Схема микробиологической диагностики бруцеллеза

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, желчь, моча, костный мозг, молоко, синовиальная жидкость, ликвор

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ, БИОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

 

Бактериологический метод	Биологический	Серологический метод
I ЭТАП: 1. Посев на печеночный бульон в 2 флакона. Инкубация при 37^оС в течение месяца (один флакон в анаэробных условиях). Каждые 4-5 дней производят посев на сывороточный или картофельный агар с добавлением сыворотки. II ЭТАП: 1. Изучение характера роста. 2. Отбор подозрительных колоний. 3. Мазок, окраска по Граму, микроскопия. 4. РА с бруцеллезными диагностическими сыворотками.. 5. Посев на скошенный агар. Инкубация при 37^оС 48 часов. III ЭТАП: 1. Контроль чистоты культуры: а) визуально; б) микроскопически. 2. Идентификация выделенной культуры: а) образование H2S;. б) способность роста в присутствии CO2; в) определение бактериостатического действия красок (фуксин, тионин). 3. РА с монорецепторными сыворотками (A, M, R). 4. Изучение чувствительности к специфическим бактериофагам (Тв, ВК2, Wв, Fi). IV ЭТАП: Учет полученных результатов. Окончательный ответ.	I ЭТАП: Заражение чувствительных животных (морских свинок подкожно, внутрибрюшинно). Наблюдение в течение 1-2 месяцев II ЭТАП: 1. Вскрытие животных, изучение патоморфологических изменений в тканях и органах. 3. Исследование крови на наличие возбудителя по схеме бактериологического метода. 4. Выявление специфических антител в сыворотке крови. Метод овокультур: введение исследуемого материала в желток свежего куриного яйца или в желточный мешок куриного эмбриона, инкубация при 37^оС в течение 5 дней, посев на питательные среды.	1. РА: а) реакция Хеддельсона; б) реакция Райта. 2. РСК. 3. РПГА. 4. РИФ (непрямой метод). 5. Опсонофагоцитарная реакция Штритера. 6. Реакция Кумбса. 7. РДП. 8. РНАт. 9. ИФА. IgM, IgG дифференцируют с помощью цистеиновой пробы.
Аллергологический метод
Кожно-аллергическая проба с бруцеллезным аллергеном (проба Бюрне), РЛЛ (реакция лизиса лейкоцитов сенсибилизированного организма в присутствии антигена)
Молекулярно-биологический метод
1. ПЦР.

ТАБЛИЦА: Дифференциальные признаки бруцелл

№№ п/п	Вид	Потребность CO2	Рост на среде с красителями	Продукция H2S
фуксин	тионин
1.	Br. melitensis	-	+	+	-
2.	Br. abortus	+	+	-	+
3.	Br. suis	-	-	+	+

СХЕМА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СЫПНОГО ТИФА

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, переносчики

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ, БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

 

Бактериоскопический метод	Бактериологический метод	Серологический метод
1. Мазок, окраска по Романовскому-Гимзе, микроскопия (риккетсии окрашиваются в разные оттенки голубого цвета с включениями красного цвета). 2. Мазок, окраска по Маккиавелло-Здродовскому, микроскопия (риккетсии ярко-красного цвета, фон – синий). 3. Мазок, окраска по Морозову, микроскопия (риккетсии окрашиваются в темно-коричневый или черный цвет, фон - бесцветный).	I ЭТАП: Заражение: а) 6-7 дневных куриных эмбрионов в желточный мешок; б) культуры клеток куриного эмбриона, почек обезьяны II ЭТАП: Индикация: а) гибель куриных эмбрионов; б) образование бляшек в культуре клеток. III ЭТАП: Идентификация риккетсий: а) окраска по Маккиавелло-Здродовскому, микроскопия; б) ИФА, РНГА, РА, РИФ.	1. РА 2. РСК 3. РНГА 4. ИФА 5. РИФ (РНИФ) Для дифференциальной диагностики первичного сыпного тифа и болезни Брилля-Цинссера (рецидив сыпного тифа), сыворотку больного обрабатывают 2-меркаптоэтанолом или цистеином, разрушающие дисульфидные связи иммуноглобулинов класса М. При первичном сыпном тифе наблюдается снижение титра антител в обработанной сыворотке; при болезни Брилля - Цинссера – титр антител в обеих сыворотках не меняется.
Молекулярно-биологический метод
1. ПЦР. 2. Рестрикционный анализ. 3. ДНК-гибридизация.