продолжает расти в стороны, охватывая, светлую вегетативную зону сначала полукольцом, а потом и полным кольцом, которое по ходу гаструляции постепенно уменьшается до узкого отверстия. Заключенный внутри кольцевидного бластопора светлый вегетативный материал называется желточной пробкой. В кольцевидном бластопоре кроме известной уже нам дорсальной губы различают вентральную дубу (участок, противоположный дорсальной губе) и боковые губы. Через эти губы тоже идет подворачивание материала, но оно несравненно слабее, чем подворачивание через дорсальную губу.

Ввернувшийся внутрь клеточный материал стенки архентерона продвигается сплошным слоем по внутренней поверхности стенки бластоцеля, постепенно оттесняя бластоцель в вентральном направлении и, в конце концов, вытесняя его почти полностью. Это движение называют инвагинацией, но, как и движение эпиболии, оно слагается из ряда компонентов.

Самая ранняя стадия инвагинации (закладка бластопора) связана с возникновением в области бластопора группы так называемых колбовидных клеток с узкими апикальными «шейками» и удлиненными, раздутыми телами. Впячивание бластопора закладывается как раз благодаря активному сужению «шеек» этих клеток и растяжению клеточных тел. Структурные основы этого и других морфогенетических процессов рассматриваются в конце главы. При дальнейшей инвагинации решающее значение имеют следующие процессы.

1. Клетки вершины гастрального впячивания (в том числе бывшие колбовидные), выбрасывая длинные отростки, активно ползут по стенке бластоцеля. Внутренняя выстилка этой стенки к данной стадии развития видоизменяется так, чтобы способствовать направленной миграции по ней клеток: здесь формируются волокна внеклеточного матрикса, состоящие из белка фибронектина и ориентированные в передне-заднем направлении зародыша, т. е. как раз вдоль траекторий движения клеток. На завершающей стадии инвагинации бывшие колбовидные клетки уплощаются и формируют выстилку передней части эмбрионального кишечника. Впоследствии они входят в закладку печени.

2. Клетки внутренних слоев дорсальной губы бластопора при подворачивании через губу резко меняют свою структуру и характер контактов: до подворачивания они представляют собой довольно плотно скрепленные столбчатые клетки эпителиального характера, а в процессе подворачивания превращаются в округлые разобщенные клетки, почти не контактирующие друг с другом. Таким образом, клеточные слои при подворачивании как бы рассыпаются на отдельные клетки. Такое рассыпание считается одним из основных факторов, способствующих подворачиванию. Впоследствии контакты между ввернувшимися клетками вновь восстанавливаются, но судьба ввернувшихся клеток уже необратимо отличается от судьбы клеток, оставшихся в супрабластопоральной области.

3. По мере вворачивания дорсальная губа бластопора смещается в вегетативном направлении. Такое смещение связано с тем, что скорость эпиболии (как уже говорилось выше, около 3,5 мкм/мин) существенно превышает скорость подворачивания клеточного материала через дорсальную губу (около 2,5 мкм/мин). В том же направлении, т. е. к вегетативному полюсу удлиняется деламинациояная борозда, разграничивающая ввернувшийся и еще не ввернувшийся клеточный материал. Удлинение деламинационной борозды — неотъемлемый компонент гаструляции амфибий.

Карты презумптивных зачатков зародышей амфибий

Какое положение займут различные районы бластулы после завершения гаструляции, и какова их окончательная судьба? Это можно установить, нанося на поверхность бластулы метки красками или другими веществами и прослеживая движение меток в ходе гаструляции. Результаты исследования выражают, отмечая на схеме бластулы или ранней гаструлы судьбу каждой меченой точки. Эти схемы названы картами презумптивных (будущих, или, в более точном переводе с латинского, предполагаемых) зачатков. Первым составил такие карты для зародышей амфибий немецкий эмбриолог В. Фохт (Vogt) в 20-х гг. нашего столетия. Он пропитывал кусочки агар-агара красящими веществами, которые поглощались живыми тканями и были для них безвредными (так называемые витальные краски — нильский голубой, нейтральный красный и др.), и прижимал эти кусочки к разным местам поверхности бластулы. Краска диффундировала в зародыш, и определенный его участок прокрашивался. Прослеживая перемещения окрашенного участка, можно было точно судить о том, куда он попадает в ходе гаструляции и в какой зачаток превратится. Позднее методы прижизненного мечения были усовершенствованы, и в составленные Фохтом карты внесены некоторые уточнения и исправления, касающиеся главным образом локализации презумптивной мезодермы. Мы изложим сна­чала классические данные Фохта, а затем упомянем о новейших поправках.

