Заглавная страница Избранные статьи Случайная статья Познавательные статьи Новые добавления Обратная связь КАТЕГОРИИ: АрхеологияБиология Генетика География Информатика История Логика Маркетинг Математика Менеджмент Механика Педагогика Религия Социология Технологии Физика Философия Финансы Химия Экология ТОП 10 на сайте Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрацииТехника нижней прямой подачи мяча. Франко-прусская война (причины и последствия) Организация работы процедурного кабинета Смысловое и механическое запоминание, их место и роль в усвоении знаний Коммуникативные барьеры и пути их преодоления Обработка изделий медицинского назначения многократного применения Образцы текста публицистического стиля Четыре типа изменения баланса Задачи с ответами для Всероссийской олимпиады по праву Мы поможем в написании ваших работ! ЗНАЕТЕ ЛИ ВЫ?
Влияние общества на человека
Приготовление дезинфицирующих растворов различной концентрации Практические работы по географии для 6 класса Организация работы процедурного кабинета Изменения в неживой природе осенью Уборка процедурного кабинета Сольфеджио. Все правила по сольфеджио Балочные системы. Определение реакций опор и моментов защемления |
Определение гаплотипа главного комплекса гистосовместимости
Цель работы: закрепление теоретического материала по изучаемой теме, овладение навыками работы с оснащением для постановки лимфоцитотоксического теста, освоение лимфоцитотоксического теста.
Оборудование, приборы, принадлежности: микроскоп, холодильник, термостат, планшеты Терасаки, микрошприц, автоматические дозаторы с наконечниками, буферные растворы, антисыворотки к молекулам МНС, трипановый синий, вазелиновое масло, исследуемые образцы лимфоцитов. Сведения из теории Типирование молекул и/или генов ГКГС представляет собой чрезвычайно важную задачу, позволяющую решить ряд иммунодиагностических проблем. Типирование ГКГС используют в трансплантологии, при диагностике аутоиммунных заболеваний, а также в научно-исследовательских целях (при исследовании процессов эволюции и становления рас и народностей), причем варианты типирования ГКГС различны как по определяемым параметрам, так и по решаемым задачам: Таблица 6.1 Области применения типирования молекул и генов главного комплекса Гистосовместимости
Методы типирования антигенов HLA (или ГКГС человека) условно можно разделить на 2 группы: оценка антигенной специфичности молекул HLA (А) и и идентификация локусов генов, характерных для индивидуума (В), в соответствии рисунком 6.1. А.Определение антигенов HLA реципиента: Серологические методы Основной серологический метод типирования антигенов HLA – лимфоцитотоксический тест. Метод заключается в следующем: 1) к сывороткам против разных антигенов HLA добавляют по 2000 исследуемых лимфоцитов; 2) после инкубации добавляют комплемент (его источником может служить кроличья сыворотка); 3) лимфоциты, несущие антиген, против которого направлена сыворотка, под действием комплемента разрушаются; 4) затем к лимфоцитам добавляют краситель, который окрашивает только живые клетки. Результат оценивают по относительному числу погибших лимфоцитов. Основным недостатком является большой требуемый объем крови: для типирования антигенов класса I необходимо не менее 15 мл, а для типирования антигенов класса II – не менее 30 мл крови. Получение диагностических сывороток – трудоемкий и дорогостоящий процесс. Он сводится к исследованию большого количества проб сывороток от многорожавших женщин с помощью панелей лимфоцитов, типированных по антигенам HLA. Особенно трудно получить сыворотки к редким антигенам HLA. При оценке результатов серологического типирования антигенов HLA необходимо учитывать, какая лаборатория его проводила и качество используемых сывороток. Наименее доступны сыворотки к антигенам HLA класса II, особенно к антигенам HLA-DP.
Все варианты постановки тестов на комплементзависимую цитотоксичность (лимфотоксичность) основаны на использовании микротехники, предложенной американским исследователем П. Терасаки: шестиствольный шприц для раскапывания сывороток, шприц для раскапывания комплемента, одноствольный шприц с диспенсером, планшет Терасаки, планшет Меллера для техники двойной флуоресцентной окраски. Пластиковые микропробирки для разлива сывороток (1 мл) и комплемента (2 мл).
|
||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2017-02-10; просмотров: 163; Нарушение авторского права страницы; Мы поможем в написании вашей работы! infopedia.su Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав. Обратная связь - 18.223.134.29 (0.004 с.) |