Ізолювання за методом В.І.Попової

Ø Настоювання біологічного матеріалу з водою, підкисленою до рН=2…3 кислотою сульфатною (тричі)

Ø Проціджування та центрифугування витяжки

Ø Очищення центрифугату методом гель-хроматографії (сефадекс G25)

Ø Екстракційне концентрування за допомогою хлороформу

Ø Випарювання хлороформної витяжки

Ізолювання за методом П.В.Валова

ü Екстракція біологічного матеріалу водним розчином натрію гідроксиду

ü Центрифугування. Вивільнення центрифугату від білків (підкислюють кислотою сульфатною до рН=2, додають розчин натрію вольфрамату, кип’ятять і центрифугують)

ü Проціджування центрифугату

ü Екстракція кислого центрифугату ефіром

ü Екстракція водою після під луження

ü Екстракція ефіром після підкислення водної витяжки до рН=2.

Метод Стаса-Отто

ü Подрібнення біологічного матеріалу, настоювання з етанолом, підкисленим кислотою оксалатною (3 рази) при рН=2-3

ü Випарювання об’єднаних спиртових витяжок. Осадження білкових речовин етанолом

ü Фільтрування витяжки

ü Випарювання і осадження білкових речовин

ü Фільтрування та розведення витяжки водою (рН=2-3)

ü Екстракція отрути хлороформом

Під луження водного розчину виявлення речовин кислого характеру

до рН=9-10

екстракція отрути хлороформом(3-4 рази)

речовини основного характеру (виявлення)

Метод О.О.Васильєвої

ü Подрібнення біологічного матеріалу, настоювання з водою, підкисленою кислотою оксалатною (2рази) рН=2-3

ü Проціджування, центрифугування з об’єднаної водної витяжки

Водна витяжка Кисла хлороформна витяжка

Під луження до рН=9-10

25% NH₄OH

Екстракція хлороформом 3-4рази

Лужна хлороформна витяжка

ü Дослідження витяжок.

Методы очистки вытяжек из биологического материала от сопутствующих примесей. Выбор метода в зависимости от состояния, вида и способа изолирования яда из биологического материала.

1. очищення від мікро- і мікрочастинок

- процідження

- відстоювання

-фільтрування

- центрифугування

2. очищення від розчинених речовин:

- рідинна екстракція при різних рН органічними розчинниками

- хроматографічні методи

- сублімація

- діаліз

-твердофазна екстракція

 

Фактори впливу на ефективність ізолювання речовин:

- ступінь подрібнення біологічного матеріалу

- рН середовища

- природа і властивості речовин, що ізолюються, та речовин, які використовуються для ізолювання (гідрофільність, ліофільність тощо)

- природа кислоти, яка використовується для підкислення

- температура, співвідношення об’ємів водної та органічної фаз, кількість екстракцій, наявність виколювачів, іонна сила розчинів.

 

 

Способы концентрирования ядовитых соединений в вытяжках из биологического материала.

ü Випарювання при атмосферному тиску, при зниженому тиску

ü Рідинна екстракція: екстрагування з великих об’ємів водних витяжок невеликою кількістю органічного розчинника

ü Твердо фазна екстракція: сорбція-десорбція

ü Діаліз, зворотній осмос

Сравнительная характеристика методов. Использование имунноферментного метода для диагностики острых отравлений опиатами. Предварительные пробы и методы аналитического “скриннинга”при диагностике острых отравлений.

Опіоїди:

Морфін

Препарати опію застосовуються як болезаспокійливі засоби при болях різного походження, при деяких шлункових захворюваннях і т. д. Опій і його препарати надходять у кров з травного каналу або при парентеральному введенні. При курінні опію алкалоїди, які входять до його складу майже в незв'язаному вигляді, всмоктуються через легені.

Виявлення морфіну, кодеїну, наркотину і меконовой кислоти є доказом наявності опію в досліджуваних об'єктах. Ряд авторів вважають, що для доказу отруєнь опієм крім виявлення зазначених вище речовин досліджувані об'єкти необхідно додатково перевірити на наявність меконіна. Це мотивується тим, що реакції виявлення меконовой кислоти малочутливі і що вона відносно швидко розкладається в біологічному матеріалі. Для виявлення меконовой кислоти необхідно, щоб у досліджуваному матеріалі містилося не менше 0,05 г опію.

Виявлення меконової кислоти дозволяє відрізнити опій від омнопона при дослідженні витяжок з біологічного матеріалу, що надійшов на хіміко-токсикологічний аналіз. Опій містить меконовой кислоту, а в омнопоні вона відсутня.