По Фохту, перед началом гаструляции все закладки зародыша расположены на поверхности, точнее — выходят на поверхность. Анимальнее щелевидной бороздки бластопора располагается зачаток так называемой прехордальной пластинки (прехорды), из которой по завершении гаструляции развивается главным образом выстилка ротовой полости. Анимальнее прехордальной пластинки располагается зачаток будущей хорды. Дорсоанимальную часть зародыша занимает презумптивная эктодерма нервной системы (нейроэктодерма), а вентроанимальную часть—эктодерма покровов тела. Две последние закладки и по завершении гаструляции остаются на поверхности тела зародыша. Вегетативнее их располагается последовательно материал осевой мезодермы (идущей на образование туловищных и хвостовых сомитов), боковой пластинки (несегментированная часть мезодермы) и, наконец, энтодермы. Прехордальная пластинка, хорда, мезодерма (осевая и несегментированная) и энтодерма в ходе гаструляции погружаются внутрь зародыша. При этом первые две закладки подворачиваются через дорсальную губу, мезодерма — через боковые и вентральную губы, а энтодерма накрывается сходящимися губами бластопора. По изложенным данным, материал хорды и мезодермы должен после своего вворачивания непосредственно выстилать полость архентерона, образуя ее дорсальную стенку. В таком случае строение стенки архентерона у зародышей амфибий было бы подобным (гомологичным) строению этой же стенки у зародышей ланцетника или (за вычетом хорды) у зародышей иглокожих.

В последующие годы было выявлено, что применительно к амфибиям такие выводы справедливы лишь для отряда Хвостатых (Urodela). Что касается бесхвостых амфибий (Anura), то, как было установлено Т. А. Детлаф, С. Левтрупом и Р. Келлером, у них материал хорды, осевой мезодермы и боковой пластинки ни на одной стадии развития не выходит на поверхность зародыша, а локализован с самого начала во внутренних слоях его стенки. При гаструляции этот материал подворачивается аналогично наружному, но никогда не приходит в контакт с гастральной полостью. Последняя оказывается выстланной с вентральной стороны крупными клетками желточной энтодермы, а с дорсальной стороны тонким слоем клеток, отделяющих эту полость от хорды и сомитов. Этот слой клеток принято называть гипохордой.

С учетом этой поправки классические карты презумптивных зачатков можно считать справедливыми для зародышей всех классов амфибий.

Современные методы маркировки эмбриональных тканей позволяют получать карты презумптивных зачатков не только для стадии бластулы, но и для более ранних стадий развития, в частности для периода дробления. Такая маркировка осуществляется путем инъекции в отдельные бластомеры флуоресцентных красителей, которые затем выявляются в потомках инъецированного бластомера при рассмотрении гистологических срезов в люминесцентном микроскопе.

