Схема микробиологической диагностики туберкулеза

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: мокрота (трехкратное взятие: утром в присутствии персонала, вечером того же дня, утром следующего дня), гной, моча, СМЖ, промывные воды желудка у детей, плевральная жидкость, кусочки органов, промывные воды бронхов, каловые массы, менструальная кровь

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ, БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), БИОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ, АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

 

Бактериоскопический метод	Бактериологический метод	Биологический метод
1. Концентрация микобактерий туберкулеза в исследуемом материале методом седиментации или флотации. 2. Фиксированный препарат, окраска по Граму, микроскопия. 3. Фиксированный препарат, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 4. Фиксированный препарат, окраска аурамином, люминесцентная микроскопия, лазерная флюоресценция.	I ЭТАП: 1. Посев на питательные среды: Левенштейна-Йенсена, Петраньяни, Финна-II. Инкубация при 37^оС в течение 1-3 месяцев, просматривая каждую неделю. II ЭТАП: 1. Изучение характера и скорости роста с определением КОЕ: «+» - 1-20 колоний, «++» - 21-100 колоний, «+++» - 101-200 колоний, «++++» - более 200 колоний. 2. Отбор подозрительных колоний (R-форма). 3. Мазок из подозрительных колоний, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 4. Проведение проб на уреазу, каталазу, нитратредуктазу, ниацинового теста (идентификация МБТ и НТМБ). 5. Определение чувствительности к химиопрепаратам методом серийных разведений, ПЦР. III ЭТАП: Учет полученных результатов. Окончательный ответ. (МБТ «Mycobacterium tuberculosis complex»: Mycobacterium tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canettii, M. caprae, M. pinnipedii, M. mungi; НТМБ «нетуберкулезные микобактерии»: Mycobacterium avium complex, M. xenopi, M. kansasii, M. fortuitum и др.).	I ЭТАП: Заражение морских свинок в паховую область. Наблюдение 6-10 дней II ЭТАП: 1. Оценка местных изменений: увеличение регионарных лимфатических узлов и образование незаживающей язвы с густым гноем. 2. Мазки из гноя и лимфатических узлов, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия. 3. Эвтаназия, патолого-анатомическое исследование (обнаружение бугорков в лимфатических узлах брюшины и бронхов, в селезенке и почках). 4. Заключение.
Серологический метод	Молекулярно-биологический метод
1. РСК 2. РПГА 3. РИА 4. РДП 5. ИФА 6. РИФ 7. РЛА 8. TB-Spot (тест-гребенка)	1. ПЦР. 2. Микробиочипы. 3. ДНК-гибридизация. 4. Рестрикционный анализ. 5. Секвенирование 16S rDNA и ITS – региона МБ. 6. Жидкостная хроматография.
Аллергологический метод
Кожно-аллергическая проба с туберкулином (проба Манту, гамма-интерфероновый тест: IGRA in vitro, и др.), РБТЛ, РТМЛ.

 

 

Ускоренные методы диагностики туберкулеза.

А. Метод микрокультур по Прайсу: I ЭТАП: 1. Мазок из исследуемого материала, высушивание при 37^оС 5-10 мин, обработка 6% серной кислотой, нейтрализация раствором едкого натрия, промывание физиологическим раствором. 2. Погружение во флаконы с цитратной кровью в разведении 1:4 – 1:8. Инкубация при 37^оС 7-10 дней. II ЭТАП: 1. Окраска мазков по методу Циля-Нильсена. 2. Микроскопия под малым увеличением (микроколонии у вирулентных штаммов имеют вид «жгутов» красного цвета).

Б. Метод с применением автоматических систем BACTEC, MB/BacT

ПРИМЕЧАНИЕ: Для экспериментального заражения и посевов на питательные среды исследуемый материал обрабатывают минеральными кислотами с целью освобождения от посторонней микрофлоры.
21. СХЕМА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПРЫ

 

МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: соскоб со слизистой оболочки носа (с обеих сторон перегородки), с поверхности кожи, содержимое лепрозных узлов, мокрота, отделяемое язв, кровь (в период лихорадки).

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ: БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКИЙ (ОСНОВНОЙ), БИОЛОГИЧЕСКИЙ, СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ, АЛЛЕРГОЛОГИЧЕСКИЙ, МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИЙ

 

Бактериоскопический метод	Биологический метод	Серологический метод	Аллергологический метод
1. Мазок, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия (бактерии располагаются в виде пачек-сигарет или красных шаров), определение бактериоскопического индекса: 0 – отсутствие микобактерий в 100 полях зрения, 1»+» - от 1 до 10 бактерий в 100 полях зрения, 2»+» - от 1 до 10 в 10 полях зрения, 3»+» - от 1 до 10 в 1 поле зрения, 4 «+» - от 10 до 100 в 1 поле зрения, 5 «+» - от 100 до 1000 бактерий в 1 поле зрения, 6 «+» - от 1000 и более микробов в 1 поле зрения; определение морфологического индекса: соотношение гомогенных и зернистых форм. 2. Бактериоскопический метод в сочетании с гистологическим исследованием (структура гранулем, определение ТТ- или LL- типов лепры).	I ЭТАП: Заражение экспериментальных животных: а) броненосцев (внутрибрюшинное введение кусочков лепромы); б) белых мышей (введение исследуемого материала в подушечку лапки мышей по методу Шепарда). II ЭТАП: Идентификация возбудителя: а) исследование патоморфологических изменений в тканях и органах; б) мазки-отпечатки, окраска по Цилю-Нильсену, микроскопия; в) определение ДОФА – оксидазы. г) ИФА, ПЦР.     ТТ – туберкулоидный тип лепры. ЛЛ – лепроматозный тип лепры.	1. РСК. 2. РНГА. 3. ИФА с целью выявления антител к фенольному гликолипиду. 4. РБТЛ с фенольным гликолипидом.	Проба Митсуда: 0,1 мл лепромина А (взвесь лепроязвенного узла, растертого в ступке и длительно кипяченого) - внутрикожное введение; через 48-72 часа появляется эритема и небольшая папула (ранняя реакция, исчезает к концу первой недели); через 10-14 дней – образуется узелок (поздняя реакция); через 30 дней - узелок 1-2 см в диаметре с некрозом в центре. Кожно-аллергическая проба с фенольным гликолипидом. Проба Фернандеса: реакция на введение водорастворимых фракций лепромина А (получены из тканей зараженных лепрой броненосцев).
Молекулярно-биологический метод
1. ПЦР 2. Иммуноблотинг