Исследование системы комплемента

Цель работы: закрепление теоретических знаний по теме, освоение навыков исследования параметров системы комплемента

Оборудование, приборы, принадлежности: центрифуга, холодильник, спектрофометр, центрифужные и химические пробирки, автоматические дозаторы и наконечники к ним, исследуемые образцы сыворотки крови, реагенты к компонентам комплемента, эритроциты барана, буферные растворы.

 

Сведения из теории

Система комплемента, представляющая собой совокупность белков сыворотки крови, способных к каскадной активации при действии инициирующих факторов, относится к одной из наиболее значимых в организме физиологических систем. Её роль в реакциях видового и антигенспецифического иммунитета определяется способностью реагировать на достаточно широкий круг активаторов, а также выраженными функциональными взаимодействиями с другими гомеостатическими системами организма. Определение количественных и функциональных параметров СК имеет диагностическое значение при ряде патологических состояниях человека, в частности – при генерализованных и системных инфекционных процессах, аллергических, псевдоаллергических и аутоиммунных заболеваниях, в иммунопатогенезе которых активация СК имеет важное значение. Исследование СК включает 3 взаимодополняющих направления (таблица 2.1.)

 

Таблица 2.1.

Основные направления исследования системы комплемента

 

Направления исследования	Методы исследования
1. Определение концентрации основных компонентов системы комплемента	Серологический метод (реакция Манчини) или методы турбидиметрии и нефелометрии
2. Определение функциональной активности путей активации и отдельных компонентов комплемента	Функциональный метод – метод гемолитического титрования и его варианты
3. Определение концентрации субкомпонентов, не участвующих в каскаде активации (Ba, C4a, C3a, C5a)	Варианты иммунохимического анализа - иммуноферментный анализ (ИФА) или радиоиммунный анализ (РИА)

 

Диагностическое значение данных 3 направлений в исследовании системы комплемента также различно, получаемая информация дополняет друг друга (табл. 2.2).

Таблица 2.2

Основные параметры, определяемые при оценки функциональной активности системы комплемента

Направления исследования	Значение определяемых параметров
1. Определение концентрации основных компонентов СК	Есть возможность регистрации резкого снижения концентрации компонентов, что важно для констатации дефицита системы комплемента. Тесты диагностически значимы для заболеваний печени, ангионевротического отека (при дефиците С1-ингибитора). Кроме этого, снижение концентрации компонентов комплемента развивается при реакции активации системы и потреблении комплемента, при некоторых аутоиммунных заб-ниях
2. Определение функциональной активности путей активации и отдельных компонентов	Позволяет определить достаточность функциональной активности СК, что важно при диагностике системных аутоиммунных заболеваний, острых и хронических инфекционных заболеваниях, сопровождающихся иммунопатологическими реакциями
3. Определение концентрации субкомпонентов, не участвующих в каскаде активации (Ba, C4a, C3a, C5a)	Позволяет определить, по какому пути происходит активация СК и связано ли снижение активности или концентрации СК с ее дефектами, или это снижение – результат активации и потребления компонентов

 

Принцип метода определения функциональной активности отдельных компонентов

Комплемента

Принцип метода заключается в использовании специальных реагентов (R). Реагент представляет собой сыворотку крови человека (приготавливают из пула сывороток крови, т.е. из смеси сыворотки крови, полученных от многих доноров), из которой физико-химическим методом избирательно удален конкретный компонент комплемента. В этом случае добавление реагента к исследуемым образцам сыворотки крови ограничивает активацию комплемента только тем содержанием компонента, который присутствует в исследуемом образце, а значит – определяет уровень гемолитической активности комплемента в целом (рисунок 2.1).

 

 

Рисунок 2.1 Схема определения функциональной активности С2