Использование такого метода позволило прийти к выводу принципиальной важности: к стадии 32 бластомеров презумптивное значение большинства бластомеров еще не определено с полной точностью — один и тот же бластомер может в различных процентах случаев давать разные закладки и, напротив, разные бластомеры — одни и те же закладки. Например, сомиты могут образовываться из тех же бластомеров, что хорда и нервная трубка (бластомер В1), или из тех же бластомеров, что и боковая пластинка (бластомеры ВЗ, СЗ, В4, С4). С другой стороны, нервная трубка может возникать из любого следующего бластомера: А1, А2, В1, В2, ВЗ, С1 или С2, хотя в других случаях из двух последних бластомеров может возникнуть энтодерма. Это связано с тем, что морфогенетические движения клеток в последующем развитии не идеально точны: потом­ки какого-либо одного бластомера могут до некоторой степени случайно перемешиваться с потомками другого бластомера. Но поскольку это не приводит к нарушениям структуры организма, очевидно, что по крайней мере в период дробления и до его начала (в период ооплазматической сегрегации) судьба бластомера окончательно не определяется. Даже после завершения гаструляции возможно взаимное перемешивание, а значит, и переопределение судеб отдельных клеток.

Надо особо подчеркнуть, что карты презумптивных зачатков, какими бы методами они не составлялись, дают сведения о судьбе отдельных участков зародыша лишь в его нормальном развитии и ничего не говорят о том, может или нет судьба клеток быть переопределена при их перемещении в другое положение. Иными словами, карты не дают сведений о степени детерминации клеточной судьбы. Подобного рода данные рассматриваются в следующей главе.

Нейруляция и формирование осевых органов у зародышей амфибий

Движения гаструляции у зародышей позвоночных без существенного перерыва переходят в движения, связанные с нейруляцией — закладкой центральной нервной системы. Нейруляция — характернейший для всех позвоночных формообразовательный процесс, определяющий главные структурные особенности представителей этого типа. Зародыш позвоночных в период нейруляции называется нейрулой. Мы рассмотрим процесс нейруляции на примере амфибий.

Обычно нейруляцию определяют как процесс скручивания нейральной эктодермы, расположенной на спинной стороне зародыша, в нервную трубку. В действительности это лишь часть тех формообразовательных движений, которые происходят в зародыше по окончании гаструляции. В целом эти движения состоят в конвергентном (сходящемся) смещении материала эктодермы и мезодермы к средней линии спинной стороны зародыша (вентродорсальные движения); происходит также растяжение дорсальной эктодермы зародыша в передне-заднем направлении.

Собственно нейруляционные движения в презумптивной нейральной эктодерме представляют собой часть этих движений и развиваются на их основе. Сначала нейральная эктодерма уплощается и превращается в нервную пластинку, которая в головной части зародыша шире, чем в туловищной. Края пластинки приподнимаются и образуют нервные валики, окаймляющие пластинку сплошной подковой. Затем поверхность нервной пластинки начинает довольно быстро сокращаться в поперечном направлении преимущественно за счет погружения ее наружных клеток в ее же внутренние слои. Одновременно она начинает складываться по средней линии. Возникающее по средней линии углубление нервной пластинки называется нервным желобом. Еще чуть позже края нервной пластинки смыкаются, и образуется нервная трубка, полость внутри которой называют невроцелем. Передняя расширенная часть нервной трубки превращается в головной мозг, а ее невроцель — в полость мозгового пузыря. Более узкая туловищная часть трубки превращается в спинной мозг, а его полость — в спинномозговой канал.

После смыкания нервного желобка в нервную трубку материал нервных валиков, расположенный сначала по периферии нервной пластинки, концентрируется вдоль средней линии зародыша дорсальнее трубки в виде образования, напоминающего петушиный гребень. Поэтому данную структуру называют нервным гребнем. Клетки нервного гребня не входят в состав центральной нервной системы; они дают множество различных производных.

Еще до начала скручивания нервной пластинки в трубку или в самом начале этого скручивания из осевой мезодермы точно по средней (сагиттальной) линии зародыша в виде тяжа обособляется хорда, или спинная струна. Хорда существует длительное время, вплоть до формирования скелетных позвонков, которыми она почти нацело вытесняется. Располагается хорда под туловищной частью нервной трубки; ее передний конец как раз совпадает с границей туловищного и головного отделов. Спереди от хорды находится тонкий пласт клеток прехордальной пластинки, образующих выстилку глотки и ротовой полости.

Сразу латеральнее материала хорды располагается мезодерма будущих сомитов; вентральнее границы нервной пластинки и покровной эктодермы этот материал плавно переходит в мезодерму боковой пластинки. Внутри зачатков сомитов возникает полость, переходящая в узкую щель, разделяющую боковую пластинку на два листка: париетальный, прилежащий к покровной эктодерме, и висцеральный, прилежащий к энтодерме. Внутренняя полость и щель образуют уже знакомую нам вторичную полость тела — целом. У зародышей амфибий, как и у подавляющего большинства других позвоночных животных, целом возникает путем расхождения клеток, т. е. шизоцельным путем. Только применительно к ланцетнику и некоторым акуловым рыбам можно говорить об энтероцельной его закладке (т. е. об отшнуровке от единой полости архентерона).

Формирование хорды и сомитов связано с интенсивной миграцией материала эмбриональной мезодермы в вентродорсальном направлении, к средней линии зародыша, т. е. к линии образования хорды. Таким образом, хорда образуется на месте встречи двух клеточных потоков, причем встречно движущиеся клетки втискиваются друг между другом. Это явление названо интеркаляцией клеток. В результате интеркаляции хорда удлиняется. Вентродорсальное движение мезодермы (совпадающее по направлению с нейруляционными движениями) характерно для туловищной области зародыша. В шейной и головной областях происходит обратное, дорсовентральное движение мезодермальных клеток, концентрирующихся на вентральной стороне тела, в области будущей закладки сердца.

Вскоре после обособления хорды, еще до завершения нейруляции начинается метамеризация осевой мезодермы, т. е. ее разделение на парные сегменты — сомиты. Это один из важнейших морфогенетических процессов у позвоночных, закладывающий основы их опорно-двигательной системы. Метамеризация мезодермы идет в направлении спереди назад. У амфибий она продолжается и после вылупления зародыша из яйцевых оболочек, по мере роста ее хвоста, где один за другим формируются хвостовые сомиты (из материала заднего отдела нервной трубки). Клеточные механизмы метамеризации у разных позвоночных различны. У бесхвостых амфибий в процессе метамеризации клетки осевой мезодермы поворачивается на 90°, изменяя первоначальную поперечную ориентацию на продольную.

У хвостатых амфибий формирование сомитов связано с группированием мезодермальных клеток в своеобразные «розетки», у зародышей птиц — в сходные с розетками веерообразные структуры, постепенно достраивающиеся до полного сомита.

Механизмы морфогенетических движений гаструляции и нейруляции

Несмотря на все разнообразие описанных выше гаструляционных и нейруляционных морфогенетических движений, все они, равно как и морфогенетические движения, в последующем развитии, основаны на немногих клеточных и молекулярных процессах, а также регуляторных механизмах. Рассмотрим их более подробно.

Активность морфогенетических движений. Прежде всего, надо отметить следующее: подавляющее большинство морфогенетических движений на протяжении всего развития являются активными; это значит, что их источники энергии и исполнительные механизмы находятся внутри клеток как раз того участка зародыша, который испытывает данную деформацию. Это обобщение выработалось в эмбриологии не сразу: на заре исследования морфогенетических движений многие авторитетные исследователи считали, что, например, гаструляционное и нейруляционное впячивания возникают пассивно, в результате бокового давления на впячивающийся клеточный материал. Такое боковое давление могло возникать, по их мнению, за счет размножения клеток сбоку от впячиваний: размножающиеся клетки как бы сминают расположенный между ними участок пласта, заставляя его впячиваться.

Однако эта точка зрения в подавляющем большинстве случаев не получила экспериментального подтверждения. Лучшим свидетельством против нее являются многочисленные эксперименты по изоляции участка, которому предстоит впячиваться, от боковых областей, от которых должно было исходить давление: при такой изоляции впячивание не только осуществляется, но даже протекает быстрее. Отсюда следует, что боковые участки зародыша не только не способствуют впячиванию, но, напротив, оказывают ему сопротивление ввиду своего растяжения. О факторе растяжения тканей и его роли в регуляции морфогенетических движений мы еще поговорим позже.