Для виявлення меконової кислоти застосовують реакцію з хлоридом заліза (III) і метод УФ-спектроскопії. Реакція з хлоридом заліза (III). До 1-2 мл вказаного вище розчину додають 2-3 краплі 1%-го розчину хлориду заліза (III). Поява криваво-червоного забарвлення вказує на наявність меконовой кислоти в розчині. Це фарбування не повинна зникати при нагріванні.

При хіміко-токсикологічних дослідженнях алкалоїдів опію в біологічному матеріалі їх екстрагують органічними розчинниками з підлужених витяжок. Морфін, кодеїн, папаверин та тебаин добре екстрагуються органічними розчинниками з лужного середовища. Проте значна кількість тебаїн може екстрагуватися і з кислого середовища. Наркотин починає екстрагуватися хлороформом, 1,2-дихлоретаном при рН вище одиниці. При рН = 5... 7 тими ж органічними розчинниками екстрагується понад 90% наркотин.

 

 

53. Отдельные представители группы соединений, которые изолируются полярными растворителями: производные салициловой кислоты и парааминофенола (кислота салициловая, аспирин, натрия салицилат, метилсалицилат, салициламид, фенацетин, парацетамол), производные барбитуровой кислоты: барбамил, барбитал, фенобарбитал, этаминал-натрия, гексенал. Особенности метаболизма, выделения и определения.

Застосовувані в медицині барбітурати є 5,5-заміщений-ними (барбаміл, барбітал, фенобарбітал та ін) І 1,5,5-заміщений-ними (гексенал, гексабарбітал, бензонал та ін) барбітурової кислоти.

Для виявлення барбітуратів застосовуються кольорові реакції, реакції осадження, мікрокристалоскопічні реакції, методи хроматографії, УФ-та ІЧ-спектроскопії та ін..

Попередня проба. Для виявлення барбітуратів в сечі застосовують попередню пробу, засновану на реакції цих речовин з ацетатом кобальту і гідроксидом літію.

 

Реакція барбітуратів з ізопропіламіном і солями кобальту. Для виявлення барбітуратів Паррі (1924) запропонував реакцію, засновану на взаємодії цих речовин з солями кобальту і аміаком. Пізніше інші дослідники аміак замінили ізопропіламіном. При взаємодії барбітуратів з ізопропіламіном і солями кобальту утворюються внутрішньокомплексні сполуки:

Реакція з солями кобальту і лугами. Цвіккер (1931) встановив, що від збільшення хлориду кобальту і гідроксиду барію до барбітуратів утворюється забарвлена сполука. У 1932 р. Цвіккер замість гідроксиду барію застосував гідроксид калію. Інші дослідники замість гідроксиду барію застосовували гідроксид літію.

Реакція з піридином і солями міді. При взаємодії барбітуратів з піридином і солями міді утворюються важкорозчинні комплексні сполуки.

Мурексидна реакція. Для виявлення барбітуратів запропоновано декілька варіантів мурексидної реакції. Один з варіантів цієї реакції наводиться нижче.

Реакція з хлорцинкйодом. На предметне скло наносять кілька крапель хлороформного розчину досліджуваної речовини і випарюють насухо. До сухого залишку додають 1 краплю розчину хлорцинкйоду. Через 10-15 хв під мікроскопом спостерігають форму утворилися кристалів. При наявності барбітуратів (барбаміл, барбітал, етамінал) в досліджуваному розчині з'являються кристалічні осади.

Реакція з підкисленим спиртовим розчином йодиду калію. На предметне скло до сухого залишку, одержаному при випаровуванні досліджуваного розчину, наносять 2 краплі реактиву. При наявності барбітуратів (барбітал, бутобарбітал, гексенал, етамінал) через 10-15 хв з'являються кристалічні осади.

Реакція з родаміном 6ж. При взаємодії родаміну 6ж з солями барбітуратів (барбаміл, гексенал, етамінал-натрій) утворюються забарвлені іонні асоціати, екстрагуються чотирьоххлористим вуглецем.

Барбітурати в основному застосовуються як снодійні, проти судомні та заспокійливі засоби.

Барбаміл

(амитал-натрій, амобарбітал-натрій, амілобарбітал-натрій) - 5-ізоаміл-5-етілбарбітурат натрію - білий аморфний гігроскопічний порошок без запаху. Добре розчиняється у воді і етиловому спирті, практично не розчиняється у діетиловому ефірі, екстрагується органічними розчинниками з кислих водних розчинів.

Барбітал

(веронал) -5,5-діетілбарбітуровая кислота, являє собою білий кристалічний порошок. Як фармацевтичний препарат застосовується натрієва сіль барбитала, яка називається медінал. Барбітал розчиняється в етиловому спирті (1: 15), діетиловому ефірі (1: 40), хлороформі (1: 75), воді (1: 160).