Поляризация клеток. Любое активное изменение формы эпителиального пласта в период гаструляции и нейруляции, а также в последующих органогенезах, начинается с того, что клетки данного участка пласта поляризуются, то есть вытягиваются в направлении, перпендикулярном или косом к поверхности пласта.

Поляризация клеток эмбриональных эпителиев — пример согласованного коллективного клеточного поведения. Клетки эмбриональных эпителиев практически никогда не поляризуются поодиночке, а всегда целыми группами. Нередко можно проследить волну поляризации, распространяющуюся от одной клетки к другой. Такая волна наблюдается, например, при подворачивании клеток через дорсальную губу бластопора: у зародышей шпорцевой лягушки в процессе подворачивания каждая последующая клетка поляризуется, удлиняясь более чем вдвое, причем каждая последующая клетка поляризуется в течение 3—5 мин. Таким образом, за час поляризуется и подворачивается около 20 клеток, что соответствует инвагинации участка пласта поперечником примерно 200—300 мк. Интенсивная поляризация клеток происходит и в нейроэктодерме при формировании нервной пластинки. Таким образом формируется столбчатый нейроэпителий.

Поляризация клеток основана на сложных и еще недостаточно изученных перестройках цитоскелета и клеточной мембраны: сборке микротрубочек и микрофиламентов и их ориентации по длинной оси поляризующейся клетки, а также движениями так называемых интегральных (встроенных в мембрану) белков в плоскости плазматической мембраны. В результате этих движений перераспределяются ионные каналы и насосы: первые концентрируются преимущественно на апикальной (внешней) стороне поляризующихся клеток, вторые — на боковых и базальных сторонах. В поляризующихся клетках формируется также система связывающих их межклеточных контактов. Поляризация клеток обусловливает протекание в них направленного эндо- и экзоцитоза, о чем будет сказано позже.

Сокращение поляризованных клеток. Формирование сомкнутых зон (или, как иногда говорят, доменов) поляризованных клеток лишь указывает места будущих впячиваннй или выпячиваний, но не приводит непосредственно к изменению формы клеточного пласта. Форма пласта преобразуется в результате последующих изменений формы поляризованных клеток, выражающихся в сокращении определенных участков их поверхности или же всей поверхности. Один из простейших и широко распространенных процессов такого рода — сокращение апикальных поверхностей поляризованных клеток. Именно оно и приводит, в частности, к описанному выше сужению «шеек» колбовидных клеток. Аналогичное сокращение апикальных поверхностей клеток нейроэктодермы играет важную, хотя и не единственную, роль в скручивании нервной трубки. Сокращение апикальных поверхностей обусловлено, прежде всего «самопоеданием» клетками своей апикальной мембраны путем эндоцитоза (захватывания внутрь клетки мембранных пузырьков). По мнению ряда авторов, эти пузырьки направленно транспортируются в противоположные, базальные районы клетки и там встраиваются путем экзоцитоза, наращивая базальные отделы клеточной мембраны за счет апикальных.

Обычно сокращение не ограничивается апикальными клеточными поверхностями: боковые поверхности поляризованных клеток тоже сокращаются, выгибая при этом клеточный пласт. Это особенно ясно проявляется на примере веерообразных группировок из растянуто-скошенных клеток, образование которых предшествует любому впячиванию клеточного пласта. Еще в 1914 г. А. Г. Гурвич обнаружил, что в нейральных пластах зародышей позвоночных направление наклонов осей скошенных клеток как бы предсказывает еще до начала впячивания пласта, куда последний изогнется: изогнутая поверхность будет перпендикулярной осям скошенных клеток. Это правило «прогностических наклонов» клеточных осей объясняется тем, что изгиб пласта осуществляется именно за счет спрямления клеток — перехода формы их сечений от скошенной к прямоугольной. Но такое спрямление и является результатом сокращения боковых поверхностей клеток: понятно, что при неизменном объеме площадь поверхности прямоугольной клетки меньше поверхности скошенной клетки.

Сокращение боковых клеточных поверхностей — тоже активный процесс, в котором, вероятно, участвуют актиновые микрофиламенты.

Роль механических напряжений в организации гаструляционных и нейруляционных движений

Мы уже могли убедиться, что в результате гаструляционных и неируляционных движении возникает сложная и вместе с тем высокоупорядоченная, геометрически правильная организация зародыша. Благодаря чему устанавливается и поддерживается эта правильность? Почему многочисленные отдельные клетки и целые клеточные пласты движутся в строго определенных направлениях, образуя закономерно локализованные скопления клеток или изгибы пластов? Может быть, в каждую отдельно взятую клетку зародыша заранее «вложена» информация о се движении и пункте ее назначения? Такое предположение можно сразу же отклонить, хотя бы ввиду описанного выше «статистического» характера карт презумптивных зачатков: мы уже видели, что даже в ходе ненарушенного, нормального развития движение и окончательная судьба участков зародыша не определяются с «поклеточной» точностью. Чисто случайно отдельные клетки могут двигаться разными путями и входить в состав различных зачатков без того, чтобы это нарушало правильную структуру целого организма. С другой стороны, если изолировать и заставить развиваться вне зародыша небольшие кусочки эмбриональных тканей размером в несколько сотен клеток, то, хотя из данного кусочка и будет, как правило, развиваться набор зачатков, соответствующий его презумптивной судьбе, форма и расположение этих зачатков будут неправильными. Эти данные наряду со многими другими говорят о том, что факторы организации движений гаструляции и нейруляции как-то связаны с целым зародышем. Что могут представлять собой эти организующие факторы?

Ряд данных показывает, что такими факторами могут являться механические натяжения тканей зародыша. Первым по времени фактором, обусловившим натяжение эмбриональных тканей, является тургорное давление в полости бластоцеля, растягивающее крышу бластоцеля. Это натяжение еще сравнительно незначительно. Однако оно заметно усиливается в ходе гаструляции, поскольку движения инволюции через губы бластопора (главным образом через дорсальную губу) приводят к растяжению всей поверхности зародыша в продольном (передне-заднем) направлении. Кроме того, инвагинирующий материал хордомезодермы, ползущий по выстилке бластоцеля, растягивает как сам себя, так и расположенный перед ним участок стенки бластоцеля, на который он наползает.

Роль эпителиально-мезенхимных взаимодействий в дифференцировке энтодермальных зачатков. Для дифференцировки энтодермальных зачатков требуются непосредственные контакты с мезодермой, причем на ранних стадиях развития менее специфические, а для окончательной дифференцировки — более специфические контакты. Так, для формирования выроста легкого из эпителия передней кишки достаточен контакт эпителия с мезенхимой этого же зачатка. Добавление чужеродной мезенхимы может полностью изменить направление развития зачатка: под влиянием мезодермы желудка легочная энтодерма будет образовывать структуры, сходные с железами желудка, под влиянием мезодермы печени — печеночные тяжи. Для начальных стадий морфогенеза зачатка печени необходим его контакт с мезодермальными клетками зачатка сердца, а для дальнейшей биохимической дифференцировки клеток печени — контакт с собственной, печеночной мезодермой. Присутствие специфической мезодермы необходимо также для полной дифференцировки и функционирования щитовидной железы. Несколько менее специфические влияния требуются при развитии поджелудочной железы: для нормальной дифференцировки эпителия поджелудочной железы в клетки, секретирующие гормоны (в том числе инсулин), также необходим контакт с мезенхимой, но в условиях эксперимента собственная мезенхима поджелудочной железы может быть заменена чужеродной мезенхимой слюнных желез или вторичной почки.

Гаструляция и нотогенез у человека протекают более 2 недель и приводят к образованию первичных эмбриональных органов - зародышевых листков и осевых органов (хорда, нервная трубка). Они детерминируют (предопределяют) общий план строения человеческого организма, служат источником развития вторичных органов, провизорных (существуют только у зародыша) и дефинитивных.