Фенобарбітал

(люмінал)-5-феніл-5-етілбар-бітуровая кислота - білий кристалічний порошок слабогорького смаку, розчиняється в етиловому спирті (1: 15), хлороформі (1: 50), в розчинах лугів, слабо розчиняється у воді (1: 1000).

Етамінал-натрій

(нембутал, пен-тобарбітал-натрій, пентан) - 5-етил-5-(2-аміл)-барбітурати натрію - являє собою білий порошок, розчинний у воді і етиловому спирті, практично не розчинна у діетиловому ефірі. Етамінал екстрагується органічними розчинниками з кислих водних розчинів.

Бензонал

(бензобарбітал) - 1-бензо-іл-5-етил-5-фенілбарбітуровая кислота - являє собою білий кристалічний порошок гіркого смаку.

 

Гексенал

(евіпан натрію) - 1,5-диметил-5-(циклогексен-1-іл)-барбітурати натрію - являє собою натрієву сіль гексобарбіталу. Це біла або злегка жовтувата піноподібних гірка маса. Під впливом вологи повітря гексенал розпливається, а під впливом вуглекислого газу - розкладається. Добре розчиняється у воді, етиловому спирті і хлороформі, слабо - у діетиловому ефірі. Гексенал екстрагується органічними розчинниками з кислих водних розчинів.

Метаболізм барбітуратів на прикладі барбамілу:

 

Саліцилати застосовуються як знеболюючі, протизапальні засоби:

Саліцилова кислота Аспірин Натрію саліцилат

 

Метилсаліцилат Саліциламід

Якісне виявлення саліцилатів:

1. з бромною водою:

2. з заліза хлоридом: рН=1,8-2,5 – синьо-фіолетове; рН=4-8 – червоно-бурий; рН=8-11 – жовтий:

3. реакція утворення метилсаліцилату:

4. з нітратом заліза в сечі – пурпурне забарвлення

5. з реактивом триндлера в сечі або плазмі – пурпурне

Метаболізм на прикладі фенацетину:

Кількісне визначення: спектральні методи (УФ, спектрофотометрія), хроматографічні методи (ТШХ, ГРХ).

 

58. Группа соединений, которые изолируются экстракцией органическими растворителями, - пестициды. Использование в сельском хозяйстве. Особенности изолирования из органов трупа и биологических жидкостей, реакции определения и методы количественного определения. Отрицательные стороны использования пестицидов для человека и окружающей среды. Проблема остаточных количеств пестицидов.

«Пестициди» - широке поняття, що охоплює безліч хімічних речовин, які так чи інакше гнітюче впливають на живу природу.

Масове застосування пестицидів поширилося після Другої світової війни, коли в більшості країн були складності з продовольством і важка епідемічна ситуація. Здавалося, що пестициди легко та просто вирішують обидві проблеми. Досить скоро чарівне зачарування розсіялося, але прагнення до легких шляхів виявилося таке, що, незважаючи на множаться свідоцтва проти пестицидів, їх виробництво з середини 1940-х років до середини 1980-х стабільно зростала. На початок 1990-х зростання трохи сповільнився, але потім знову підстрибнув в 1994 г, досягнувши обсягу продажів в 27,8 млрд доларів (що відповідає обсягу більш ніж в 2,5 млн т), на цей раз -. За рахунок країн Азії та Латинської Америки. Ці два регіони споживають зараз третину виробляються у світі пестицидів, і прогнозується подальше зростання. При цьому за даними на 1990 р. в країнах, що розвиваються щорічно відбувається 25 млн випадків гострих отруєнь сільськогосподарських робітників пестицидами. Усього ж у світі, за оцінкою Всесвітньої організації охорони здоров'я, пестициди забирають в рік 20 000 життів.

Отруєння людей пестицидами поділяються на гострі та хронічні, і оцінити кількісно ті й інші надзвичайно складно. Хронічні отруєння взагалі поки що не піддаються кількісній оцінці (хоча ясно, що вони численні), що ж стосується гострих, то їх кількість офіційною статистикою різних країн регулярно занижується. За оцінкою американських дослідників, до 40% людей, професійно пов'язаних з виробництвом та застосуванням пестицидів, судячи з біохімічними показниками крові, мають ознаки серйозного отруєння. Це, однак, не єдина група ризику, піддається небезпеці з боку пестицидів. До них відносяться також люди, що живуть в околицях місць застосування пестицидів; споживачі, які отримують пестициди в продуктах харчування, ті, хто п'є воду з джерел, що знаходяться поруч з похованнями невикористаних та заборонених пестицидів, та інші.

Ізолювання хлорорганічних пестицидів: